硫代反义寡聚核苷酸在线性聚丙烯酰胺-毛细管电泳中的分离行为

通过对硫代反义寡聚核苷酸在毛细管线性聚丙烯酰胺胶 (LPA)中的电泳行为的研究 ,发现在 1 0 %浓度的LPA和 1 0 0mmol LTris borate及 7mol L尿素的缓冲溶液中 (pH =8.2 ) ,这类被分析物质有着较好的分离效果和重现性 ,能使相差一个碱基的硫代反义寡聚核苷酸片断得到基线分离。

大鼠Endostatin在乳酸乳球菌中的克隆与表达大鼠Endostatin在乳酸乳球菌中的克隆与表达

目的 在乳酸乳球菌中克隆与表达大鼠endostatin。方法 采用RNA分离试剂盒从大鼠肾脏组织中提取总RNA ,用RT PCR方法扩增其endostatin基因 ,将该基因克隆进pUC19质粒中 ,转化大肠杆菌DH5a ,提取质粒 ,分离基因 ,酶切后与含有乳酸乳球菌启动子nisin的pLA14 1质粒连接 ,经电击转化 ,将重组质粒转入乳酸乳球菌NZ90 0 0中 ,转化子在含有氯霉素的GM17培养基上培养。用nisin诱导endostatin表达 ,SDS PAGE和Westernblot鉴定表达产物。结果 表达产物相对分子质量约为 14 0 0 0 ,表达量约为 10mg L。结论 在乳酸乳球菌中可以表达出正确的大鼠endostatin重组蛋白 ,为下一步进行重组蛋白的活性检测以及临床实验提供了依据。