木犀草素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及自噬的影响

目的探究木犀草素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞体外凋亡和自噬作用的影响。方法采用MTT法观察12.5、25.0、50.0及100.0μmol/L的木犀草素作用24 h对细胞体外活性的影响;运用Hoechst33342染色法和流式细胞术观察体外细胞凋亡情况;Western blotting检测Cleaved Caspase-3蛋白、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)和Beclin1蛋白、P62蛋白及LC3B蛋白。结果MTT法实验结果显示,木犀草素抑制Tca8113细胞增殖,IC50为47μmol/L。Hoechst33342染色结果显示,木犀草素使Tca8113细胞形态发生改变,与时间呈正相关(P<0.05)。流式细胞术结果表明,47μmol/L的木犀草素作用Tca8113细胞12、24 h后,凋亡率高于空白对照组(P<0.05)。Western bloting检测结果表明,木犀草素抑制Bcl-2以及增加Bax表达,导致Cleaved Caspase-3表达增加,促进Tca8113细胞凋亡(P<0.05);同时还升高Beclin1、LC3B、P62蛋白水平(P<0.05)。结论木犀草素影响人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡和自噬的发生。

熊果酸对舌癌细胞Tca8113生长、迁移和凋亡的影响及机制研究

目的探究熊果酸对人舌癌细胞Tca8113体外生长、迁移和凋亡的影响及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法及克隆形成实验检测熊果酸对Tca8113细胞活性的影响;采用划痕实验检测熊果酸在0、12及24h对Tca8113细胞迁移能力的影响;通过Heochst33342染色和流式细胞术观察熊果酸对Tca8113细胞凋亡的影响;Western blotting检测熊果酸对细胞中磷酸化局部黏着斑激酶(p-Fak)、局部黏着斑激酶(Fak)、活化冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved caspase-3)、Bcl-2-Associated X的蛋白质(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达的影响。结果熊果酸能抑制Tca8113细胞的活性并促进其凋亡(P<0.05),并呈时间、浓度依赖性。熊果酸抑制Bcl-2,并促进Bax、Cleaved caspase-3表达,促进Tca8113细胞凋亡;能降低p-Fak、Fak的表达,抑制Tca8113细胞的迁移。结论熊果酸能抑制Tca8113细胞的生长及迁移,其机制可能与调节Bcl-2/Bax凋亡通路和抑制Fak的激活相关。

槐角苷对多柔比星引起的心肌细胞损伤保护作用的机制研究

目的:探讨槐角苷对多柔比星引起的H9c2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:采用不同浓度的槐角苷预处理H9c2大鼠心肌细胞6 h后,加入终浓度为1μmol/L的多柔比星处理24 h。应用MTT法测定H9c2心肌细胞的活力;采用Hoechst 33342染色及流式细胞术检测H9c2心肌细胞的凋亡情况;采用二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色荧光显微镜检测活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定细胞凋亡蛋白BCL2-相关蛋白X(BAX)、B淋巴瘤细胞-2(BCL-2)、活化半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)及相关信号通路蛋白P38与细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、核因子κ-B(NF-κB)蛋白表达,并使用P38激动剂P79350进一步验证槐角苷与P38/MAPK/NF-κB信号通路的关系。结果:与空白对照组相比,模型对照组H9c2心肌细胞活力显著降低(P<0.01),凋亡率明显增加,H9c2心肌细胞内ROS生成增加(P<0.05),凋亡相关蛋白BAX、Cleaved Caspase-3表达上调,BCL-2表达下调,P38、ERK、JNK磷酸化蛋白表达上调,NF-κB表达上调(P<0.01);与模型对照组相比,槐角苷预8.65、34.59μg/mL处理后,H9c2心肌细胞活力显著升高(P<0.01),凋亡率明显降低(P<0.05),细胞内ROS生成降低(P<0.05),BAX、Cleaved Caspase-3表达下调(P<0.01),BCL-2表达上调(P<0.01),P38、ERK、JNK磷酸化蛋白表达下调(P<0.05),NF-κB表达下调(P<0.05);加入P38激动剂P79350后,与槐角苷34.59μg/mL组相比,槐角苷减轻多柔比星H9c2心肌细胞损伤的作用被明显逆转(P<0.05)。结论:槐角苷通过下调P38/MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白的表达从而减少ROS生成,抑制氧化应激,减轻多柔比星引起的心肌细胞损伤。

熊果酸对人舌癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的探讨熊果酸(UA)对人舌癌Tca8113细胞体外增殖、凋亡的影响及其机制。方法体外培养Tca8113细胞并将其分为3组:空白组和低、高2个剂量实验组。空白组不做任何处理,实验组用低、高2个剂量(40,80μmol·L^-1)熊果酸处理24 h。以CCK-8法检测细胞增殖情况;以核酸荧光染料染色法和流式细胞术检测细胞凋亡情况;以蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶(Pi3k)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-Erk)和磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)蛋白表达水平。结果空白组和低、高2个剂量实验组的细胞存活率分别为(100.00±0.00)%,(76.27±5.54)%和(49.25±2.69)%;这3组的细胞凋亡率分别为(1.54±1.01)%,(20.79±1.96)%和(54.38±1.81)%;这3组的Pi3k蛋白的相对表达量分别为1.07±0.05,0.81±0.11和0.41±0.07;这3组的p-Akt蛋白的相对表达量分别为0.96±0.03,0.64±0.02和0.29±0.03;这3组的p-Erk蛋白的相对表达量分别为1.74±0.08,1.34±0.07和0.67±0.08;这3组的p-P38MAPK蛋白的相对表达量分别为0.87±0.03,1.17±0.06和1.46±0.09。上述指标:2个剂量实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论熊果酸能显著抑制Tca8113细胞体外生长,其机制可能与下调Pi3k、p-Akt和p-Erk并上调p-P38MAPK的蛋白表达有关。