溴结构域蛋白4与口腔鳞癌HN4细胞系增殖与迁移能力的关系

目的研究溴结构域蛋白4(BRD4)与口腔鳞癌细胞增殖与迁移能力的关系。方法回顾性选取2019年3月至2020年8月锦州医科大学附属第二医院收治的4例口腔鳞状细胞癌患者,收集患者的口腔颌面部肿瘤组织样本。培养口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞和人口腔黏膜正常上皮细胞株HOK细胞,采用蛋白质印迹法检测BRD4蛋白在OSCC组织、邻近的非肿瘤组织中、正常上皮细胞株及OSCC细胞株中的表达水平。采用免疫荧光法检测BRD4在正常上皮细胞株及OSCC细胞株中的表达水平。采用免疫荧光法检测BRD4在HN4细胞中的表达水平。BRD4 siRNA转染HN4细胞干扰BRD4表达,然后Ki67和CCK-8实验检测HN4细胞增殖活力;采用Transwell实验和划痕实验检测BRD4 siRNA处理后的HN4细胞的迁移能力。采用蛋白质印迹法测定上皮间充质转化(EMT)标志蛋白的表达水平。实验中根据研究内容设置对照组和实验组。结果蛋白质印迹法检测结果显示,BRD4在OSCC组织中的相对表达水平为1.330±0.453,远高于其在邻近的非肿瘤组织中的相对表达水平(0.732±0.242),差异有统计学意义(P<0.005)。与HOK细胞相比,BRD4在OSCC细胞系中具有较高的表达水平。qRT-PCR结果显示,BRD4在HOK中的表达水平为1.000±0.321,在OSCC细胞系包括HN4、CAL27、KB、SCC9和SCC25细胞中的相对表达水平分别为7.917±0.784、7.442±0.693、4.852±0.488、7.317±0.534、7.451±0.642,BRD4在HOK中的表达水平均显著低于其在OSCC细胞系中的表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示,BRD4可表达于HN4细胞的细胞核和细胞质中。经BRD4 siRNA转染后,HN4细胞中BRD4的相对表达水平为0.352±0.041,显著低于NC siRNA转染后HN4细胞中BRD4表达水平(0.746±0.002),差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光实验结果显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞48、72 h后,与对照组相比,细胞的增殖活力差异均无统计学意义(P>0.05);CKK8实验结果也显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞24、48和72 h后,与对照组相比,细胞的增殖活力差异均无统计学意义(P>0.05)。划痕实验结果显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞12、24和36 h后,与对照组比较,划痕面积差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞12、24 h后,实验组细胞迁移数分别为9.883±0.792、20.110±2.981,显著低于对照组(15.487±1.729、37.389±3.288),差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,BRD4 siRNA处理HN4细胞后,E-cadheirn表达水平增加,而N-cadheirn、Vimentin和BRD4蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BRD4在口腔鳞癌细胞中表达水平高于正常细胞,BRD4基因沉默后,不会影响肿瘤细胞的增殖,但仍然会促进口腔癌细胞迁移和EMT进程。