混合式教学实践中的人体解剖学课程思政建设

“课程思政”指的是将思想政治教育融入专业知识中的一种教育理念,2017年由教育部在全国高校推广实行,已经成为当前高等教育改革的焦点和新趋势。将课程思政融入医学教育有助于学生形成良好的医德,在未来建立良好的医患关系[1]。医学生接触人体解剖学较早,在人体解剖学中融入课程思政,对于医德的培养具有“启蒙”意义,而且人体解剖学以正常人体标本为研究学习对象,与思政教育具有天然的亲和力。混合式教学融合了现代与传统教学理念和教学手段,在课程思政建设中取得了良好的效果[2]。

基于临床应用能力培养的局部解剖学课程教学实践

目的培养具有临床思维、初步临床技能和高尚的人文素养的医学应用型人才,以提高其临床岗位胜任力。方法选取2019级临床医学专业本科生,通过完善相关临床线上教学资源,理论授课加强临床联系,增加以临床案例为基础的线下翻转式教学;实验课解剖操作以临床外科手术为导向进行设计,增加制作“小件标本”环节;将课程思政教育贯穿于整个教学过程,实现“早临床,多临床,反复临床”。结果学生学习行为观察到学生积极性和兴趣得到增强,问卷调查结果显示学生临床素质培养效果的满意度较高。结论基于临床应用能力的局部解剖学在临床医学专业的改革,可以提高学生的人文素养、教学效果满意度及学生临床素质能力的培养。

《局部解剖学》课程思政元素的挖掘

局部解剖学是连接基础医学与临床医学的桥梁课程,基于本门课程大体标本解剖的特点,它是实现思政教育目标的重要载体,其特有的教学内容和教学资源,便于将医学人文教育贯穿到理论及实践教学,但目前对于本门课程的相关思政元素挖掘不够,不能进行全方位、全程人文教育,本研究在局部解剖学的实践中进行思政教育,如仪式教育及解剖过程中建立局部与整体统一,理论与实践相联系等思维意识,并且培养同学之间互相沟通、互相合作的团队意识,老师在指导解剖操作的过程中展示的娴熟博学的专业知识及言传身教的敬业精神。在理论授课中,根据教材的编排,按照人体各个局部形态结构所涉及到的思政元素进行挖掘和实践,从而引申出职业素养、创新精神、辩证思维、伦理道德和家国情怀等人文素质的培养。本研究的设计基本实现了基础医学教育引领大学生的思想价值和落实立德树人的根本任务。

人参皂苷Rg1通过抑制NLRP3炎症小体途径减轻氧糖剥夺/复供后小胶质细胞炎症反应

目的探讨人参皂苷Rg1通过NLRP3炎症小体途径对小胶质细胞氧糖剥夺/复供损伤后炎症反应的影响,并进一步研究其抗炎的作用机制。方法将生长状态良好的BV-2小胶质细胞随机分为6组:无处理组(Con),氧糖剥夺/复供组(OGD/R),人参皂苷Rg1低、中、高剂量组(剂量分别为0.1、0.2、0.4 mmol/L,简称Rg1L、Rg1M、Rg1H),MCC950对照组(0.05 mmol/L,MCC950)。采用CCK8法检测细胞增殖;免疫荧光和免疫印迹法检测经不同浓度人参皂苷Rg1和MCC950作用48 h后,BV-2小胶质细胞内NLRP3炎症小体相关蛋白的表达。ELISA检测BV-2小胶质细胞培养液中炎症因子IL-1β、IL-18的表达水平。结果与Con组比较,经缺氧缺糖/复供处理的BV-2小胶质细胞胞质内可见明显的Iba-1绿色荧光表达;OGD/R处理BV-2小胶质细胞2 h后,加入不同浓度人参皂苷Rg1和MCC950培养48 h后,细胞增殖率呈现明显的下降趋势。OGD/R组呈现明显的NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18阳性表达。Rg1L、Rg1M、Rg1H 3组NLRP3蛋白表达水平显著下降,并且随着药物浓度的升高,表达越低。结果表明,与OGD/R组相比,人参皂苷Rg1和MCC950可抑制活化的BV-2小胶质细胞表达NLRP3(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可能通过抑制NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白的表达、干扰NLRP3炎症小体合成,进一步抑制相关炎症因子IL-1β和IL-18的表达水平,从而抑制炎症反应。

大鼠脂肪源性干细胞与三维打印明胶支架的相容性

目的通过观察大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)与三维打印(3DP)及戊二醛交联的明胶支架的相容性,筛选出最适合细胞生长的支架孔径,为进一步构建组织工程化组织或器官提供实验依据。方法采用酶消化法分离提取大鼠ADSCs,并用流式细胞术和多向诱导分化的方法进行鉴定;然后与不同孔径的3DP明胶支架复合培养,并用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察其超微结构,细胞活力分析仪检测其存活率;用MTT法检测二维(2D)与三维(3D)培养对ADSCs细胞活力的影响。结果获得的ADSCs具有多向分化潜能,具备干细胞的基本特征。接种ADSCs到3DP明胶支架后,扫描电子显微镜可看到细胞呈椭圆形或纺锤形,区别于传统二维培养的梭形形态;透射电子显微镜可看到细胞在支架空隙内散在分布,细胞核、细胞器等结构清晰,表明其与支架的相容性良好;90μm孔径的支架细胞存活率最高;3D培养的方法更有利于维持ADSCs的活力。结论 ADSCs与3DP明胶支架的相容性良好,90μm孔径的支架最适合ADSCs的生长。

叶酸缺乏导致小鼠听力障碍机制的实验研究

目的阐明叶酸缺乏后小鼠听力损失的影响因素和机制,为临床诊疗提供依据。方法两组小鼠分别以低叶酸饮食和正常叶酸饮食喂养10周。ABR听力测试。处死动物,心脏抽血检测血清同型半胱氨酸和叶酸量。观察两组小鼠耳蜗形态学变化。免疫印记法分析相关蛋白表达情况。TUNEL法检测小鼠耳蜗细胞凋亡情况。结果分析显示叶酸缺乏组小鼠血清叶酸水平下降,同型半胱氨酸水平升高。ABR检查和耳蜗细胞凋亡数量发现叶酸缺乏组小鼠听力损失严重。免疫印迹检测揭示叶酸缺乏组小鼠比正常组耳蜗同型半胱氨酸升高50%,提示小鼠耳蜗高同型半胱氨酸血症。结论高同型半胱氨酸血症和叶酸缺乏引发小鼠听力损失,与内耳同型半胱氨酸代谢障碍有关。

电针联合威灵仙关节腔内注射对大鼠膝骨关节炎TNF-α、MMP、HA及TIMP-1的影响

目的:探讨电针联合威灵仙关节腔内注射对膝关节骨性关节炎的大鼠模型肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶(MMPs)、透明质酸(HA)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的影响。方法:选择60只SD大鼠,按照随机数字的方法分为4组,对照组(A组),电针治疗组(B组),威灵仙治疗组(C组)和电针联合威灵仙治疗组(D组),每组15只大鼠,A组大鼠仅每日对膝关节利用75%酒精消毒,B组大鼠给予电针治疗,C组大鼠给予威灵仙注射液进行关节腔内注射,D组大鼠利用电针联合威灵仙治疗,对治疗的效果进行对比。结果:4组大鼠经过治疗后,HA、TNF-α、MMPs、足肿胀度数据及TIMP-1均出现了改善,但是D组大鼠的改善程度高于B组与C组,B组与C组又高于A组,数据差异有统计学意义(F=47. 561、58. 996、79. 632、49. 663、50. 657、87. 669、59. 658,P<0. 05),在4组大鼠的肿胀消退时间比较中,数据差异具有统计学意义(F=45. 661,P<0. 05),q检验结果显示,肿胀消退时间为D组低于B组与C组,B组与C组又低于A组。结论:利用电针联合威灵仙关节腔内注射方法干预膝骨关节炎的大鼠模型,可以提升治疗效果,改善TNF-α、MMPs、HA及TIMP-1的浓度状况,值得继续在人体试验方面做深入研究。

褪黑素通过Müller细胞保护糖尿病视网膜神经节细胞的机制

目的探讨褪黑素对糖尿病视网膜Müller细胞的影响及其对视网膜神经节细胞的保护作用。方法 SD大鼠54只随机分为对照组、糖尿病组和褪黑素治疗组,糖尿病组和褪黑素治疗组制造糖尿病模型。造模后,对照组和糖尿病组大鼠腹腔注射体积分数10%乙醇溶液,褪黑素治疗组大鼠腹腔注射褪黑素溶液(10 mg·kg^-1)。3个月后,试剂盒检测视网膜中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)的含量,Western blot检测视网膜中神经胶质酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)的表达变化,免疫组织化学染色观察GFAP阳性染色的空间分布并进行定量分析,高效液相色谱检测视网膜中谷氨酸含量变化,HE染色计数视网膜神经节细胞密度。结果对照组及褪黑素治疗组GFAP免疫阳性染色主要局限于视网膜神经纤维层,而糖尿病组GFAP阳性染色几乎贯穿视网膜全层。与对照组相比,糖尿病组视网膜MDA含量增加而GSH含量减少,GFAP表达增加而GS表达减少,谷氨酸含量增加,视网膜神经节细胞密度明显下降(均为P<0.01)。褪黑素治疗组与对照组各指标相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论褪黑素能抑制糖尿病视网膜的氧化应激反应,恢复视网膜Müller细胞功能酶GS的含量,减少视网膜内谷氨酸堆积,保护视网膜神经节细胞。

YAP信号通路在姜黄素诱导HepG2肝癌细胞系凋亡中的作用

目的探讨姜黄素对Hep G2肝癌细胞系增殖和凋亡的影响及机制。方法体外培养Hep G2肝癌细胞系,加入终浓度5、10、20μg/m L的姜黄素培养细胞24、48 h,观察细胞生长状态,并利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,选择最佳药物浓度和作用时间,再分为对照组、姜黄素组以及二甲基亚砜(DMSO)组进行实验。利用DCFH-DA荧光染色检测各组细胞ROS水平,通过流式细胞仪分析各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞Cleaved caspase-3、细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)、Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)的表达情况。结果 CCK-8试剂盒检测显示,5、10、20μg/m L姜黄素培养细胞24 h,细胞增殖抑制率分别为(15.9±1.3%)、(49.7±1.8)%、(63.7±1.7)%;培养细胞48 h后增殖抑制率分别为(27.2±1.1)%、(63.3±2.0)%、(70.5±2.3)%,本研究选取10μg/m L姜黄素作用48 h进行后续实验。与对照组相比,姜黄素组细胞ROS水平明显增加,凋亡率增加到26.74%,凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Cyt C明显上调,YAP蛋白含量显著降低(P<0.05);而DMSO组各项指标均无明显变化(P>0.05)。结论姜黄素能抑制Hep G2肝癌细胞系的增殖,诱导凋亡,其机制可能与姜黄素下调YAP表达,进而促进氧化应激有关。

抑制PDGFRα活化对小鼠脑损伤后胶质细胞增殖和瘢痕形成的影响

目的:探讨抑制血小板衍生生长因子受体α(PDGFRα)活化对小鼠脑损伤后胶质细胞增殖和小鼠脑损伤后瘢痕形成的影响,并阐明其作用机制。方法:选取48只8周龄BALB/c小鼠,制备小鼠黑质纹状体通路损伤模型,分为PDGFRα抑制剂AG1296组(AG1296组)和二甲基亚砜(DMSO)对照组(DMSO组),每组24只。AG1296组小鼠手术后连续3 d应用微量注射器沿损伤部位注入抑制剂AG1296,每日5μL(5 mmol·L^-1),DMSO对照组小鼠注入同等剂量的DMSO。术后第1、4、7和14天各取6只小鼠脑损伤前后2 mm脑组织用于检测。应用免疫组织化学染色和Western blotting法检测各组小鼠脑组织中磷酸化PDGFRα(p-PDGFRα)、星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白分子1(IBA-1)蛋白表达水平。免疫组织化学染色检测各组小鼠脑组织中NG2、CD45、纤连蛋白(FN)和Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)蛋白表达。结果:免疫组织化学染色,在损伤后4 d小鼠脑组织中p-PDGFRα棕黄色阳性表达细胞数最多,GFAP蛋白在损伤后14 d表达量最多,IBA-1蛋白在伤后7 d表达量最多。各时间点AG1296组小鼠脑组织中p-PDGFRα、GFAP和IBA-1蛋白表达水平明显低于DMSO组。Western blotting法检测,AG1296组小鼠脑组织中p-PDGFRα、GFAP和IBA-1蛋白表达水平明显低于DMSO组(P<0.01)。损伤后14 d,免疫组织化学染色结果显示AG1296组NG2、CD45、FN和ColⅣ阳性表达细胞数较DMSO组明显减少;瘢痕形成情况,AG1296组大鼠脑组织损伤中心的大空洞消失,仅留下一条缝隙,损伤周边虽然仍有许多GFAP阳性表达的胶质细胞,但未形成明显的境界膜,其他阳性表达细胞明显少于DMSO组。结论:抑制PDGFRα的活化可以降低小鼠脑损伤后胶质细胞的增殖,进而减少瘢痕组织形成。

骨髓间充质干细胞和心脏Sca1阳性细胞移植治疗心肌梗死的效果比较及其机制研究

目的探讨骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)和心脏来源的Sca1阳性干细胞移植对小鼠急性心肌梗死后的心功能恢复的影响。方法分别从成年C57BL/C小鼠的骨髓分离获取骨髓间充质干细胞,从心脏利用流式分选获取Sca1阳性干细胞,并在体外进行培养、扩增。C57BL/C小鼠雄性小鼠24只,按照以下方式分组,每组6只,假手术组,生理盐水对照组,MSCs治疗组和Sca1阳性细胞治疗组。小鼠麻醉后开胸,利用结扎心脏冠状动脉的左前降支建立急性心肌梗死模型,建模成功后分别在梗死区周围心肌内注射上述细胞或者生理盐水,假手术组小鼠不结扎冠状动脉。4周后,利用心脏超声观察小鼠左心室射血分数(LVEF)以及左心室舒张末期容积,以此评估心功能改变。细胞培养至第4代,采用荧光半定量PCR的方式分析细胞表达血管内皮生长因子(VEGFa和VEGFb)的情况。结果分离培养的骨髓MSCs贴壁生长,呈梭形;Sca1阳性干细胞在心脏组织的阳性率约为18%,培养后细胞贴壁生长,成短梭形,形态较MSCs更饱满。在细胞移植治疗后,与Sca1阳性干细胞治疗相比,MSCs治疗可以增加心梗后小鼠的存活率。细胞移植治疗4周后,骨髓来源MSCs治疗组的LVEF明显高于心脏来源Sca1阳性干细胞,且更有利于减少心梗后左心室舒张末期容积的扩大,改善心肌重塑。骨髓来源的MSCs表达VEGFa和VEGFb明显高于Sca1阳性细胞。结论心脏来源的Sca1阳性干细胞和骨髓来源的MSCs均可提高LVEF,促进心功能的恢复,且后者优于前者,这可能与MSCs高表达VEGF有关。

PDGFR信号通路促进星形胶质细胞和成纤维细胞共培养时细胞簇的成团效应

目的探讨血小板衍生生长因子受体(PDGFR)信号通路对小鼠脑星形胶质细胞和成纤维细胞共培养体系增殖的影响。方法取出生1~3d的小鼠乳鼠大脑皮质培养星形胶质细胞,取脑膜培养成纤维细胞,免疫细胞化学荧光染色胶质纤维酸性蛋白(GFAP)鉴定星形胶质细胞纯度,染色纤连蛋白(FN)鉴定成纤维细胞纯度。通过向小鼠脑星形胶质细胞和成纤维细胞共培养细胞体系中加入细胞因子血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激细胞或抑制剂AG1296进行干预,观察各组细胞增殖情况,Westernblot检测共培养细胞系中p-PDGFR-β、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)的表达变化。结果鉴定结果显示星形胶质细胞和成纤维细胞的细胞纯度达到90%。显微镜下观察显示,加入PDGF-BB后星形胶质细胞和成纤维细胞共培养体系增殖明显并形成团块,给予抑制剂AG1296则增殖受到抑制,团块明显减少。Westernblot结果显示加入PDGF-BB时,p-PDGFRβ、p-Akt表达增多(P<0.01);给予抑制剂AG1296则表达减少(P<0.05)。结论PDGFR信号通路促进体外小鼠脑星形胶质细胞和成纤维细胞的增殖。

姜黄素通过HMGB1因子促进HepG2肝癌细胞凋亡

目的探讨姜黄素通过HMGB1介导的炎症反应对人HepG2肝癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法选择终浓度为0、5、10、20μg/mL的姜黄素处理人HepG2肝癌细胞48 h。通过CCK-8试剂盒检测HepG2肝癌细胞的增殖情况,划痕实验观察HepG2肝癌细胞的迁移能力,Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪分析HepG2肝癌细胞的凋亡率,Western blot检测凋亡和炎症相关蛋白的表达水平。结果姜黄素对HepG2肝癌细胞的增殖抑制作用表现为剂量依赖性,48 h姜黄素的半数抑制浓度(IC_(50))为10μg/mL;HepG2肝癌细胞的迁移能力随姜黄素浓度的增加而明显降低;与对照组(0μg/mL)相比,5μg/mL的姜黄素未能明显诱导HepG2肝癌细胞凋亡(P>0.05),10μg/mL和20μg/mL的姜黄素能显著诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡(P<0.05);Western blot结果表明姜黄素上调凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、p53及p-p53(ser315)的表达,下调炎症相关蛋白HMGB1、IL-6、NF-κB、p-NF-κB(ser536)的表达。结论本研究表明,姜黄素能抑制人HepG2肝癌细胞的增殖,促进其凋亡的发生,其机制可能与姜黄素抑制促炎因子HMGB1的表达而降低炎症反应,进而诱导HepG2肝癌细胞的凋亡。

HAmLET诱导小鼠前脂肪细胞3T3-L1成脂分化

目的肿瘤细胞致死性人α-乳清蛋白(humanα-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAmLET)是一种可以选择性杀伤各种肿瘤细胞的人α-乳清蛋白与油酸的脂蛋白复合物,但其对未分化细胞的作用研究较少,本研究探讨HAmLET对小鼠前脂肪细胞3T3-L1成脂分化的作用及其机制。方法使用不同浓度HAmLET作用3T3-L1细胞和肿瘤细胞U87MG 24 h或7 d后通过CCk8实验检测细胞活性,选择合适浓度HAmLET与胰岛素、IBMX、地塞米松三联法诱导3T3-L1细胞成脂分化,12 d后通过油红O染色观察脂肪细胞内脂质聚集及脂滴大小、异丙醇脂质萃取检测脂质含量、Western Blot检测PPARγ的蛋白表达。结果50、100、200、500μg/mL HAmLET作用3T3-L1细胞24 h后,3T3-L1的细胞活性均显著高于U87MG细胞(P<0.01),而3T3-L1的细胞活性在100和200μg/mL之间显著降低(P<0.01)。100μg/mL和200μg/mL HAmLET作用3T3-L1细胞7 d后细胞存活率没有明显变化,而100μg/mL组镜下观察到少数3T3-L1细胞体积增大、变圆,胞质内可见脂滴。油红O染色,相对脂质含量及PPARγ蛋白检测结果显示100μg/mL HAmLET诱导3T3-L1细胞分化12 d后脂质含量水平和PPARγ蛋白表达水平与经典三联法诱导组差异无统计学意义(P>0.05)另外,HAmLET可显著提高诱导细胞中。结论使用能杀伤肿瘤细胞U87MG细胞浓度的100μg/mL HAmLET可通过激活3T3-L1细胞中PPARγ蛋白表达诱导细胞分化成脂。

p-PDGFRα在小鼠黑质纹状体损伤周边的经时表达和定位

目的探讨血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRα)在小鼠黑质纹状体损伤周边的经时表达和定位。方法取8周龄BALB/c小鼠,按文献制备小鼠黑质纹状体通路损伤模型,分别于术后第1、4、7、14 d取损伤脑组织(延及损伤部位前后2 mm)进行检测。应用免疫组织化学染色和Western blot检测p-PDGFRα蛋白的经时表达;采用免疫荧光双重染色检测p-PDGFRα的定位表达。结果免疫组化和Western blot检测均显示,损伤后4 d p-PDGFRα表达至高峰水平,免疫荧光双重染色结果显示其表达在星形胶质细胞,小胶质细胞,少突胶质细胞祖细胞和粒细胞上。结论脑损伤可以使PDGFRα活化并表达于损伤周围,活化的PDGFRα可能与星形胶质细胞,小胶质细胞,少突胶质细胞祖细胞和粒细胞的增殖有关。

血红素氧合酶-1对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨血红素氧合酶(HO)-1对糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGC)保护作用及其机制。方法清洁级雄性SD大鼠24只中8只为对照组,余16只腹腔注射链脲佐菌素制作DM大鼠模型,将血糖浓度大于16.7 mmol/L的大鼠定为DM模型,随机分为DM组8只,另外8只腹腔注射HO-1特异性诱导剂正铁血红素为实验组,对照组及DM组腹腔注射等剂量生理盐水。12 w后,HE染色观察RGC密度,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,氮蓝四唑光化还原法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,免疫组化染色和Western印迹法检测视网膜HO-1、Caspase-3表达情况。结果与对照组相比,DM组RGC密度显著降低(P<0.01),而实验组无明显变化(P>0.05)。与对照组相比,DM组MDA含量明显升高、SOD活性明显降低(P<0.01),而实验组无明显变化(P>0.05)。HO-1在对照组仅微量表达于内核层,DM组阳性表达在节细胞层及内核层有所增加,而实验组阳性染色显著增加,特别是节细胞层。Caspase-3在对照组视网膜几乎无表达,而DM组阳性表达显著增多,主要分布于节细胞层及内核层,实验组与DM组相比阳性表达有所减弱。与对照组相比,HO-1在DM组及实验组蛋白表达量均增加(P<0.01),且实验组增加更明显(P<0.05);与对照组相比,Caspase-3在DM组蛋白表达显著增加(P<0.01),而实验组无明显变化。结论通过正铁血红素诱导HO-1在视网膜的高表达,下调了DM大鼠视网膜Caspase-3的表达,抑制了氧化应激,恢复了视网膜RGC密度;提示HO-1可能对DM大鼠RGC具有保护作用。

人参茎叶总皂苷对大鼠MNU所致视网膜色素变性的作用

目的探讨人参茎叶总皂苷对大鼠MNU所致RP的作用及机制。方法随机将大鼠分成空白对照组、MNU组(模型组)和人参茎叶总皂苷组(治疗组),模型组和治疗组分别腹腔注射注射(ip)MNU 60 mg/kg复制RP模型,对照组则ip等量生理盐水,治疗组连续7 d灌胃人参茎叶总皂苷50 mg/kg。进行视觉电生理检测,视网膜的病理组织学,采用Morris水迷宫检测视觉功能,采用流式细胞仪检测Beclin-1和LC3蛋白的表达。结果治疗组与模型组比较,视觉电生理检测、病理组织学检查显示,模型组视网膜电图波形振幅基本消失,动物视网膜外核层受损,细胞稀疏;人参茎叶总皂苷明显减轻上述的症状;水迷宫实验显示,治疗组与模型组比较总时间、潜伏期、路程、速度低于模型组;治疗组与模型组比较,Beclin-1和LC3表达降低。结论人参茎叶总皂苷对大鼠MNU所致RP具有保护作用,可能与降低Beclin-1和LC3表达有关。

RKIP对糖尿病视网膜神经细胞的保护作用

本实验用SD雄性大鼠48只,按随机数字表分为4组:对照组、糖尿病组、阴性治疗组和Raf-1激酶抑制蛋白(Raf-1 kinase inhibitory protein,RKIP)组。除对照组外,其他各组均腹腔注射链脲佐菌素(60mg/kg)以建立糖尿病模型,对照组注射等量的柠檬酸缓冲液。

SR9009对人胶质母细胞瘤T98G细胞作用的研究

目的探讨生物钟组分蛋白REV-ERB特异性激动剂SR9009对T98G细胞增殖、细胞活力、代谢活动及治疗时间的影响,以阐明其发挥作用的潜在机制。方法体外培养人T98G细胞,分别与DMSO、SR9009以及硼替佐米(bortesomib,BOR)孵育后进行比较。MTT法测定SR9009处理后的T98G细胞活力,同时测量其对细胞活力影响的敏感效应时间段。免疫组织化学检测谷氨酰胺合成酶、波形蛋白、GFAP、REV-ERBα的表达。采用细胞行流式细胞术检测细胞的细胞周期。活细胞荧光示踪探针二乙酸荧光素(fluorescein diacetate,FDA)检测细胞氧化还原状态。SR9009和BOR联合作用于T98G细胞,观察其协同作用。结果T98G细胞分别与20和40μM SR9009孵育48、72 h后,细胞活力下降最明显。用SR9009(20μM)处理T98G细胞,细胞活力在18~30 h时间段内达到最低(P<0.05)。而BOR(500 nM)处理的T98G细胞,在12~24 h时间段内细胞活力达到最低(P<0.01)。SR9009处理后的T98G细胞周期G 0/G 1期高于DMSO组(P<0.01)。而DMSO组细胞中S期细胞比例高于SR9009组细胞(P<0.05)。与DMSO组相比,SR9009组细胞中ROS水平显著降低(P<0.01)。而BOR(500 nM)组的T98G细胞ROS水平升高(P<0.05)。两种药物联合治疗表现出协同作用(P<0.01)。结论SR9009具有明显抗T98G肿瘤细胞活性,表现出明显的细胞毒性作用并显著影响肿瘤细胞的代谢水平,降低肿瘤细胞生存率。SR9009抗肿瘤作用可能是通过调节细胞固有生物钟成分蛋白REV-ERB实现。

糜蛋白酶抑制剂保护糖尿病仓鼠肾功能的机制研究

目的观察糜蛋白酶抑制剂对糖尿病仓鼠肾脏的保护作用,进而探讨其保护肾脏损伤的机理。方法链脲佐菌素腹腔注射法制备仓鼠糖尿病模型。通过分子生物学技术、免疫组织化学技术、免疫印记技术检测各组动物糜蛋白酶,RAS成分:ACE、肾素、ANG-I、ANG-II;氧化应激水平:8-Ohd G,NOX-4,p22phox,以及TGF-β1的表达情况。结果糜蛋白酶抑制剂抑制了糖尿病仓鼠肾内ANG-II升高,同时明显降低了8-OHd G分泌水平。NOX-4和p22phox染色表明糖尿病组血管球和肾小管区域氧化产物显著增高,而糜蛋白酶抑制剂抑制氧化产物的升高(P<0.01)。Western blot证实了糖尿病组血管球NOX-4和p22phox蛋白的水平较对照组高,糜蛋白酶抑制剂显著降低了其表达。血管球TGF-β1表达糖尿病组高于对照组,同样糜蛋白酶抑制剂治疗后大大降低了TGF-β1水平。结论糜蛋白酶抑制剂能保护糖尿病仓鼠的肾功能,其机制是通过降低肾内ANG-II水平和氧化应激水平来保护糖尿病肾脏损伤。