PI3K/Akt信号通路在胞内布鲁氏菌存活中的作用

为了检测对PI3K/Akt信号通路在巨噬细胞内布鲁氏菌存活的影响,将布鲁氏菌粗糙型菌株RB51和光滑型菌株S2308分别侵染细胞,应用Western blot技术检测RB51和S2308和对巨噬细胞内p-Akt(S473)和p-Akt(T308)表达的影响;用MTT法检测抑制剂LY294002(LY)对细胞活性的影响;通过菌落计算法,检测抑制剂LY对胞内菌RB51和S2308存活的影响。结果表明,粗糙型菌株RB51和光滑型菌株S2308都可激活PI3K/Akt信号通路,但粗糙型菌株RB51的激活程度显著弱于光滑型菌株S2308(P<0.01);抑制剂LY在小于或等于20μmol/L浓度时不影响细胞活性;抑制剂LY(20μmol/L)可显著抑制光滑型菌株S2308的存活,但不影响粗糙型菌株RB51的存活。本研究表明,PI3K/Akt信号通路在光滑型菌株存活中发挥重要作用。

PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡基因表达的影响

[目的]研究阻断PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡的影响。[方法]用抑制剂LY294002(LY)作用于细胞1 h,然后将布鲁氏菌16 M侵染细胞,应用实时定量PCR检测16 M对巨噬细胞内凋亡相关基因Caspase-3活性和Bax mRNA表达的影响。[结果]阻断PI3K/Akt信号通路可显著提高16 M介导的caspase-3活性和Bax mRNA水平。[结论]PI3K/Akt信号通路可调控布鲁氏菌介导的细胞凋亡。

MyD88在绵羊肺炎支原体感染过程中的作用

为分析MyD88在绵羊肺炎支原体(MO)感染肺泡上皮细胞中的分子机制。用不同浓度的抑制剂ST2825与细胞孵育24h,用MTT法检测细胞活性;MO感染细胞后,于4、8、12、24h收集细胞,利用实时定量PCR检测MyD88mRNA的表达水平。采用不同浓度的MyD88抑制剂ST2825与细胞孵育1h,然后用MO感染细胞,于24h收集细胞,利用实时定量PCR检测白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达水平,用试剂盒检测caspase-3活性、caspase-8活性、H2O2浓度、NO浓度和LDH浓度变化。结果显示,MO于4、8、12、24h显著提高细胞MyD88mRNA表达水平;MO显著提高细胞IL-8mRNA水平、TNF-αmRNA水平、caspase-3活性、caspase-8活性、H2O2浓度、NO浓度和LDH浓度(P<0.01),而ST2825(浓度为10μmol/L和20μmol/L)能够显著降低MO介导的以上指标(P<0.05),表明MyD88在MO感染肺泡上皮细胞过程中发挥重要作用。