青藤碱对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MyD88、TRAF-6表达的影响

目的:探讨青藤碱(Sinomenine,SIN)对TLR信号转导通路及髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor88,My D88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumor necrosis factor receptor associated factor-6,TRAF-6)表达的影响,阐明SIN抑制类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)增生导致RA软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形的作用机制。方法:体外培养RA-FLS细胞,分为对照组与(0.125、0.25、0.5、1 mmol/L)SIN组,通过检测各组细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,确定体外用药最佳药物浓度;CCK-8法检测0.5 mmol/L SIN组的细胞增殖率;荧光定量PCR法测定对照组与0.5 mmol/L SIN组My D88和TRAF-6基因表达;Western blot法检测对照组与0.5 mmol/L SIN组My D88和TRAF-6蛋白表达。结果:SIN各组ALP活性均低于对照组,其中以0.5 mmol/L SIN组的ALP活性为最低(P<0.01)。CCK-8法检测,0.5 mmol/L SIN组RA-FLS细胞增殖率明显低于对照组(P<0.01),SIN诱导第4天细胞增殖率最高,进入平台期,之后细胞的增殖率开始下降。荧光定量PCR和Western blot法检测,0.5 mmol/L SIN组的My D88和TRAF-6基因及蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:SIN通过对TLR信号转导通路的影响有效地抑制RA-FLS细胞内My D88和TRAF-6的表达,这可能是其治疗RA防止软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形发生的重要分子机制之一。

鹿茸多肽对人骨髓间充质干细胞BMP-2和Runx2表达的影响

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中骨形态发生蛋白2(BMP-2)和骨特异性转录因子2(Runx2)基因和蛋白表达的影响,阐明其对骨合成及hBMSCs向成骨细胞方向分化的作用机制。方法:体外培养的hBMSCs分为对照组和5、10、15、20g·L-1 VAP组,通过检测各组hBMSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性,确定体外用药最佳药物浓度;CCK-8法检测对照组和10g·L-1 VAP组hBMSCs增殖情况;荧光定量PCR法与Western blotting法测定对照组和10g·L-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因与蛋白的表达。结果:VAP各组细胞中ALP活性均高于对照组,其中以10g·L-1 VAP组细胞中ALP活性最高(P<0.01);CCK-8法,10g·L-1 VAP组hBMSCs增殖率明显高于对照组(P<0.05),VAP诱导培养第9天hBMSCs增殖率最高,且进入平台期,之后hBMSCs的增殖率开始下降;荧光定量PCR和Western blotting检测,10g·L-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因及蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VAP能够提高hBMSCs中ALP活性,促进hBMSCs增殖分化,上调hBMSCs中BMP-2及其下游Runx2基因和蛋白的表达,这可能是VAP对hBMSCs骨形成及骨代谢影响的分子调控机制之一。

人参皂苷Re对UVC辐射损伤细胞的保护作用

目的:研究人参皂苷Re对短波紫外线(UVC)辐射损伤人胚胎纤维芽细胞RSa的保护作用,探讨人参皂苷Re抗UVC辐射的作用机制。方法:采用不同强度的UVC辐射RSa细胞,在辐射前后给予50mg.L-1的人参皂苷Re(UVC+Re组),同时设UVC模型组和UVC+Rg1组,利用MTT法检测细胞生存率,采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡情况;酶生化法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性,集落形成分析法检测SOD抑制剂作用细胞后细胞的生存率。结果:MTT法,与UVC模型组比较,UVC+Re和UVC+Rg1组细胞生存率比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。FCM,不同剂量(5、10和15J.m-2)的UVC辐射可引起RSa细胞早期的凋亡,UVC+Re组细胞凋亡率小于UVC模型组。细胞周期检测,UVC辐射可导致G2期细胞百分比增加(P<0.01),UVC+Re组G2期细胞百分比例明显小于UVC模型组(P<0.01)。UVC+Re组SOD活性明显高于UVC模型组(P<0.01)。结论:人参皂苷Re有较好的抗UVC效果,能够有效提高RSa细胞的生存率,减少UVC辐射引起的细胞早期凋亡,增加RSa细胞内SOD活性。

雷公藤多苷对强直性脊柱炎患者成纤维细胞中BMP-2表达的影响

目的:探讨雷公藤多苷(LGTDG)对骨形态发生蛋白(BMP)信号转导通路及BMP-2表达的影响,阐明LGTDG抗强直性脊柱炎(AS)骨化的作用机制。方法:体外培养的AS成纤维细胞分为对照组与0.5、1.0、1.5和2.0 mg·L-1给药组,检测各组细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性及最佳药物浓度;CCK-8法检测1.0mg·L-1给药组的细胞增殖率;生化检测法定量检测对照组与1.0 mg·L-1给药组BMP-2表达水平;Western blotting法检测对照组与1.0mg·L-1给药组BMP-2和Cbfal蛋白表达。结果:各给药组细胞中ALP活性均低于对照组,其中以1.0mg·L-1给药组细胞的ALP活性为最低(P<0.01)。CCK-8法检测,1.0mg·L-1给药组AS成纤维细胞增殖率明显低于对照组(P<0.01),LDTDG诱导第4天细胞增殖率最高,进入平台期后细胞的增殖率开始下降。生化检测法和Western blotting法检测,1.0mg·L-1给药组BMP-2的蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。结论:LGTDG通过对BMP信号转导通路的影响有效地抑制AS成纤维细胞内BMP-2表达,延缓细胞向成骨型分化导致AS骨化发生。

葛根素对人肾近曲小管上皮细胞ABCG2表达影响

目的探讨葛根素(Pur)对人肾近曲小管上皮细胞(HK2)内三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)基因与蛋白表达的影响,阐明葛根素治疗痛风的可能机制。方法体外培养HK2细胞,分为对照组与25、50、100、200 mg/L葛根素给药组。CCK-8法检测葛根素对HK2细胞的影响;检测ALP活性,观察HK2细胞内酶促反应状态;荧光定量PCR法、Western blotting法检测对照组与给药组HK2细胞内ABCG2基因蛋白表达。结果葛根素对HK2细胞有促进增殖作用(P<0.05);100 mg/L葛根素组ALP活性最佳(P<0.01)。荧光定量PCR和Western blotting法检测结果显示,葛根素组HK2细胞内ABCG2基因及蛋白表达明显高于对照组,其中100 mg/L葛根素组HK2细胞内ABCG2最为明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论葛根素能够增加HK2细胞内ABCG2基因蛋白的表达,这可能是葛根素调节痛风患者血尿酸水平的重要分子机制之一。

人参、黄芩仿生化提取物对UVB照射HaCaT细胞HIF-1α表达的影响

目的探讨人参、黄芩仿生化提取物(SQBE)对中波紫外线(UVB)照射人永生化角质形成细胞(Ha Ca T)缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响,阐明SQBE预防UVB辐射所致皮肤癌发生的可能作用机制。方法将对数生长期的Ha Ca T细胞,接种于含有10%胎牛血清DMEM培养基的培养皿中,于37℃、5%CO2的细胞培养箱内常规培养;分为对照组和SQBE 1组(终浓度为12.5μg·ml-1的SQBE)、SQBE 2组(终浓度为25.0μg·ml-1的SQBE)、SQBE 3组(终浓度为50.0μg·ml-1的SQBE),各组在给药4 h后与对照组同时进行UVB(0、20、40、60 m J·cm-2)照射;继续培养24 h后,采用MTT法检测细胞生存率,荧光定量PCR法及Western blotting法检测HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白的表达。结果与对照组相同照射剂量比较,SQBE 3组的细胞生存率明显提高(P<0.05),SQBE1组和SQBE 2组差异无统计学意义(P>0.05);SQBE 3组能够有效降低细胞内HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白的表达。结论大剂量人参、黄芩仿生化提取物(SQBE)可通过对细胞内HIF-1α表达的影响,预防UVB辐射导致的皮肤癌发生。