抗生素诱导的微生物组耗损后促进空肠弯曲菌在小鼠肠道定植

目的通过抗生素诱导肠道微生物组耗损建立一种空肠弯曲菌在C57BL/6小鼠肠道定植的方法。方法将36只C57BL/6小鼠分为正常组、对照组及实验组,头孢哌酮钠舒巴坦钠(50 mg/mL)连续灌胃2 d后,灌胃空肠弯曲菌200μL,在建模后第1~3天,收集肠道内容物进行16S rDNA法分析细菌多样性,收集建模后1~7 d的动物粪便,探针法qPCR检测粪便空肠弯曲菌HipO基因,取建模后第1~3天及第7天小鼠肠道组织,免疫荧光法检测肠弯曲菌定植,HE染色观察病理学改变。结果建模后实验组回肠的乳酸杆菌属、盲肠及结肠的拟杆菌属被抑制,肠球菌属相对丰度较高,第1天实验组检测到较高丰度的弯曲菌属。在建模后第1~3天,实验组动物粪便中能检测到较高拷贝数的空肠弯曲菌,肠道管腔内可见明显的免疫荧光标记的空肠弯曲菌,而肠道黏膜基本完整,未见明显的炎症细胞浸润。结论经头孢哌酮钠舒巴坦钠诱导的微生物组耗损后能促进空肠弯曲菌在小鼠肠道内的短期定植。

多肽C16联合COMP-Ang1通过Ang1/Tie2-PI3K/AKT通路促进HUVEC的迁移及血管化

目的:探讨多肽C16能否有效通过Ang1/Tie2-PI3K/AKT通路促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的迁移及血管化。方法:体外培养HUVEC,实验分为Control组、Tie2激酶抑制剂组(Tie2 KI组)、Tie2激酶抑制剂+C16/COMP-Ang1组(Tie2 KI+C16/COMP-Ang1组)。通过实时无标记细胞分析检测C16/COMP-Ang1对细胞增殖的影响,划痕试验和小管形成检测HUVEC迁移和血管化能力,鬼笔环肽检测细胞骨架重排能力,Western blot检测Tie2及AKT的磷酸化水平,探讨多肽C16/COMP-Ang1是否通过Ang1/Tie2-PI3K/AKT通路来促进HUVEC的迁移及血管化。结果:C16/COMP-Ang1提高HUVEC的Tie2及AKT的磷酸化水平,与单用Tie2抑制剂组比较,使用C16/COMP-Ang1后,细胞的迁移能力提高,“管道样”结构形成增多,细胞内微丝束数量增加,细胞增殖能力也明显上升。结论:C16/COMP-Ang1能通过Ang1/Tie2-PI3K/AKT通路促进HUVEC的迁移及血管化。

黄芪配伍川芎嗪对2型糖尿病大鼠大血管的保护作用

目的探讨黄芪或川芎嗪单用是否防治糖尿病大血管病变以及两药合用是否可增强其作用。方法建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,动物分组:正常对照组、模型组、川芎嗪处理组、黄芪组、黄芪配伍川芎嗪组。分别观察光镜和电镜下主动脉形态以及血液生化学检测。结果光镜和电镜下,川芎嗪组、黄芪组、黄芪配伍川芎嗪组大鼠主动脉内皮细胞与T2DM模型组比较都有明显改善。黄芪或川芎嗪单用以及两药合用对T2DM大鼠糖脂代谢紊乱密切相关的指标有明显改善作用。结论黄芪或川芎嗪单用以及两药合用对T2DM大血管损伤有保护作用,对糖脂代谢紊乱具有明显的调节作用,为中药防治糖尿病大血管病变提供实验依据。

慢病毒介导神经生长因子过表达诱导脐带间充质干细胞向神经元样分化

目的探讨神经生长因子(NGF)过表达慢病毒转染脐带间充质干细胞(UMSCs)对细胞分化的影响。方法分离培养UMSCs,流式细胞术鉴定后利用慢病毒载体感染细胞,使其过表达NGF,72h后,通过免疫荧光检测NGF和GFP的表达,Western blot检测NGF蛋白表达水平,ELISA法检测细胞上清液NGF的含量,qRT-PCR检测相关神经因子基因的表达。结果流式细胞术显示细胞表面CD105、CD90、CD73阳性而CD34、CD45、CD19和CD14阴性,鉴定为脐带间充质干细胞。慢病毒转染后细胞NGF和GFP阳性,细胞内NGF和培养液中b-NGF含量都显著性增加,NGF、nestin、GFAP、MAP2及tubulin等mRNA的表达显著性增加。结论神经生长因子过表达慢病毒转染脐带间充质干细胞会促使细胞向神经元样细胞分化,可应用于后续研究。

多肽C16/Ang1联合胎盘间充质干细胞对视神经脊髓炎大鼠的保护作用

目的:评价多肽C16/血管生成素1(Ang1)联合胎盘来源间充质干细胞(PDMSCs)治疗大鼠视神经脊髓炎(NMO)的效果。方法:分离培养大鼠PDMSCs,通过脑室及脊髓蛛网膜下腔注射水通道蛋白4(APQ4)抗体与人补体C5蛋白诱导大鼠NMO模型,将大鼠分为5组,即正常组、NMO模型组、PDMSCs组、C16/Ang1组以及C16/Ang1+PDMSCs组。对治疗后大鼠进行8周的神经行为学评分,采用免疫组化观察脊髓炎症因子CD48的表达,神经丝蛋白200及髓磷脂碱性蛋白免疫荧光双染评价脱髓鞘和轴索缺失,Nissl染色计数脊髓神经元数量,Evans blue染色评估血管通透性,ELISA检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量变化,Western blot检测胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)、AQP4以及caspase-3表达水平。结果:C16/Ang1+PDMSCs组神经行为学评分高峰出现延后,并在8周时评分出现显著性下降(P<0.05);炎症细胞的实质浸润和脊髓神经元丢失减少(P<0.05),腰段脊髓的脱髓鞘和轴索缺失评分下降(P<0.05)及血管通透性降低;促炎因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达降低(P<0.05),抗炎因子IL-10的表达升高(P<0.05);脊髓组织中GFAP和APQ4的表达上升(P<0.05),caspase-3则下调(P<0.05)。结论:C16/Ang1联合PDMSCs能够有效延缓NMO的疾病进程,其通过抑制炎症细胞浸润及内源性细胞凋亡,促进神经功能的修复。

脐带间充质干细胞对高氧致新生大鼠肺损伤的保护作用

目的探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对高氧致新生大鼠肺损伤的保护作用及其分子机制。方法将出生24 h内的96只新生Sprague-Dawley大鼠随机分为空气对照组、UC-MSCs对照组、支气管肺炎发育不良(BPD)模型组、UC-MSCs治疗组,每组24只。比较各组大鼠体重、支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白、总细胞计数、中性粒细胞计数及外周血白细胞介素(IL)-1β、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)指标水平变化,并对各组肺组织原纤维蛋白-1(FBN1)、FBN2、Fibulin mRNA表达水平进行比较。结果UC-MSCs治疗组大鼠第14、21天体重与BPD模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。BPD模型组、UC-MSCs治疗组大鼠BALF中总蛋白、总细胞计数及中性粒细胞计数水平分别与空气对照组、UC-MSCs对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。UC-MSCs治疗组大鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞计数及总蛋白水平均明显低于BPD模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。UC-MSCs治疗组大鼠肺泡平均截距低于BPD模型组,而辐射状肺泡计数高于BPD模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。UC-MSCs治疗组大鼠外周血IL-1β、IL-8、TNF-α、MDA水平及SOD、MPO活性与BPD模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。UC-MSCs治疗组大鼠肺组织中FBN1、FBN2、Fibulin mRNA表达水平较BPD模型组明显下调,且与其他各组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论UC-MSCs可通过抑制高氧暴露所致机体氧化应激反应和肺部炎症因子释放,以及阻断肺组织弹性蛋白平衡絮乱,从而减轻新生大鼠高氧肺损伤。

空肠弯曲菌AhpC蛋白B细胞抗原表位预测及抗原性分析

目的利用生物信息学预测分析空肠弯曲菌AhpC的跨膜结构、信号肽及B细胞抗原表位,并分析空肠弯曲菌AhpC优势B细胞抗原表位的抗原性,为后续疫苗研究提供依据。方法使用TMHMM Server V2.0、SignalP 4.1、IEDB等生物信息学分析软件对空肠弯曲菌AhpC进行蛋白跨膜结构预测、信号肽及线性B细胞抗原表位进行预测分析。分别以原核表达的空肠弯曲菌AhpC蛋白和化学合成的表位肽为抗原,空肠弯曲菌AhpC抗体为一抗,通过ELISA及Dot blot对优势线性B细胞抗原表位的抗原性进行分析及筛选。结果生物信息学预测结果表明AhpC定位于空肠弯曲菌外膜,无跨膜结构,无信号肽,同时该蛋白中存在7个的B细胞线性表位。经Dot blot和ELISA检测发现其中AhpC4-16表位具有较强的抗原性,为优势表位。结论空肠弯曲菌AhpC保守存在于细菌表面,存在1个优势的B细胞线性抗原表位(AhpC4-16),可用于后续的疫苗开发研究。

翠云草黄酮类化合物对哮喘大鼠模型中卵清蛋白诱导的气道炎症的改善作用

翠云草黄酮类化合物具有抗菌、抗炎、抗病毒等多种功效,其在治疗肺部疾病方面具有较高的应用价值。为考察翠云草黄酮类化合物对哮喘大鼠模型中卵清蛋白诱导的气道炎症的改善作用及机制,本研究建立了卵清蛋白诱导的哮喘大鼠模型,然后按照100 mg/kg的剂量对大鼠灌胃翠云草黄酮类化合物溶液,共灌胃1周。苏木精和伊红(HE)染色显示翠云草黄酮类化合物有效降低了大鼠肺组织中炎症细胞浸润程度(p<0.05),翠云草黄酮类化合物可降低大鼠血清IFN-γ、TNF-α和IL-6水平,并提高IL-4、IL-10和IL-13水平(p<0.05)。此外,翠云草黄酮类化合物显著抑制大鼠血清中总IgE和卵清蛋白特异性IgE水平(p<0.05)。免疫染色显示,翠云草黄酮类化合物显著抑制大鼠肺组织的Eotaxin阳性表达(p<0.05)。RT-PCR和Western blotting结果显示,翠云草黄酮类化合物可以显著增加哮喘大鼠肺组织中T2R10的表达,并降低IP3R1、Orai1、NFATc1和c-Myc的表达。本研究表明翠云草黄酮类化合物可有效减弱哮喘大鼠模型的肺组织病变程度,抑制炎症介质和炎症趋化因子的表达。其对哮喘的治疗作用与调节调节T2R10信号通路有关。

玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对人卵裂期胚胎冷冻复苏效果及临床结局的比较

目的比较辅助生殖技术中玻璃化和程序化2种冷冻方法对卵裂期胚胎的冷冻复苏效果及临床结局。方法对3396个玻璃化冷冻周期和685个程序化冷冻周期的相关资料进行回顾性统计学分析,比较解冻后胚胎复苏率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎着床率等指标。结果玻璃化冷冻后的胚胎复苏率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎着床率均显著高于程序化冷冻,且复苏周期移植取消率显著低于程序化冷冻。结论相对于程序化冷冻法,玻璃化冷冻法具有更好的冷冻复苏效果以及临床结局,更适用于卵裂期胚胎的冷冻保存。