黄芩苷对糖尿病大鼠血管损伤的保护作用及机制

目的探讨黄芩苷对糖尿病大鼠血管损伤的保护作用及机制。方法40只大鼠随机分为4组,分别为空白组、糖尿病组、黄芩苷50 mg/kg组、黄芩苷100 mg/kg组。单次腹腔注射链脲佐菌素65 mg·kg-1·d-1用于建立糖尿病模型,注射链脲佐菌素后黄芩苷灌胃,空白组和模型组给予等量羧甲基纤维素钠灌胃,每日1次,灌胃28 d。离体血管环实验检测大鼠血管内皮功能,ELISA法检测血清中IL-18,IL-1β,TNF-α,IL-6,丙二醛(MDA)和谷胱甘肽还原酶(GSH-px)含量;HE染色观察各组大鼠主动脉形态;硝酸还原酶法检测各组大鼠血清NO水平;免疫印迹检测各组大鼠主动脉组织中eNOS、NF-κB蛋白表达;二氢乙锭(DHE)染色观察各组大鼠主动脉活性氧(ROS)形成情况。结果经黄芩苷治疗后,糖尿病大鼠血管舒张功能障碍改善,血清中IL-β,IL-18,IL-6和TNF-α含量降低,NO、MDA和GSH-px含量升高,主动脉组织中eNOS蛋白表达增加、NF-κB蛋白表达降低,ROS形成减少。结论黄芩苷可能通过NF-κB/ROS信号通路保护链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠血管损伤。

黄芪甲苷改善高糖诱导内皮细胞线粒体功能障碍

目的研究黄芪甲苷对高糖诱导内皮细胞线粒体功能障碍保护作用并探讨其机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,将细胞分为8组:空白组,高糖组,高糖+阳性药组(维生素C)组,高糖+黄芪甲苷低、高剂量(40、80μmol·L^(-1))组,SRT1720(SIRT1激动剂)组,高糖+SRT1720组,高糖+黄芪甲苷+EX-527(SIRT1抑制剂)组。空白组以5.5 mmol·L^(-1)正常低糖处理24 h,高糖组以30 mmol·L^(-1)高糖处理24 h,SRT1720组用SRT1720处理24 h后正常低糖处理,其余组分别用维生素C,黄芪甲苷,SRT1720和EX-527处理24 h后高糖处理。MitoSOX染色法检测各组细胞线粒体活性氧水平,JC-1染色法检测各组细胞线粒体膜电位水平,免疫荧光检测各组细胞胞核中NF-κB水平,免疫印迹法检测各组细胞Drp1、SIRT1和NF-κB蛋白水平。结果黄芪甲苷可显著降低高糖诱导内皮细胞线粒体活性氧水平,增加线粒体膜电位水平及下调Drp1蛋白表达水平,并能激活SIRT1/NF-κB信号通路。SRT1720同黄芪甲苷的效果一致,而EX-527可取消黄芪甲苷对高糖诱导内皮细胞线粒体功能障碍的改善作用。结论黄芪甲苷可通过激活SIRT1/NF-κB信号通路改善高糖诱导内皮细胞线粒体功能障碍。

黄芪甲苷对慢性间歇性缺氧诱导血管内皮功能障碍的保护作用

目的 研究黄芪甲苷对慢性间歇性缺氧诱导血管内皮功能障碍的保护作用及其机制。方法 雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组和黄芪甲苷低、高剂量(40、80 mg/kg)组,模型组和黄芪甲苷组置于自动调节氧浓度的低氧舱中4周,以建立慢性间歇性缺氧模型。在间歇性缺氧间歇期,黄芪甲苷组连续给予不同剂量黄芪甲苷灌胃处理。采用苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉形态学改变,离体血管环实验检测血管内皮功能,超氧化物阴离子探针(DHE)检测动脉组织活性氧(ROS)形成情况,试剂盒检测血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶活性(SOD)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平,Western blot法检测动脉组织calpain-1、eNOS蛋白表达。结果 与模型组比较,黄芪甲苷各剂量组均能降低胸主动脉中膜厚度、ROS水平、calpain-1蛋白表达及血清MDA水平(P<0.01),增加血清NO水平和SOD、GSH-Px活性及胸主动脉eNOS蛋白表达(P<0.05,P<0.01),并改善内皮依赖性舒张功能障碍(P<0.01);而L-NAME(eNOS抑制剂)能抵消黄芪甲苷对内皮功能的保护作用。结论 黄芪甲苷能改善慢性间歇性缺氧诱导血管内皮功能障碍及氧化应激,并可能通过calpain-1/NO信号通路发挥作用。

黄芪多糖对低氧诱导肺动脉高压小鼠肺血管重构的保护作用

目的研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对低氧诱导的肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)小鼠肺血管重构的影响并探讨其相关作用机制。方法将C57BL/6小鼠置于含10%O_(2)的常压低氧舱中持续饲养4周制备肺动脉高压模型。50只雄性C57BL/6小鼠按完全随机法分为正常对照组,模型组,模型+APS 200、400、800 mg/kg组。4周后检测小鼠右心室收缩压(right ventricular systolic pressure,RVSP)、右心肥厚指数[RV/(LV+S)];HE染色观察肺小动脉病理变化;Masson染色观察肺小动脉胶原纤维沉积面积;组织免疫荧光检测肺小动脉α-SMA蛋白水平;ELISA检测血清C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Western blot检测肺组织KLF5、HIF-1α、Cyclin B1、Cyclin D1、VEGF、TGF-β1蛋白水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠RVSP、RV/(LV+S)显著增加,肺小动脉血管增厚,胶原纤维沉积面积增大,CRP、IL-6、TNF-α含量增加,α-SMA、KLF5、HIF-1α、Cyclin B1、Cyclin D1、VEGF、TGF-β1蛋白水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,各APS治疗组小鼠RVSP、RV/(LV+S)、肺小动脉病理改变均不同程度减轻,胶原纤维沉积面积明显减少,CRP、IL-6、TNF-α含量降低,α-SMA、KLF5、HIF-1α、Cyclin B1、Cyclin D1、VEGF、TGF-β1蛋白水平显著降低(P<0.01)。结论APS对低氧诱导的肺动脉高压小鼠肺血管重构具有保护作用,其作用机制可能与抑制KLF5/HIF-1α信号通路有关。

视黄酸通过TLR4/NF-κB通路对脂多糖诱导血管炎症与氧化应激的影响

目的研究视黄酸(RA)对脂多糖(LPS)诱导的血管炎症与氧化应激的保护作用并探讨其作用机制。方法SD大鼠给予RA和TLR4抑制剂连续口腔灌胃2周后,除对照组外,LPS组、RA 3 mg/kg组、RA 15 mg/kg组和TLR4抑制剂组(TAK-242,3 mg/kg),通过腹腔注射LPS(10 mg/kg)以建立血管炎症模型。血管张力测定系统检测血管舒张功能,硝酸还原酶法检测大鼠血清中一氧化氮(NO)的含量,ELISA法检测血清中IL-18、IL-1β、TNF-α、IL-6和GSH-px的水平,WST-1法和TBA法分别检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA),DHE荧光探针检测血管活性氧(ROS)的水平,免疫组化法检测血管NF-κB p65的表达,免疫印迹法检测血管TLR4、eNOS和p-eNOS的表达。结果与LPS组相比,RA能够改善血管舒张功能,增加p-eNOS和NO的水平,减少血清炎症因子IL-18、IL-1β、TNF-α、IL-6的含量,降低血清中MDA和ROS的生成,升高血清中SOD的生成和GSH-px的释放量,并且下调血管TLR4和NF-κB p65的表达水平。另外,RA对LPS诱导的血管炎症与氧化应激的影响与TLR4抑制剂作用相似。结论RA对LPS诱导的血管炎症与氧化应激具有抑制作用,其可能通过TLR4/NF-κB p65信号通路发挥作用。

黄芪甲苷通过NF-κB/NLRP3信号通路减轻肺动脉高压大鼠的炎症反应

目的 探讨黄芪甲苷对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠的保护作用及潜在机制。方法 大鼠随机分为对照组、模型组、MCC950组(10 mg/kg)、Bay11-7082组(5 mg/kg)、黄芪甲苷组(40、80 mg/kg),大鼠通过单次腹腔注射野百合碱(60 mg/kg)建立肺动脉高压模型,黄芪甲苷组灌胃相应剂量药物28 d, MCC950组和Bay11-7082组腹腔注射相应剂量药物,右心室导管插管测定右心室收缩压和平均肺动脉压,ELISA法检测大鼠血清炎症因子TNF-α水平,免疫组化法观察大鼠肺组织中IL-6蛋白表达情况,免疫荧光检测大鼠肺组织NLRP3、NF-κB表达情况。人肺动脉内皮细胞(HPAECs)随机分为对照组、模型组、MCC950组(10μmol/L)、Bay11-7082组(10μg/mL)、黄芪甲苷组(50、100μmol/L),EdU-488增殖试剂盒检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞TNF-α、IL-6水平,免疫蛋白印迹(Western blot)法检测细胞NLRP3、NF-κB蛋白表达。结果 与模型组比较,MCC950组、Bay11-7082组和黄芪甲苷组能够降低肺动脉高压大鼠右心室收缩压、平均肺动脉压和右心肥厚指数(P<0.01),下调肺组织和细胞IL-6、TNF-α水平和NF-κB、NLRP3蛋白表达(P<0.01),改善HPAECs细胞增殖情况(P<0.01)。结论 黄芪甲苷能够减轻肺动脉高压大鼠的炎症反应,可能是通过NF-κB/NLRP3信号通路发挥作用。

κ-阿片肽受体激活抑制内皮素-1诱导的心肌细胞肥大与细胞外信号调节激酶通路有关

目的讨论κ-阿片肽受体(kappa-opioid receptor,κ-OR)激活后通过细胞外信号调节激酶通路对内皮素-1(vascular endothelin-1,ET-1)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用。方法体外原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,ET-110 nmol·L^(-1)诱导心肌细胞肥大,观察κ-OR激动剂(U50488H)1μmol·L^(-1)对心肌细胞的作用,并探讨细胞外信号调节激酶1/2特异性抑制剂(U0126)1μmol·L^(-1)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220(50 nmol·L^(-1))、百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)5 mg·L^(-1)、κ-OR拮抗剂nor-binaltorphimine(NOR-BNI,1μmol·L^(-1))存在时,κ-OR的激活对心肌细胞肥大的影响及相关机制。心肌细胞的体积应用消化分离法及计算机图像分析系统测定;心肌细胞的心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)的mRNA相对表达利用RT-PCR法测定;心肌细胞ERK1/2的相对表达水平应用Western blot法测定;心肌细胞的形态变化利用相差显微镜观察。结果ET-1可以使心肌细胞体积增大,ANPmRNA表达增多,ERK1/2表达增多;与ET-1(10 nmol·L^(-1))组相比,U50488H(1μmol·L–1)可明显使ET-1诱导的心肌细胞体积变小,ANPmRNA表达减少,ERK1/2表达减少,U0126(1μmol·L^(-1))、Ro-31-8220(50 nmol·L^(-1))与其抑制程度相似,三者差异无显著性;当用U0126(1μmol·L^(-1))、Ro-31-8220(50 nmol·L^(-1))预处理时U50488H(1μmol·L^(-1))的抑制现象部分消失,但当用PTX(5 mg·L^(-1))、NOR-BNI(1μmol·L^(-1))(κ-OR受体拮抗剂)预处理时U50488H(1μmol·L^(-1))的抑制现象基本消失。结论κ-OR激动剂U50488H能抑制内皮素-1诱导的大鼠心肌细胞肥大,其作用机制主要与其能抑制胞外信号调节激酶通路的上游元件PKC的激活有关。

黄芪多糖对大鼠心肌纤维化的保护作用

目的观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)通过转化生长因子-β1(transforming growth Factor-β1,TGF-β1)/Smads信号传导通路对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的大鼠心肌纤维化的影响。方法 SD(Sprague-Dawley)大鼠分别ig给予APS 400和800 mg·kg^(-1),24 h后ip给予ISO 10 mg·kg-1,连续14 d。BL420型四道生理记录仪记录左心室收缩最大压(left ventricular systolic pressure,LVSP)及左心室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP),左心室最大收缩、舒张期压力微分(maximum rate of rise/decrease of LVSP,±dp/dtmax)全心质量指数(heart mass index,HMI)和左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI);苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色和天狼星红染色,在光镜下观察其心肌形态并测定其胶原容积积分(collagenvol-umefraction,CVF);Western蛋白印迹法测定TGF-β1和Smads蛋白的表达;RT-PCR测定TGF-β1mRNA的表达;ELISA测定I型前胶原羧基前肽(propeptide of type I procollagen,PICP)及其抑制物I型胶原交联羧基末端肽(type I collagen carboxy-terminal cross-linked peptide,ICTP)的含量。结果与正常组相比,模型组大鼠心功能指数显著上升(P<0.01);左心室质量指数显著上升(P<0.01);CVF显著上升(P<0.01);PICP/ICTP明显上升,Smad2/3,Smad4及TGF-β1的蛋白含量显著上升(P<0.01);Smad 7蛋白含量显著下降(P<0.01);TGF-β_1 mRNA的表达明显升高(P<0.01)。给药APS后,心功能指数可明显下降(P<0.05),左心室质量指数显著上升(P<0.05),CVF减少(P<0.05),Smad2/3(P<0.05),Smad4及TGF-β1的蛋白含量及mRNA的表达均下降(P<0.05),Smad7的蛋白含量上升(P<0.05)。通过ELISA测定PICP/ICTP能反映与TGF-β_1表达呈正相关性,其比值明显下降(P<0.05)。结论 APS对ISO诱导的心肌纤维化有一定的防治作用,其机制与抑制TGF-β_1/Smads通路相关。

黄芪多糖通过抑制NF-κB和JNK信号通路减轻LPS诱导的小鼠心肌细胞凋亡

目的研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外实验采用H9c2细胞预先给予APS,30 min后加入LPS(1 mg·L^(-1))共孵育24 h,建立心肌细胞凋亡模型。体内实验采用SPF级昆明小鼠预防性给予APS 14 d后,腹腔注射LPS(10 mg·kg^(-1))建立心肌细胞凋亡模型。8 h后采用超声心动测定小鼠心脏射血分数(EF)、左心室缩短分数(FS)等;TUNEL测心肌细胞凋亡;ELISA检测血清中IL^(-1)β、TNF-α含量;Western blot检测组织和体外心肌细胞中JNK、NF-κB信号通路及Bcl-2家族、caspase-3相关蛋白表达。结果 LPS能明显抑制小鼠的左心室收缩功能;促使心肌细胞凋亡;增加血清中IL^(-1)β、TNF-α,心肌细胞中JNK、p-JNK、Bax、caspase-3,胞核中NF-κB蛋白浓度;降低Bcl-2和胞质中NF-κB、IκB-α蛋白浓度。APS能明显保护LPS诱导的小鼠心肌收缩功能,减少心肌细胞凋亡;减少血清中IL^(-1)β、TNF-α,心肌组织细胞中p-JNK、Bax、caspase-3和胞核NF-κB蛋白含量;相对增加Bcl-2和胞质中NF-κB、IκB-α蛋白含量。而JNK蛋白表达无明显变化。结论 APS通过抑制NF-κB和JNK信号通路,减轻LPS诱导的小鼠心肌细胞凋亡。

肌肽对高糖诱导的大鼠H9C2心肌细胞损伤的保护作用及其机制

目的研究肌肽对高糖诱导受损的大鼠心肌细胞(H9C2)的保护作用及其机制。方法用含50mmol/L葡萄糖的高糖培养液建立高糖损伤模型,实验观察组给予5、15mmol/L肌肽进行保护。MTT检测各组H9C2心肌细胞活力;ELISA测定培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子浓度含量;试剂盒检测细胞中SOD、MDA、AST和LDH活性;二氢乙锭测定细胞中活性氧含量;免疫印迹测定细胞中bax、bcl-2、p65和IκB-α的蛋白表达。结果肌肽预处理组细胞内活性氧含量下降,SOD活性升高,AST和LDH活性减弱,MDA含量降低;其培养液中炎症因子含量明显降低,细胞核中p65蛋白水平降低,胞浆中IκB-α蛋白水平升高,bax和bax/bcl-2比值降低。结论肌肽能够减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤,降低细胞炎症反应,其机制可能与ROS/NF-κB信号通路有关。

人参皂苷Rg1通过SIRT1/PGC-1α信号通路抑制AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大的研究

目的:探讨人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导乳鼠心肌细胞肥大及能量代谢的作用,及对沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)和过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)表达的影响。方法:原代培养SD乳鼠心肌细胞,用AngⅡ0.1μmol/L诱导心肌细胞肥大,观察人参皂苷Rg112.5、25、50μmol/L及SIRT1特异性阻断剂EX5271μmol/L对肥大心肌细胞的影响。采用消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝(Bradford)法检测细胞中蛋白质含量;Western blot法检测心肌细胞心房钠尿肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)、SIRT1及PGC-1α的蛋白表达;酶联免疫吸附(Elisa)法检测细胞外液中三磷酸腺苷(ATP)、单磷酸腺苷(AMP)及游离脂肪酸(FFA)的含量。结果:与空白组比较,模型组心肌细胞体积、蛋白及FFA含量明显升高,ATP/AMP比值降低,ANP蛋白表达显著上调,SIRT1及PGC-1α蛋白的表达显著下调。与模型组比较,人参皂苷Rg125、50μmol/L组心肌细胞体积、蛋白和FFA含量显著降低,ATP/AMP比值显著升高,ANP蛋白表达显著下调,人参皂苷Rg125μmol/L组SIRT1及PGC-1α蛋白的表达显著上调。人参皂苷Rg1的调节作用随浓度增加而增强。EX527对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大各项指标无影响,但人参皂苷Rg1对肥大心肌细胞的保护作用及PGC-1α表达上调作用可被EX527部分阻断。结论:人参皂苷Rg1对AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大有抑制作用,能改善肥大心肌细胞的能量代谢,其通过上调SIRT1及PGC-1α的表达发挥保护作用。

电针与黄芪甲苷结合对大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察电针与黄芪甲苷结合对异丙肾上腺素诱导产生的大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、普萘洛尔组(PRO组)、黄芪甲苷组(ASIV组)、电针黄芪甲苷组(ASIV+EA组),每组10只。腹腔注射异丙肾上腺素10mg·kg-1·d-1制备心肌纤维化大鼠模型。PRO组予普萘洛尔40mg·kg-1·d-1灌胃;ASIV组予黄芪甲苷40mg·kg-1·d-1灌胃;ASIV+EA组在黄芪甲苷灌胃基础上予电针"内关"穴,强度6V,频率20Hz,每次10min,1次/d。30d后计算大鼠全心质量指数HMI和左心室质量指数LVMI,天狼星红染色法观察大鼠心脏组织的变化,ELISA法检测血清中I型前胶原羧基端前肽(PICP)及其抑制物I型胶原交联羧基末端肽(ICTP)含量;Western blot法检测心脏组织中转化生长因子β1(TGF-β1)及Smad 2/3、Smad 4、Smad 7蛋白的表达水平。结果:与空白组相比,模型组的胶原沉积增加,HMI、LVMI明显增加;PICP、ICTP、TGF-β1、Smad 2/3、Smad 4含量增加,Smad 7含量减少(均P<0.05)。与模型组相比,3个治疗组胶原沉积减少,HMI以及LVMI的比例降低,PICP、ICTP、TGF-β1、Smad 2/3、Smad 4含量减少,Smad 7含量增加(均P<0.05)。与PRO组相比,ASIV组HMI、ICTP、Smad 2/3、Smad 4升高,Smad 7降低(均P<0.05)。结论:电针与黄芪甲苷结合对大鼠心肌纤维化有一定的抑制作用,这种作用可能是通过抑制TGF-β1/Smad通路而形成的。

黄芪甲苷对大鼠心肌纤维化的影响

目的:研究黄芪甲苷(astragaloside IV)对大鼠心肌纤维化的影响和作用机制。方法:异丙肾上腺素腹腔注射造成心肌纤维化模型。大高鼠随机分为空白对照组、异丙肾上腺素模型组(10mg/kg)、异丙肾上腺素+普萘洛尔组(40mg/kg)、异丙肾上腺素+黄芪甲苷组(40mg/kg);30天后处死大鼠,分别测量大鼠全心质量指数HMI和左心室质量指数LVMI,进行组织形态学染色,测定血清中Ⅰ型前胶原羧基端前肽(PⅠCP)及其抑制物Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP);分别检测转化生长因子β(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、Smad2/3、Smad4、Smad7、肌动蛋白α(α-SMA)的表达。结果:异丙肾上腺素模型组的HMI、LVMI较空白组明显增加;血清中PⅠCP、ⅠCTP含量增高;TGF-β1、Smad2/3、Smad 4、α-SMA含量增高,Smad7含量减少。与模型组相比,黄芪甲苷(40mg/kg)能明显降低HMI及LVMI的比例,降低TGF-β1、Smad2/3、Smad 4、α-SMA含量,Smad7含量增加,PⅠCP、ⅠCTP含量降低。结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素所致的大鼠心肌纤维化有保护作用,可能与黄芪甲苷能降低TGF-β1以及α-SMA产生、能够抑制TGF-βSmad通路有关。

黄芪甲苷通过AMPK/mTOR信号通路改善STZ诱导的糖尿病大鼠的心肌损害

目的:通过在体实验的研究,探讨黄芪甲苷通过AMPK/mTOR通路对STZ诱导的糖尿病大鼠的影响。方法:48只雄性SD大鼠随机分为六组,每组8只:正常对照组、糖尿病模型组、厄贝沙坦组(50 mg/kg)、黄芪甲苷20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg组。模型组、厄贝沙坦及黄芪甲苷各组一次性大剂量腹腔注射链脲佐菌素50 mg/kg,随机血糖≥15 mmol/L视为造模成功。各组灌胃给药12周,葡萄糖氧化酶法测定血清中血糖浓度;试剂盒测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;称重法检测全心重量指数(HWI)和左心重量指数(LVWI);苏木精-伊红(HE)染色观察心肌细胞排列及形态;免疫组化法观察心肌中pmTOR的表达;取左心室组织提取蛋白,Western Blot测AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、ANP、BNP蛋白的表达;RT-PCR测定ANP mRNA的表达。结果:在糖尿病模型组中,血糖、心肌酶学指标、HWI、LVWI明显增加,心肌细胞排列紊乱,细胞表面积明显增大,pAMPK/AMPK明显减低,p-mTOR/mTOR明显增加,ANP及BNP的蛋白表达以及ANP mRNA表达都明显升高;与模型组相比,厄贝沙坦组及黄芪甲苷各组的血糖、天门冬氨酸氨基转移酶活性明显减低,厄贝沙坦组、黄芪甲苷40 mg/kg、80 mg/kg组的乳酸脱氢酶活性、HWI、LVWI减低,厄贝沙坦及黄芪甲苷各组的细胞排列整齐,细胞表面积减低,p-AMPK/AMPK明显增加,p-mTOR/mTOR明显降低,ANP及BNP的蛋白表达以及ANP mRNA表达明显减低,黄芪甲苷不同剂量组呈剂量依赖性。结论:黄芪甲苷可以明显改善STZ诱导的糖尿病大鼠的心肌肥厚,其机制可能与AMPK/mTOR通路的介导有关。

黄芪甲苷通过TLR4/p38MAPK信号通路抑制脂多糖诱导的小鼠心肌损伤

目的:探讨黄芪甲苷(astragaloside IV)通过TLR4/p38MAPK信号通路对脂多糖(LPS)诱导的C57BL/6J小鼠急性心肌损伤的作用,并阐明其作用机制。方法:小鼠30只随机分为5组,分为空白对照组、脂多糖组、黄芪甲苷40mg/kg组、黄芪甲苷80mg/kg组、3-去氮腺苷10mg/kg(阳性对照)组。黄芪甲苷给药组给予黄芪甲苷14 d、3-去氮腺苷组给予3-去氮腺苷14 d后,腹腔注射脂多糖建立急性内毒素心肌损伤模型。采用射血分数(EF)、缩短分数(FS)、左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)等指标观察小鼠心脏功能;采用免疫组化检测心肌组织中ED1炎性细胞浸润情况;Western Blot检测TLR4、p38MAPK、pp38MAPK的表达情况;应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中TNF-α、IL-1β、IL6的含量;采用RT-PCR检测心肌组织中BNP mRNA的表达情况。结果:与空白对照组相比,脂多糖组的射血分数(EF)、缩短分数(FS)、左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)明显降低,而血清中TNF-α、IL-1β和IL6含量增加,组织中ED1、TLR4、p38MAPK、p-p38MAPK的表达明显增加。与脂多糖组相比,黄芪甲苷(40、80mg/kg)组均能明显提高EF、FS、LVIDd、LVIDs,以及明显降低TNF-α、IL-1β、IL6的含量及ED1、TLR4、p38MAPK、p-p38MAPK的表达。结论:黄芪甲苷对脂多糖引起的心肌炎症具有明显的抑制作用,可能是通过TLR4/p38MAPK信号通路起作用,并有效改善由脂多糖导致的心肌损伤。

黄芪甲苷通过Calpain-1/HIF-1α改善野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠氧化应激

目的:研究黄芪甲苷对野百合碱诱导的肺动脉高压(PAH)大鼠的保护作用并探讨其作用机制。方法:SD大鼠通过单次腹腔注射野百合碱0.06 g/kg建立PAH模型,黄芪甲苷40 mg/kg、80 mg/kg组连续灌胃4 w,腹腔注射钙蛋白酶-1(Calpain-1)抑制剂(MDL-28170,20 mg/kg)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂(2ME2,16 mg/kg)。右心室导管插管检测右心室压力(RVSP)和平均肺动脉压(mPAP),采用苏木素-伊红(HE)染色法和马松三色法观察肺组织病理形态,超氧化物阴离子探针(DHE)染色法检测肺组织活性氧(ROS)形成情况,酶联免疫(ELISA)法检测血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)和Calpain-1的水平,比色分析法(WST-1)、硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)法分别检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,免疫组化法观察肺组织Calpain-1蛋白的表达情况,免疫蛋白印迹法(Western blot)检测肺组织HIF-1α的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组中RVSP、mPAP、右心肥厚指数、血管壁面积比(WA)、肺组织纤维胶原沉积面积、肺干湿重、肺组织中ROS含量、血清中MDA水平、肺组织中Calpain-1和HIF-1α蛋白表达显著升高(P<0.01),血清中SOD的生成和GSH-px释放量显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,MDL-28170组、2ME2组和黄芪甲苷40、80 mg/kg组中RVSP、mPAP、右心肥厚指数、血管壁面积比(WA)、肺组织纤维胶原沉积面积、肺干湿重、肺组织中ROS含量、血清中MDA水平、肺组织中Calpain-1和HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01),血清中SOD的生成和GSH-px释放量显著升高(P<0.01)。黄芪甲苷对野百合碱的抑制作用与MDL-28170和2ME2作用相似。结论:黄芪甲苷改善MCT诱导的PAH大鼠氧化应激,且可能通过Calpain-1/HIF-1α信号通路发挥其改善作用。

和厚朴酚对脂多糖诱导心肌细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨和厚朴酚对脂多糖诱导心肌细胞损伤、自噬和凋亡的影响及潜在作用机制。方法:以10μg/mL脂多糖作用H9C2细胞建立心肌细胞损伤模型,分为空白对照组、模型对照组、和厚朴酚12.5、25.0、50.0μmol/L组和和厚朴酚50.0μmol/L+3-MA(自噬抑制剂3-MA 10 mmol/L)组。CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测炎性因子水平;DCFH法测活性氧(ROS)水平;LC3免疫荧光染色观察自噬;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测与自噬、凋亡及PI3K/AKT/mTOR通路相关的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞活力降低,LAMP2蛋白表达显著下调(P<0.01),而炎症因子含量、ROS水平、自噬细胞数量、细胞凋亡率显著增加,LC3II/I、Beclin 1、P62、Cleaved caspase 3/Caspase 3、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的蛋白表达均显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,和厚朴酚可明显降低炎症因子含量、ROS水平、细胞凋亡率、P62表达,下调Cleaved caspase 3/Caspase 3蛋白表达及PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达(P<0.01),提高细胞活力、自噬细胞数量及上调LC3II/I、Beclin 1和LAMP2蛋白表达(P<0.01),且和厚朴酚对细胞活力、炎症因子水平、ROS水平、自噬细胞数量和细胞凋亡率的调节均呈浓度依赖性;与和厚朴酚50.0μmol/L组相比,和厚朴酚50.0μmol/L+3-MA组的炎症因子含量、ROS水平、细胞凋亡率显著升高,P62和Cleaved caspase 3/Caspase 3蛋白表达显著上调(P<0.01),细胞活力、自噬细胞数量显著降低,LC3II/I、Beclin 1、LAMP2、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:和厚朴酚可激发自噬,减少脂多糖诱导的心肌细胞损伤、ROS水平和细胞凋亡率,且效应与药物浓度成正相关,这些作用可能与和厚朴酚抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,上调自噬、促进自噬流有关。