建构主义理论指导下的中药化学PBL教学实践与思考

在建构主义学习理论指导下,开展中药化学课程PBL教学实践。本文就PBL教学法的理论依据及PBL在中药化学教学实践活动中的思考加以阐述,以期为高等中医药院校中药学专业的教学改革提供依据。

人参二醇组皂苷对心肌梗死后心室重构大鼠心脏形态学及血流动力学的影响

目的研究人参二醇组皂苷(Panaxadiol Saponins,PDS)对心肌梗死后心室重构大鼠心脏形态学及血流动力学的影响。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死后心室重构模型。将W istar大鼠随机分成假手术组、模型组、PDS组及卡托普利组。假手术组及模型组腹腔注射生理盐水2ml.kg-1.d-1,PDS组腹腔注射人参二醇组皂苷50mg.kg-1.d-1,卡托普利组灌胃卡托普利100mg.kg-1.d-1。给药4w后观察各组大鼠心脏形态学,血流动力学及组织病理学等参数。结果 PDS能明显降低心室重构大鼠心室脏器指数,升高平均动脉压(MAP)、左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax),降低左心室舒张末压(LVEDP)。此外,PDS还可明显减轻心室重构大鼠心肌组织病理损伤。结论 PDS对大鼠心肌梗死后心室重构具有保护作用。

人参果总皂苷抗肿瘤活性研究

目的:研究人参果总皂苷对体外培养肿瘤细胞的作用,并初步探讨其作用机制。方法:MTT法测定人参果总皂苷的人肺腺癌细胞(SPC-A1)、人胃腺癌(SGC-7901)、人宫颈癌细胞(Hela)、人结肠癌细胞(SW-111C)和人神经胶质瘤细胞(U251)等5个人肿瘤细胞株增殖的影响;电镜观察人参果总皂苷对肿瘤细胞形态学的影响;Western blot免疫印记法检测人参果总皂苷对SPC-A1细胞周期相关蛋白表达的影响。结果:0.5μg/ml人参果总皂苷对5个人肿瘤细胞株的增殖均有抑制作用;0.5μg/ml人参果总皂苷作用于SPC-A1细胞后,透射电镜下可见细胞核染色质边集、核碎裂及凋亡小体情况,具有一定的促进肿瘤细胞凋亡的作用;cyclinD和CDK4的蛋白表达逐渐减少,周期蛋白cyclin及其相关激酶CDK2和CDK1蛋白表达量随着药物作用时间的延长均有所增加。结论:人参果总皂苷对肿瘤细胞的增殖具有抑制作用,其作用机制可能与促进肿瘤细胞的凋亡有关诱导其凋亡使细胞停滞于G2/M期密切相关。

人参二醇组皂苷对心室重构大鼠的抗氧化作用及神经内分泌因子的影响

目的观察人参二醇组皂苷(PDS)对实验性心室重构大鼠的抗氧化作用及神经内分泌因子的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死后心室重构模型。将Wistar大鼠(雌雄各半)随机分成假手术组、模型组、PDS组及卡托普利组。假手术组及重构模型组腹腔注射生理盐水2 ml.kg-1.d-1,PDS组腹腔注射人参二醇组皂苷50mg.kg-1.d-1,卡托普利组灌胃卡托普利100 mg.kg-1.d-1。给药4周后测定体内血浆内皮素(ET)、心钠素(ANP)、醛固酮(ALD)及血管紧张素(AngⅡ)含量,血清丙二醛(MDA)及心肌AngⅡ含量,血清超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果人参二醇组皂苷能明显降低心室重构大鼠血浆ET、ANP、ALD及AngⅡ含量,降低血清MDA及心肌AngⅡ含量,提高血清SOD及GSH-Px活性。结论 PDS对大鼠心肌梗死后心室重构具有保护作用,可能与其抑制肾素血管紧张素醛固酮系统从而降低缩血管物质水平及增强心肌的抗氧化能力有关。

三苦滴丸成型工艺条件优选

目的:探讨三苦滴丸成型工艺的条件,为近一步开发治疗冠心病和心绞痛的中药新药提供依据。方法:以滴丸的溶散时限、丸重差异及外观(圆整度、硬度、色泽均匀性)作为评价指标,采用单因素考察法对三苦滴丸的冷却剂种类、滴距进行选择,采用正交实验法对2种基质的比例、药物与基质的比例及滴制时药液温度进行优选。结果:三苦滴丸最佳成型工艺条件是以二甲基硅油为冷却剂,PEG4000∶PEG6000=1∶6作为基质,药物与基质的比例为1∶2,药液温度80℃,滴距为5cm,滴速18～20滴.min-1。结论:优选出的成型工艺条件稳定可行,适合于大规模生产。

人羊膜成纤维细胞的分离和鉴定

目的:建立人羊膜成纤维细胞的体外培养方法,通过细胞的形态特征和免疫组织化学进行鉴定,从而获得人羊膜成纤维细胞,为后续的干细胞研究奠定基础。方法:从足月分娩人胎盘剥离羊膜,胰蛋白酶和胶原酶消化后分离人羊膜成纤维细胞,采用含表皮生长因子(EGF)的DMEM培养基进行培养。显微镜下观察细胞形态表现,采用HE染色和免疫组织化学染色分析细胞特征,采用流式细胞术(FCM)分析人羊膜成纤维细胞的纯度。结果:采用胰蛋白酶和胶原酶先后消化获得人羊膜成纤维细胞,显微镜下观察,细胞呈放射状或旋涡状生长。免疫组织化学染色,人羊膜成纤维细胞明显表达成纤维细胞标志物波形蛋白(Vimentin),不同程度地表达S100钙结合蛋白A4(S100A4),不表达上皮细胞标志物角蛋白19(CK19)。流式细胞术分析,人羊膜成纤维细胞的纯度为86.1%。结论:成功建立了人羊膜成纤维细胞分离和鉴定方法,获得的细胞具有成纤维细胞的特异标志和表型特征。

丹参多酚酸盐对大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响

目的丹参多酚酸盐对大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响。方法 40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参多酚酸盐预处理组(预处理组)、丹参多酚酸盐后处理组(后处理组),每组10只。除假手术组外其他三组结扎左冠状动脉前降支和左右颈总动脉40 min,再灌注100 min。预处理组建模前1 h给予丹参多酚酸盐30 mg/kg腹腔注射;模型组给予生理盐水30 mg/kg;后处理组在建模后给予丹参多酚酸盐30 mg/kg。观察各组心肌梗死面积,应用考马斯亮蓝法检测大鼠血浆乳酸脱氢酶(LDH),心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果①假手术组心肌无梗死现象,预处理组心肌梗死面积明显低于模型组和后处理组(P<0.05)。模型组LDH活性明显升高(P<0.01),预处理组LDH活性明显低于模型组和后处理组(P<0.01)。②模型组MDA水平明显高于假手术组,SOD水平明显低于假手术组(P<0.01)。预处理组MDA水平明显低于模型组和后处理组,但仍明显高于假手术组(P<0.01);SOD水平明显高于模型组和后处理组,但明显高于假手术组(P<0.05)。结论丹参多酚酸盐对心脏缺血再灌注损伤有保护作用,可能与其抗氧化作用有关。

参附汤血中移行成分对缺氧复氧心肌细胞凋亡和自噬的影响

目的:观察参附汤血中移行成分对缺氧复氧心肌细胞凋亡和自噬的影响,探讨参附汤血中移行成分心肌保护作用机制。方法:建立缺氧复氧心肌细胞损伤模型,采用MTT法检测心肌细胞的存活率,TUNEL显色法检测细胞凋亡率,Western blotting法测定自噬相关基因Beclin-1表达量。结果:与正常对照组相比,缺氧复氧组细胞存活率降低,细胞凋亡率和Beclin-1表达量明显升高,参附汤血中移行成分组可明显提高缺氧复氧组心肌细胞的存活率,降低细胞凋亡率和抑制Beclin-1表达。结论:参附汤血中移行成分可保护缺氧复氧的心肌细胞,据有抑制细胞凋亡和自噬的作用。

养血饮口服液对失血性贫血小鼠的影响

目的:通过小鼠眼眶后静脉丛放血法建立失血性贫血小鼠模型,观察养血饮口服液对失血性贫血小鼠的影响.方法:通过小鼠眼眶后静脉丛放血法,建立失血性贫血模型,观察给药后各组小鼠的血红蛋白(Hb)和红细胞(RBC)变化,并且用酶联免疫吸附法测定血清中的促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO).结果:造模成功后,RBC数目和Hb含量明显降低,EPO反馈性增加.而给予养血饮口服液的小鼠,其RBC和Hb都得到了明显的改善,并且血清中的EPO进一步升高.结论:通过实验可知,养血饮口服液能够增加失血性贫血小鼠的Hb含量和RBC数目,而这些作用可能与其增加血中EPO的含量有关.

延冰通心片对心肌梗死大鼠血流动力学及抗氧化损伤能力的影响

目的研究延冰通心片对心肌梗死模型大鼠血流动力学及抗氧化损伤能力的影响。方法通过异丙肾上腺素诱导建立心肌梗死模型。将50只Wistar雄性大鼠随机分成空白对照组、心肌梗死模型组、延冰通心片低剂量组、延冰通心片高剂量组及卡托普利组。空白对照组及心肌梗死模型组灌胃蒸馏水,延冰通心片低剂量组灌胃延冰通心片溶液,剂量为30 mg/kg/d,延冰通心片高剂量组灌胃延冰通心片溶液,剂量为60 mg/kg/d,卡托普利组灌胃卡托普利溶液,剂量为50 mg/kg/d,所有组大鼠灌胃给药体积均为20 m L/kg/d。给药4周后测定各组大鼠观察各组大鼠心脏形态学,血流动力学参数,测定大鼠体内血清丙二醛(MDA)含量,血清超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性等参数。结果延冰通心片能明显降低心肌梗死模型大鼠的心室脏器指数,升高平均动脉压(MAP)、左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax),降低左心室舒张末压(LVEDP)。降低心肌梗死模型大鼠体内血清MDA含量,提高血清SOD及GSH-Px活性。结论延冰通心片通过改善心肌梗死模型大鼠血流动力学及增加机体抗氧化能力发挥其对心肌梗死模型大鼠的保护作用。

血清MMP-2、TIMP-1及hs-CRP与2型糖尿病颈动脉粥样硬化的相关性研究

目的探讨血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织抑制因子-1(TIMP-1)及高敏C反应蛋白(hs-CRP)与2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉粥样硬化的关系。方法选择62例T2DM患者作为研究对象,测量患者颈动脉内中膜厚度(IMT)、斑块情况。根据IMT值将选取T2DM患者分为3组:单纯糖尿病组21例(糖尿病组),糖尿病颈动脉内中膜增厚组21例(中膜增厚组),糖尿病颈动脉粥样硬化斑块形成组20例(斑块组);另选健康查体者20名作为正常对照组。测定血清MMP-2、TIMP-1及hs-CRP水平并进行相关分析。结果与正常对照组相比,3组糖尿病患者血清MMP-2、hs-CRP水平升高,TIMP-1降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与单纯糖尿病组比较,中膜增厚组MMP-2、hs-CRP水平升高,TIMP-1降低,差异有统计学意义(P<0.05);斑块组MMP-2、hs-CRP水平明显高于单纯糖尿病组和中膜增厚组,TIMP-1低于单纯糖尿病组和中膜增厚组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论血清MMP-2、hs-CRP升高及TIMP-1降低与颈动脉粥样硬化的病变程度密切相关。

延冰通心片对大鼠心肌梗死的保护作用及作用机制研究

目的观察延冰通心片对大鼠心肌梗死模型的影响并探讨其作用机制。方法通过异丙肾上腺素诱导建立心肌梗死模型。将50只Wistar雄性大鼠随机分成空白对照组、心肌梗死模型组、延冰通心片低剂量组、延冰通心片高剂量组及卡托普利组。空白对照组及心肌梗死模型组灌胃蒸馏水,延冰通心片低剂量组灌胃延冰通心片溶液,剂量为30 mg/kg/d,延冰通心片高剂量组灌胃延冰通心片溶液,剂量为60 mg/kg/d,卡托普利组灌胃卡托普利溶液,剂量为50 mg/kg/d,所有组大鼠灌胃给药体积均为20 mL/kg/d。给药4周后测定各组大鼠体内血浆内皮素(ET)、心钠素(AN P)、醛固酮(ALD)、血管紧张素(AngⅡ)含量及心肌AngⅡ含量。测定各组大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶(CKMB)的活性。结果延冰通心片能明显降低心肌梗死大鼠血浆ET、ANP、ALD、AngⅡ含量及心肌AngⅡ含量,还能够降低乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶(CKMB)的活性。结论延冰通心片对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌梗死具有保护作用,可能与其抑制肾素血管紧张素醛固酮系统,降低缩血管物质含量进而保护心肌细胞有关。

便携式近红外测定龙胆中水溶性浸出物及龙胆苦苷含量

利用近红外光谱技术,分别建立快速分析龙胆药材中水溶性浸出物及龙胆苦苷含量的定量分析模型。采用高效液相色谱法测定龙胆中龙胆苦苷含量,依据《中华人民共和国药典》2015版四部通则2201项下“水溶性浸出物测定法”测定龙胆中水溶性浸出物。采集90批龙胆样品的近红外光谱图,结合偏最小二乘法,分别建立最优定量分析模型。所建立的2个模型相关系数(R2)分别为0.9333和0.9505,校正均方差(RMSEC)分别为0.7327和0.2523,预测均方差(RMSEP)分别为0.6906和0.2342;用验证集样品进行模型验证,平均相对偏差分别为0.06%和0.30%。结果表明,近红外光谱法可用于龙胆中水溶性浸出物及活性成分的定量分析,其处理简单、操作简便、快速无损,且结果较准确。该方法在龙胆药材的质量控制及在线监测等方面具有广阔的应用前景。

龙胆生品及龙胆酒制品给药后龙胆苦苷在大鼠主要器官组织中的浓度分布

目的:探讨龙胆酒制前后龙胆苦苷在大鼠主要器官组织中的浓度分布,为进一步研究龙胆药材的炮制方法与其功效的相关性提供科学依据。方法:将60只大鼠随机分为龙胆生品组和龙胆酒制品组,分别灌胃给药龙胆生品及龙胆酒制品(0.63 g·kg^-1),于6个不同时间点(15、30、60、120、240和360 min)处死大鼠,每时间点每组各5只大鼠。采用液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)法测定各组不同时间点龙胆苦苷在大鼠心、肝、脾、肺、肾和脑组织中的质量浓度。结果:龙胆苦苷在50~20000μg·L^-1范围内线性关系良好(r≥0.9969);该方法的精密度和稳定性相对标准偏差(RSD)均小于15%;回收率为77.4%~87.2%,RSD小于15%,符合化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则;HPLC-MS法检测,龙胆苦苷在大鼠体内分布比较广泛,在大鼠心、肝、脾、肺、肾和脑等组织中均有分布;30 min时龙胆生品及酒制品中龙胆苦苷质量浓度在大鼠心脏组织中达到峰值,60 min时在肝、脾和肺组织中达到峰值;与龙胆生品组比较,龙胆酒制品组龙胆苦苷在大鼠肝、肺和肾组织中的药-时曲线下面积(AUC 0→360 min)明显增加(P<0.01),在脑组织中小幅增加(P<0.01),在心和脾组织中稍有降低(P<0.05)。结论:龙胆酒制后能够促进龙胆苦苷在肝和肾等器官中的吸收利用,改变龙胆苦苷在大鼠主要器官组织中的浓度分布。

参附汤血中移行成份对心源性休克大鼠血流动力学及能量代谢的影响

目的:观察参附汤血中移行成份对心源性休克大鼠血流动力学及能量代谢的影响。方法:结扎大鼠冠状动脉左前降支(LAD)复制心源性休克模型,观察参附汤血中移行成份对麻醉大鼠血流动力学及能量代谢各项指标的作用;取心肌进行能量代谢相关酶的检测。结果:参附汤(3g/kg)、参附汤血中移行成份(相当于生药3g/kg)可升高左室内压(LVSP)、±dp/dtmax;提高休克大鼠心肌细胞ATP、ADP含量降低AMP含量,降低MOD含量。结论:参附汤及其血中移行成份对大鼠急性心源性休克具有一定的治疗作用并能调整心脏能量代谢。

人参果总皂苷对人宫颈癌Hela细胞抗肿瘤作用及机制的研究

目的:研究人参果总皂苷对体外培养的肿瘤细胞作用,并初步探讨其作用机制。方法:MTT法测定人参果总皂苷对人宫颈癌细胞(Hela)细胞株的增殖的影响;电镜观察人参果总皂苷对肿瘤细胞形态学的影响;Western blot免疫印记法检测人参果总皂苷对Hela细胞细胞周期相关蛋白表达的影响。结果:0.125、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00μg/ml人参果总皂苷对Hela细胞的增殖均有抑制作用;0.5μg/ml人参果总皂苷作用于Hela细胞后,透射电镜下可见细胞核染色质边集、核碎裂及凋亡小体情况,具有一定的促进肿瘤细胞凋亡的作用;cyclin和CDK4的蛋白表达逐渐减少。结论:人参果总皂苷对肿瘤细胞的增殖具有抑制作用,其作用机制可能与促进肿瘤细胞的凋亡有关诱导其凋亡使细胞停滞于G2/M期密切相关。

响应曲面法优化金钱草总黄酮的超滤工艺研究

目的利用响应曲面法对金钱草总黄酮纯化工艺进行优化。方法选择跨膜压力、药液温度及药液浓度为自变量,总黄酮纯度为响应值,采用Box-Behnken设计研究各自变量及其交互作用对总黄酮提取率的影响。利用Design Expert软件对数据进行回归分析,得到回归方程的预测模型。结果金钱草总黄酮超滤的优化工艺为:在跨膜压力0.27 MPa、药液温度34℃、药液浓度0.24 g(生药)/ml的条件下进行错流循环超滤,总黄酮纯度的理论值为18.38%,实际值为18.20%。结论响应曲面法确定的工艺条件纯化金钱草总黄酮效果良好。

参附汤血中移行成分对缺氧复氧心肌细胞凋亡和自噬的影响

目的:观察参附汤血中移行成分对缺氧复氧心肌细胞凋亡和自噬的影响,探讨参附汤血中移行成分心肌保护作用机制.方法:建立缺氧复氧心肌细胞损伤模型,采用MTT法检测心肌细胞的存活率,TUNEL 显色法检测细胞凋亡率,Western blotting法测定自噬相关基因Beclin-1表达量.结果:与正常对照组相比,缺氧复氧组细胞存活率降低,细胞凋亡率和Beclin-1表达量明显升高,参附汤血中移行成分组可明显提高缺氧复氧组心肌细胞的存活率,降低细胞凋亡率和抑制Beclin-1表达.结论:参附汤血中移行成分可保护缺氧复氧的心肌细胞,据有抑制细胞凋亡和自噬的作用.