低温冻存胃肠道肿瘤样本对其生物大分子的影响

目的探讨胃肠道肿瘤组织样本经低温冻存后对其生物大分子DNA、RNA及蛋白质的影响。方法随机选取2014—2021年间锦州医科大学附属第一医院临床生物样本中心采集、冻存的胃癌及结直肠癌样本的癌组织、癌旁组织及正常组织96份,并依据低温冻存年限分为≤2年、3~5年和≥6年3组。采用分光光度计测量DNA、RNA的纯度及蛋白质浓度,1%琼脂糖电泳检测DNA完整性并进行质量分级,测定RNA分子完整数(RIN值)评估RNA完整性,考马斯亮蓝法测定蛋白质完整性并进行质量分级。结果3组低温冻存年限的胃肠道肿瘤组织之间DNA纯度和完整性、RNA纯度以及蛋白质浓度均无显著性差异(P>0.05),胃癌及结直肠癌样本的DNA、RNA及蛋白质完整性无显著性差异(P>0.05)。胃肠道肿瘤样本正常组织的DNA完整性与癌组织及癌旁组织均有显著性差异(P<0.05)。组织样本的RIN值显示,存储≥6年的样本RNA完整性及蛋白质完整性较存储3~5年及≤2年均有显著下降(P<0.05)。结论长期低温冻存的胃肠道肿瘤样本对其DNA的影响较小,冻存超过6年RNA和蛋白质会开始发生降解。

非小细胞肺癌原发和继发T790M突变的临床病理特征

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)原发与继发T790M突变与临床病理特征的关系。方法回顾性分析锦州医科大学附属第一医院2014年1月至2018年12月收治的非小细胞肺癌患者样本,采用扩增阻滞突变系统法(ARMS法)对其进行EGFR基因突变情况检测,对首次EGFR检测结果为非T790M突变的患者进行靶向治疗,疾病进展后再次行T790M突变的检测,分析原发与继发T790突变与临床病理特征的关系。结果T790M突变情况与性别、年龄、吸烟史等方面的差异无统计学意义,与病理组织分型及TNM分期差异有统计学意义(P<0.05)。原发T790经常伴随L858R发生突变,而继发T790M常伴随19-del发生突变。结论原发T790M与继发T790M对临床病理的研究,可以对分子机制、肿瘤异质性及临床研究奠定一定的基础。

缺氧肝细胞癌细胞来源外泌体miR-432-5p通过SOCS3/STAT3促进M2型巨噬细胞极化

目的探讨缺氧微环境下肝细胞癌(简称肝癌)细胞释放的外泌体对巨噬细胞极化的影响及其机制。方法通过免疫荧光染色、透射电镜、Western blotting明确缺氧对肝癌细胞外泌体释放的影响;通过流式细胞术、免疫荧光染色和实时定量PCR检测缺氧肝癌细胞来源外泌体对M2型巨噬细胞极化、免疫微环境的影响;通过免疫组织化学染色、免疫荧光染色、荧光素酶报告基因、Western blotting检测缺氧肝癌细胞来源外泌体miR-432-5p促进M2型巨噬细胞极化的机制。结果缺氧可促进肝癌细胞分泌外泌体,促进M2型巨噬细胞极化,其发挥作用的机制是外泌体中的miR-432-5p靶向SOCS3,调控SOCS3/STAT3信号通路实现的。结论缺氧肝癌细胞来源外泌体miR-432-5p介导的M2型巨噬细胞极化是通过SOCS3/STAT3信号通路实现的,这一信号通路为肝癌的靶向治疗提供了新方向。

突变型低氧诱导因子1α腺病毒载体对骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景:目前发现低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1,HIF1α)可提高组织和细胞在缺血环境下继续生存的能力,在促进血管再生方面有重要意义。目的:构建三点突变型HIF1α联合示踪因子hrGFP双基因重组腺病毒载体Ad-CMV-HIF1α^(mu)-IRES-hrGFP-1,研究其对骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法:将第3代骨髓间充质干细胞分组培养,实验组以突变基因Ad-CMV-HIF1α^(mu)-IRES-hrGFP-1病毒液转染细胞,阳性对照组以未突变基因Ad-CMV-HIF1α-IRES-hrGFP-1病毒液转染细胞,阴性对照组以Ad-CMV-IRES-hrGFP-1空病毒液转染细胞,空白对照组不转染任何病毒液。转染72 h后,进行HIF1α基因mRNA及蛋白检测;转染24,48,72,96,120 h,MTT法检测细胞增殖。结果与结论:(1)HIF1α基因mRNA检测:实验组、阳性对照组HIF1α基因mRNA表达高于阴性对照组、空白对照组(P<0.05),其余组间两两比较差异无显著性意义;(2)HIF1α蛋白检测:实验组细胞中HIF1α蛋白表达高于阳性对照组、阴性对照组、空白对照组(P<0.05),后3组间比较差异无显著性意义;(3)细胞增殖:阳性对照组与空白对照组细胞生长速度均较慢,两组间相比较无显著性意义;实验组细胞增殖程度高于阳性对照组、空白对照组(P<0.05);(4)结果表明,重组腺病毒介导的三点突变型HIF1α联合hrGFP基因转染骨髓间充质干细胞后,不仅可在常氧条件下持续表达目的蛋白HIF1α,同时也可促进骨髓间充质干细胞的增殖。

槐耳清膏通过氧化应激诱导结直肠癌细胞发生线粒体途径凋亡

该研究探讨了槐耳清膏通过氧化应激诱导结直肠癌线粒体途径凋亡的具体机制。将HCT116与SW480细胞使用槐耳清膏处理后,通过CCK-8、划痕实验分别检测细胞增殖、迁移能力。Annexin-PE染色检测凋亡细胞。DCFH-DA染色与丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)检测评估细胞氧化应激损伤水平。MitoSOX、JC-1探针分别靶向线粒体活性氧(mitochondria reactive oxygen species, mtROS)与线粒体膜电位(mitochondria membrane potential, MMP)以检测细胞线粒体损伤。Western blot(WB)测定线粒体途径凋亡蛋白与PTEN诱导的推定蛋白激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1)、E3泛素蛋白连接酶Parkin蛋白的表达量。实验表明,在不同浓度槐耳清膏作用下,HCT116、SW480细胞的增殖与迁移能力都受到了抑制,且其可以激活线粒体途径凋亡。与对照组相比,槐耳处理组中结直肠癌细胞的活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平升高,MDA上升且GSH下降,提示其发生氧化应激损伤。槐耳处理组的结直肠癌细胞内mtROS上升,MMP下降,表明线粒体损伤。WB实验结果表明,槐耳清膏抑制PINK1/Parkin通路,阻碍了受损线粒体的清除并促进线粒体途径凋亡。该研究表明,槐耳清膏对结直肠癌细胞造成氧化应激与线粒体损伤,抑制PINK1/Parkin通路并促进结直肠癌细胞线粒体途径凋亡。