骨形态发生蛋白2基因治疗与缓释载体修复骨缺损的比较研究

[目的]比较骨形态发生蛋白2(BMP-2)基因治疗与生长因子缓释方法修复节段性骨缺损效果。[方法]于兔双侧桡骨中段造成1·5cm骨缺损,采用4种方法修复:A组植入转基因骨髓间质干细胞(MSCs)与PLA/PCL(聚乳酸/聚己内酯)支架的复合物;B组植入单纯MSCs与含重组BMP-2的PLA/PCL缓释载体的复合物;C组植入单纯MSCs与PLA/PCL复合物;D组植入单纯PLA/PCL。术后4、8、12周行X线、组织学、生物力学和骨密度等检测。[结果]A组体内植入4周后,成骨细胞和间质细胞呈BMP-2强阳性表达;其成骨速度及成骨质量均明显优于B组,12周时骨缺损完全修复。C组成骨能力较弱,而D组则无新骨形成,残留骨缺损。[结论]BMP-2基因治疗是修复节段性骨缺损的好方法。

缺氧对成人成骨细胞增殖及分化的影响

目的：在缺氧条件下体外培养成人成骨细胞，探讨缺氧对成骨细胞增殖及分化的影响。方法：将手术中取得的成人髂骨骨块，使用酶消化法进行培养，当细胞传至第2代时，建立成骨细胞缺氧模型，用MTT法观察各组成骨细胞增殖活力的变化；用骨钙素放射免疫法分别检测各组骨钙素含量；用激光共聚焦显微镜对两组培养前3d细胞血管内皮生长因子（VEGF）光密度值作定量分析。结果：正常组细胞增殖活力较缺氧组强；缺氧组细胞VEGF的光密度值及骨钙素含量均高于正常组。结论：缺氧抑制成骨细胞增殖，缺氧（1—3d）诱导成人成骨细胞VEGF的高表达并促进成骨细胞的分化。

缺氧对成骨细胞增殖及凋亡的影响

目的:通过在缺氧条件下体外培养成骨细胞,探讨缺氧对成骨细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用酶消化法传代培养乳SD大鼠颅盖骨细胞并建立缺氧模型。用台盼蓝染色法分别计数培养1、3、5、7天的细胞数;用流式细胞仪检测对照组与缺氧1、3、5天的细胞凋亡率。结果:缺氧组的细胞数少于正常氧组;对照组与缺氧1、3、5天的细胞凋亡率逐渐增高。结论:缺氧抑制成骨细胞的增殖,同时促进成骨细胞的凋亡。

生物可降解支架协同纤维蛋白凝胶运载BMP-2基因修复节段性骨缺损

将BMP-2腺病毒载体(Ad-BMP-2)与纤维蛋白凝胶混合后复合PLA／PCL(聚乳酸／聚己内酯)支架,移植修复骨缺损。于新西兰大耳白兔双侧桡骨中段造成1．5 cm骨缺损,采用四种方法进行处理:A组:Ad-BMP-2+纤维蛋白凝胶+PLA／PCL;B组:重组BMP-2+纤维蛋白凝胶+PLA／PCL;C组:对照基因(Ad-Lacz)+纤维蛋白凝胶+PLA／PCL;D组:纤维蛋白凝胶+PLA／PCL。结果表明,术后12周A组缺损区在成骨活跃程度、骨再生量和再生髓腔结构等方面均显著优于B组,其骨缺损得到了较彻底的修复。C、D两组均不能产生骨性愈合。PLA／PCL协同纤维蛋白凝胶运载BMP-2基因修复节段性骨缺损可达到较好的效果。

缺氧诱导成骨细胞VEGF的表达及其对成骨细胞分化的影响

目的:研究在缺氧条件下体外培养成骨细胞诱导血管内皮生长因子(VEGF)的表达,及其对成骨细胞分化 的影响。方法:酶消化法传代培养乳SD大鼠颅盖骨细胞并建立缺氧模型,采用激光共聚焦显微镜检测VEGF的表 达;骨钙素放射免疫法检测骨钙素含量。结果:在培养的前3d,缺氧组细胞VEGF的光密度值及骨钙素含量均高于 对照组。结论:缺氧(1～3d)诱导成骨细胞VEGF的高表达并促进成骨细胞的分化。

骨形态发生蛋白2基因转染诱导异位成骨的机制研究

目的观察骨形态发生蛋白2基因直接及间接转染诱导异位成骨的效果和机制。方法1.将携带骨形态发生蛋白-2基因的腺病毒载体(Ad-BMP-2)直接注射到裸鼠肌内诱导成骨;2.Ad-BMP-2体外转染人骨髓间质干细胞(hBMSC)后种植异种骨支架(BCB)植入裸鼠皮下。实验分为5组:①BMP-2基因转染细胞+BCB;②对照基因转染细胞+BCB;③未转染细胞+重组BMP-2+BCB;④未转染细胞+BCB;⑤BCB。术后行X线、免疫组化及原位杂交染色观察BMP-2基因诱导下的成骨方式及成骨机制。结果1.裸鼠肌内注射后有异位成骨,其主要为软骨化骨。2.Y染色体探针荧光原位杂交法(FISH)示踪植入细胞命运,见部分转基因细胞直接参与成骨;骨钙素免疫组化检测见基因表达产生的BMP-2诱导宿主间质细胞向成骨细胞转化。结论BMP-2基因转染的hBMSC不仅作为运载生长因子的工具,而且直接参与成骨,但BMP-2的诱导趋化作用占主导地位。

脊神经前后根的应用显微解剖学研究

目的 探讨脊神经前后根神经小束的分束标准和数目 ,为临床手术提供可靠的依据和新的手术标准。方法 在 15例 (30侧 )成人脊柱标本上 ,对L1～S2节段的脊神经前后根进行形态学观察和显微测量。结果 脊髓圆锥部脊神经根是由根丝逐步汇合而成。应用显微外科技术 ,后根一般可分为 10～ 18小束 ,前根一般分为 6～ 11小束 ,其小束的直径是基本一致 ,数值较为恒定。结论 在高选择性手术 ,脊神经前后根的分束标准应尽量细 ,这样有利于准确切断引起痉挛的Ia类神经纤维 ,一般前根达到 6～ 11小束 ,后根达到

腺病毒载体介导的BMP-2转基因诱导成骨研究进展

骨形态发生蛋白2可诱导具有成骨分化潜能的间充质细胞向成骨细胞分化。腺病毒载体介导的BMP2转基因方法被认为是最有效的BMP2转基因诱导成骨手段。本文参考了大量的有关英文文献,从BMP2腺病毒载体及其介导的BMP2转基因基本途径、成骨诱导研究所取得的成果和存在的问题等几个方面,重点回顾了近五年来的研究进展,并对这一领域的前景进行了一些展望。

骨形态发生蛋白2基因治疗在修复骨缺损中对血管化影响的实验研究

目的观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因治疗在修复骨缺损中对血管化的影响。方法分离培养兔骨髓基质干细胞(MSCs),经BMP-2腺病毒载体转染后复合异种骨支架移植修复1.5cm桡骨缺损。分为5组:①BMP-2基因转染细胞+去抗原牛松质骨支架(BCB);②未转染细胞+重组BMP-2+BCB;③对照基因转染细胞+BCB;④未转染细胞+BCB;⑤BCB。术后48、、12周行微血管墨汁灌注、血管内皮生长因子(VEGF)免疫组化染色、组织学等检测。结果术后4周,基因治疗组骨间血管的密度在周边区域较高,通常每一个骨小梁孔隙中都有一支新形成的小血管;透射电镜见成骨细胞总是毗邻血管内皮细胞而存在,并随着微血管的增生而逐渐向骨细胞发展;间质细胞VEGF表达明显增强。结论BMP-2基因治疗可通过上调VEGF表达,间接诱导移植骨血管化,对骨不连、骨缺损的治疗具有重要意义。