水蛭-虻虫配伍对脑出血体外模型血肿清除的影响及其作用机制

目的研究水蛭-虻虫配伍对脑出血(ICH)体外模型脑血肿内源性清除的影响,探索其促进血肿吸收的作用机制,揭示中药配伍机制。方法取状态良好的小胶质细胞BV-2制成单细胞悬液,随机分为空白组、模型组、辛伐他汀组、不同浓度水蛭水提物组(0.1075、0.2150、0.4300、0.8600、1.7200、3.4400、6.8800、13.7600μg/ml)和不同浓度虻虫水提物组(0.134、0.269、0.538、1.075、2.150、4.250、8.500、17.000μg/ml),根据不同组别加入相应药物,应用噻唑蓝(MTT)法检测各浓度的水蛭、虻虫提取液对于BV-2存活率的影响;免疫荧光法观察红细胞(RBC)诱导BV-2细胞建立的ICH体外模型;流式细胞术检测水蛭、虻虫、水蛭-虻虫对BV-2细胞清除RBC的影响;Western印迹法检测水蛭、虻虫、水蛭-虻虫对BV-2内CD36、Toll样受体(TLR)4、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、核因子-E2相关因子(Nrf)2表达的影响。结果MTT比色法显示,水蛭浓度≥6.88μg/ml,虻虫浓度≥4.25μg/ml对BV-2具有明显的抑制作用(P<0.05);免疫荧光法观察到BV-2吞噬了RBC,显示脑出血体外模型成立。流式细胞检测显示,与模型组相比,水蛭-虻虫组小胶质细胞未吞噬RBC数量明显下降(P<0.05)。Western印迹显示,与空白组比较,模型组CD36、TLR4、PPARγ、Nrf2蛋白表达明显上调(P<0.05);与模型组相比,水蛭-虻虫组TLR4蛋白表达明显下调(P<0.05),CD36、TLR4、PPARγ、Nrf2蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论水蛭-虻虫配伍可以有效促进RBC诱导的BV-2 ICH体外模型血肿的内源性清除。其作用机制与抑制TLR4的表达,上调CD36、PPARγ、Nrf2蛋白表达相关。

辛伐他汀对脑出血体外模型血肿清除的影响及作用机制研究

背景辛伐他汀(SIM)在临床多用于心脑血管疾病的二级预防,但其对脑出血(ICH)后血肿内源性吸收的影响目前尚无明确结论。目的研究SIM对红细胞(RBC)诱导的小鼠神经胶质细胞BV-2的ICH模型内源性血肿清除的影响及其机制。方法 2017年12月-2018年12月,选取生长良好的BV-2细胞制成单细胞悬液,根据加入试剂不同分为空白组、不同浓度SIM组(0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0、20.000 0、40.000 0及80.000 0μmol/L),采用MTT比色法检测不同浓度SIM对于BV-2细胞存活率的影响,采用免疫荧光法观察BV-2细胞吞噬RBC的ICH体外模型。建模后,分为空白组(200μl的MEM完全培养基)、模型组(空白组+RBC)、SIM组(模型组+SIM),采用流式细胞术检测SIM对BV-2细胞清除RBC的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SIM对BV-2细胞内相关蛋白CD47、CD36、Toll样受体(TLR4)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、核转录因子2(NRF2)的表达。结果 MTT比色法结果显示,SIM≥5μmol/L时对BV-2细胞具有明显的抑制作用(P<0.05)。免疫荧光法观察到BV-2细胞吞噬了RBC,显示ICH体外模型成立。流式细胞检测显示,与模型组相比,SIM组小胶质细胞(MG)吞噬RBC数量上调(P<0.05)。Western blot显示,与空白组比较,模型组CD47、CD36、TLR4、PPARγ、NRF2蛋白的表达上调(P<0.05);与模型组相比,SIM组CD47、TLR4蛋白的表达下调(P<0.05),CD36、PPARγ、NRF2蛋白的表达上调(P<0.05)。结论 SIM可以有效促进RBC诱导的BV-2细胞ICH体外模型血肿的内源性清除。其作用机制可能与通过抑制CD47、TLR4的表达,上调CD36、TLR4、PPARγ、NRF2蛋白的表达相关。

桂枝汤的“一气周流”

黄元御在《四圣心源》中提出的"一气周流"理论体系,简洁而完美地阐释了天人合一理念的精髓。黄元御提出的"左升右降,中气斡旋,一气周流"的理论模型,并非仅仅是一个抽象的理论模型,它是"一气周流"的真实写照,是一种真实的境界,是天人合一的真实描述。本文以仲景"群方之魁"———桂枝汤为例,阐述"一气周流"的多层次性,多角度性。