糖尿病性勃起功能障碍的中医证型探讨及实验研究

目的探讨糖尿病性勃起功能障碍(DMED)的中医证型及中药治疗效果。方法将糖尿病模型大鼠随机分为模型组、胰岛素组、疏肝解郁组、活血化瘀组、温补肾阳组和滋补肾阴组,并设立正常组。治疗8周后,通过检测各组大鼠最大海绵体内压/平均动脉压(ICPmax/MAP)评估阴茎勃起功能,并测定和比较各组凝血酶原(PT)、纤维蛋白原(FIB)、皮质醇(CORT)、三碘甲状腺原氨酸(T_(3))、甲状腺素(T_(4))、促甲状腺激素(TSH)、睾酮(T)及促肾上腺皮质激素(ACTH)水平。结果阴茎勃起功能检测结果表明,与模型组比较,活血化瘀组大鼠的阴茎勃起功能显著改善(P<0.01),FIB和PT水平显著降低(P<0.01);疏肝解郁组大鼠的阴茎勃起功能显著改善(P<0.01),但CORT及ACTH水平未见显著变化(P>0.05);温补肾阳组和滋补肾阴组大鼠的阴茎勃起功能显著改善(P<0.05,P<0.01),但CORT、ACTH、T、T_(3)、T_(4)及TSH水平未见显著变化(P>0.05);胰岛素组大鼠的阴茎勃起功能及各项血液指标未见显著改善(P>0.05)。结论DMED的中医证型更倾向于血瘀型,治疗血瘀型疾病的少腹逐瘀汤对于DMED具有更好的治疗效果。

基于UHPLC-MS/MS法分析补肾利咽汤物质基准的特征图谱暨多指标成分的筛选与含量测定研究

目的采用超高效液相-质谱(UHPLC-MS/MS)法同时测定补肾利咽汤(BSLYT)中化学成分,建立BSLYT物质基准的高效液相色谱指纹图谱及莫诺苷、马钱苷、木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷、落新妇苷等6种主要成分的含量测定方法,为质量控制提供参考。方法利用质谱数据,建立指纹图谱。用外标法计算BSLYT样品中主要成分的含量,并结合化学计量学方法分析不同批次样品的差异。结果质谱共指认出了69种化合物,经过与高效液相色谱比对,共指认出13种化合物。15批BSLYT物质基准特征图谱的相似度在0.90以上,共指认了27个共有峰。聚类分析(CA)将物质基准分为2类,即S1、S2、S5、S8、S9、S13、S15为一类,S3、S4、S6、S7、S10-S12、S16为一类。通过主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLSDA),筛选出影响物质基准分类的化学成分,分别归属于木蝴蝶、山茱萸和土茯苓。多指标成分含量测定6个成分,分别为莫诺苷、马钱苷、木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷、落新妇苷含量范围分别在0.31%-0.51%、0.12%-0.22%、0.09%-0.19%、0.09%-0.24%、0.07%-0.18%、0.08%-0.29%。结论本文建立的指纹图谱和多指标含量测定方法准确、稳定,为补肾利咽汤的物质基准及相关制剂的质量控制提供依据。

解毒通络保肾法对实验性DM大鼠肾足细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的影响

目的探讨解毒通络保肾法对实验性糖尿病(DM)大鼠肾足细胞保护作用机制。方法 60只Wistar大鼠,雌雄各半,给予高糖高脂饲料,适应性喂养1 w,随机分为阴性对照组(A组,n=10),其余为造模组。喂养4 w后,造模组用链脲佐菌素50 mg/kg腹腔注射造模;造模成功的大鼠随机分为模型组(B组,n=10)、中药组(C组,n=10)。C组给予解毒通络保肾散每次4 ml,日灌胃1次;A、B组大鼠给予等体积蒸馏水。灌胃8 w后,观察各组大鼠空腹血糖(FPG)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白(mAlb)的变化情况,取肾脏,制备肾组织匀浆。采用酶联免疫吸附试验检测大鼠肾脏足细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平。结果与A组相比,B、C组Bax、Caspase-3及Bax/Bcl-2表达均显著增加,Bcl-2表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与B组相比,C组Bax、Caspase-3及Bax/Bcl-2表达均显著降低,Bcl-2表达显著上升(P<0.01,P<0.05)。结论解毒通络保肾法能够降低实验性DM大鼠空腹血糖,保护肾功能,减少尿蛋白的产生,其机制可能是下调Bax表达,上调Bcl-2表达,致Bax/Bcl-2比例下降,从而减少细胞凋亡执行蛋白酶Caspase-3的产生,起到抑制足细胞凋亡的作用,保护肾小球滤过屏障。

枸杞子潜在燥性反应对小鼠特性表征的影响

目的 明确不同剂量枸杞子与小鼠燥性反应特性表征的关系及其对生理生化指标变化的影响。方法 将40只雄性老年小鼠随机分为空白组,枸杞子高、低剂量组,并以经典热性药方干姜、附子、肉桂作为阳性药组,连续给药14 d并记录小鼠一般体征变化,利用苏木素-伊红(HE)染色和免疫组化检测脾脏组织的病理学改变。同时,检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)活力及相关炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和CC家族趋化因子配体(CCL)2的表达变化。结果 与空白组比,热性药方和高剂量枸杞子均能使小鼠出现体质量下降、摄食量减少、饮水量增多和毛发干枯等燥性反应特性的症状。枸杞子高剂量组出现脾脏异常增大、脾脏指数升高的变化,通过HE染色及免疫组化观察发现其脾脏结构发生显著变化,红髓与白髓界限模糊,脾小体结构不清晰且有炎性细胞浸润等现象。在病理学改变基础上,高剂量枸杞子和热性药方均能够显著促进TNF-α、IL-1β、IL-6和CCL2因子表达,同时显著降低CAT、SOD、GSH-px活性并显著提升MDA活性(P<0.05)。结论 枸杞子高剂量组能够引起氧化应激损伤和炎症因子表达失衡,这可能是过量服用枸杞子伴随着燥性反应症状发生的原因之一。

肠-肝轴在动脉粥样硬化发生发展中作用的研究进展

肠-肝轴是指肠道和肝脏之间进行物质交换的双向通道,具有调节机体糖脂和炎症的作用。肠-肝轴主要通过维持机体肝肠循环的动态平衡,影响肝脏和肠道功能来调节肠道菌群,调控胆汁酸(BAs)代谢,促进胆固醇的合成与分解,进而调节机体的脂质代谢和炎症反应等。动脉粥样硬化(AS)是糖脂代谢异常的炎症性疾病,是引发患者心血管疾病(CVD)甚至死亡的重要原因。现阶段关于AS的发病机制尚不明确,多认为AS与糖脂和炎症相关,因此肠-肝轴与AS之间可能存在一定的关联。现结合近年来国内外关于肠-肝轴与AS的相关研究,从AS的发病机制、肠-肝轴的概念和肠-肝轴调控AS进程的相关机制,包括肠道菌群、BAs代谢、胆固醇代谢、炎症反应和中医学研究等方面进行论述,旨在为AS的防治提供新的思路。

基于UFLC-MS/分子模拟计算的吴茱萸醇提取物中胆碱酯酶抑制剂筛选

采用超高速液相色谱⁃质谱(UFLC⁃MS)研究了吴茱萸醇提取物中入血小分子化合物的体内药代动力学过程.同时对UFLC⁃MS生物样品分析方法进行包括特异性、线性、精密度、准确度、稳定性、基质效应和回收率等考察,结果表明,该方法稳定可靠,且醇提取物中10个生物碱类化合物均被胃肠道快速吸收,并且多数化合物血药浓度在1~2 h左右达到峰值.将吸收入血的10个生物碱类化合物与乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱脂酶进行柔性分子对接及构效关系分析,发现其中活性最高的为去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸酰胺Ⅰ4个吲哚型生物碱,它们与乙酰胆碱酯酶的对接打分均在-46.02 kJ/mol以下;与丁酰胆碱脂酶对接打分均在-41.84 kJ/mol以下.吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱和吴茱萸酰胺可能是以乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱脂酶为靶点的胆碱酯酶抑制剂前体化合物.

鹿茸多肽对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3增殖和胶原蛋白分泌能力的影响及其机制

目的:探讨鹿茸多肽对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3增殖和胶原蛋白分泌能力的影响,并阐明其相关作用机制。方法:选取对数生长期的NIH/3T3细胞,加入不同剂量(1.56、3.13、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00和200.00mg·L^(-1))鹿茸多肽作为实验组,以加入0mg·L^(-1)鹿茸多肽的细胞作为空白对照组,以加入50μg·L^(-1)碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的细胞作为阳性对照组。MTT法检测各组NIH/3T3细胞存活率,ELISA法检测各组NIH/3T3细胞中胶原蛋白分泌情况,划痕愈合实验检测各组NIH/3T3细胞的迁移能力,Western blotting法检测各组NIH/3T3细胞的细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK 1/2)的磷酸化蛋白(p-ERK 1/2)表达水平,免疫荧光法检测转化生长因子β1 (TGF-β1)的表达情况。结果:与空白对照组比较,阳性对照组和6.25、12.50、25.00、50.00、100.00及200.00mg·L^(-1)鹿茸多肽组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,阳性对照组和6.25、12.50、25.00和50.00mg·L^(-1)鹿茸多肽组NIH/3T3细胞培养液中Ⅰ型胶原蛋白水平明显升高(P<0.05或P<0.01),阳性对照组和12.50及25.00mg·L^(-1)鹿茸多肽组NIH/3T3细胞培养液中Ⅲ型胶原蛋白水平明显升高(P<0.05)。与空白对照组比较,阳性对照组和12.50mg·L^(-1)鹿茸多肽组细胞划痕愈合率、NIH/3T3细胞中p-ERK 1/2表达水平及NIH/3T3细胞质中TGF-β1表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:鹿茸多肽能促进NIH/3T3细胞增殖和胶原蛋白分泌,并提高其迁移能力,其作用机制是可能是通过激活ERK 1/2磷酸化及增加TGF-β1表达实现的。

β-榄香烯对非小细胞肺癌细胞迁移的影响及其机制研究

目的探究β-榄香烯对非小细胞肺癌细胞迁移的影响及其作用机制。方法将人非小细胞肺癌A549细胞分为5组:空白对照组、β-榄香烯低、中、高剂量组(10μg·mL;、25μg·mL;、50μg·mL;)、顺铂(Cisplatin,CDDP,20μmol/L)组。根据分组,分别用对应的药物处理细胞。Hoechst 33258染色观察细胞凋亡;Transwell小室检测细胞迁移;Western blot检测E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)与磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase B,p-AKT)表达水平。结果与空白对照组相比,β-榄香烯高剂量组A549细胞出现凋亡现象,各β-榄香烯组的A549细胞迁移数量均显著减少(P<0.05),β-榄香烯中、高剂量组A549细胞E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Vimentin、p-PI3K与p-AKT蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论β-榄香烯能诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡,抑制上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)过程,进而减弱迁移能力,其作用机制可能与干扰PI3K/AKT信号通路的激活有关。

银杏叶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其降血糖作用机制

目的:通过体外药效学实验研究银杏叶提取物(GBE)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,探讨其降血糖的作用机制,为开发利用银杏叶资源提供实验依据。方法:提取大鼠小肠中的α-葡萄糖苷酶液,利用葡萄糖试剂盒测定酶活力;体外抑制实验分为正常对照组、阳性对照组及GBE高、中、低剂量组(10.0、5.0、2.5 g.L-1),对反应体系中的葡萄糖浓度进行测定,计算药物对蔗糖酶的抑制率;离体器官实验分为正常对照组、阴性对照组、阳性对照组和GBE高、中、低剂量组(10.0、5.0、2.5 g.L-1),对反应体系中的淀粉光密度值进行测定,计算药物对淀粉酶的抑制率;半数抑制率(IC50)实验将GBE分为7个剂量组,分别计算药物对α-糖苷酶的抑制率及IC50;抑制曲线实验分为正常对照组、阳性对照组及GBE组,计算反应速率,以底物浓度的倒数作为横坐标,以反应速率的倒数作为纵坐标,绘制抑制曲线。结果:大鼠小肠酶活力值为67.2活力单位。与正常对照组比较,GBE高、中、低剂量组蔗糖酶抑制率明显增加(P<0.001,P<0.001,P<0.01);与正常对照组比较,GBE高剂量组大鼠小肠中淀粉酶抑制率明显增加(P<0.01);GBE对蔗糖酶的IC50值为0.758 6 g.L-1,对淀粉酶的IC50值为0.910 1 g.L-1;GBE组趋势线与正常对照组斜率相近,且截距大于正常对照组趋势线。结论:GBE对α-糖苷酶具有良好的抑制作用,其作用机制为反竞争性抑制。

解毒通络保肾法对高糖刺激下小鼠足细胞PI3K/Akt信号通路活化相关因子ILK、Akt及足细胞凋亡率的影响

目的探讨解毒通络保肾法对高糖刺激下小鼠足细胞损伤的保护作用。方法体外培养小鼠足细胞,随机分为A组(正常糖组)、B组(高糖组)、C组:高糖+低剂量解毒通络保肾血清组、D组:高糖+中剂量解毒通络保肾血清组、E组:高糖+高剂量解毒通络保肾血清组。用酶联免疫吸附试验检测各组整合素连接激酶(ILK)及蛋白激酶B(Akt)的表达。流式细胞仪检测足细胞凋亡率。结果与A组相比,B、C、D、E组ILK表达均显著增加(P<0. 05,P<0. 01),与B组相比,C、D、E组ILK表达均降低,但只有D、E组差异有统计学意义(P<0. 05,P<0. 01);与A组比较,B、C、D、E组Akt表达均显著降低(P<0. 05,P<0. 01),而与B组对比,C、D、E组Akt表达增加,但只有E组差异有统计学意义(P<0. 05)。与A组相比,B、C、D、E组细胞凋亡率均显著增加(P<0. 01),与B组相比,C、D、E组细胞凋亡率显著降低(均P<0. 01),与C组相比,D、E组凋亡率显著降低(均P<0. 01)。结论解毒通络保肾散可以保护高糖刺激下小鼠肾足细胞,降低细胞凋亡率,其保护机制可能是通过阻断ILK介导的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt信号通路。

基于网络药理学肝脂溶颗粒治疗2型糖尿病合并脂肪肝的分子机制

目的基于网络药理学和生物信息学方法分析肝脂溶颗粒治疗2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)的分子生物学机制。方法利用中医药成分数据库TCMSP/TCMID/TCM Database@Taiwan建立本方成分数据库。应用IPA、OMIM、NCBI等数据库检索疾病靶点,并建立数据库,应用DAVID完成主要功能靶点预测,建立成分与靶点之间的预测关系,通过Omicshare平台,完成预测通路的富集分析高级气泡图。结果肝脂溶颗粒可调控FOXO通路中41个相关靶点,根据细胞实验结果证实,肝脂溶颗粒治疗T2DM合并NAFLD可能是通过调控FOXO1实现的。结论通过构建肝脂溶颗粒“成分-靶标”网络图并进行分析,再从体外实验水平上进行肝脂溶颗粒对T2DM合并NAFLD分子机制的研究,从而证实了肝脂溶颗粒通过调控FOXO1蛋白起到改善胰岛素抵抗来治疗T2DM合并NAFLD。

一年蓬研究进展

概述了菊科飞蓬属植物一年蓬化学成分及药理活性的研究进展。

输血前不规则抗体筛查临床意义探讨

目的探讨输血前进行不规则抗体筛查在临床输血中的意义及价值。方法选择2020年1月-2021年1月在本院申请常规输血治疗的患者323例作为研究对象,分为实验组与对照组,实验组给予输血前常规检查加不规则抗体筛查,对照组只做常规检查。统计2组实验结果。结果实验组不规则抗体检出率5.62%,实验组输血不良反应及血液输注无效发生率低于对照组,差异有统计学意义。结论患者输血前进行不规则抗体筛查有助于确保患者输血安全,提高输血疗效,有效减少输血不良反应的发生,对需要输血治疗的患者具有重要临床意义。

胚胎大鼠皮质神经元原代培养及神经元鉴定

目的对原有的胚胎大鼠神经细胞原代培养进行改进,建立一种高效、稳定的的原代培养方法。方法自精确控制胎龄的大鼠胚胎大脑中分离出皮质,采用胰酶二次消化法制备神经细胞悬液。并选用神经元特异性烯醇化酶免疫荧光化学法对神经细胞进行鉴定。结果与单次消化法分离细胞及运用DMEM+10%胎牛血清重悬细胞进行种板的原方法相比,方法改进以后,细胞提取数量明显增加,且纯度较高。种板后细胞形态正常且能长期存活。结论该方法结果理想,简易高效,值得借鉴和推广。

活性生物多肽对皮肤抗衰老作用的研究进展

活性生物多肽具有抗氧化、抗衰老、清除自由基等多种生理功能,已经广泛应用于食品、医药和化妆品等领域。本文介绍了不同来源的生物活性多肽的功能与作用,综述了近几年来活性生物多肽在某些抗衰老化妆品中的应用。并分析了未来活性生物多肽在化妆品中的研究开发趋势,以期为抗衰老化妆品的研究与开发提供积极的借鉴作用。

以正交设计法优选金连利耳口服液提取工艺参数

目的研究金连利耳口服液的最佳提取工艺。方法以黄芩苷含量为指标,采用正交试验设计法,考察因素为溶剂用量倍数、提取时间、提取次数。结果最佳提取工艺为:加水量为药材量的6倍,煎煮3次,每次1.5 h。结论优化工艺合理、稳定,重现性好,为金连利耳口服液的生产提供试验依据。

解毒通络调肝方对INS-1细胞糖毒性的保护作用研究

目的研究解毒通络调肝方对大鼠胰岛细胞瘤细胞(islet cell tumor cells,INS-1)糖毒性的保护作用机制。方法以大鼠胰岛细胞瘤细胞为研究对象,用MTT比色法检测解毒通络调肝方干预后INS-1细胞存活率的情况;不同浓度的解毒通络调肝方干预高糖诱导的INS-1细胞;通过葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion test,GSIS)检验胰岛素分泌量;实时逆转录聚合酶链反应法测定INS1、INS2、胰十二指肠同源盒因子1(pancreatic and duodenal homeobox 1,PDX1)和MafA的mRNA表达水平;蛋白印迹实验检测INS-1细胞中内质网的跨膜蛋白[阻抗性激酶lα(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)、双链RNA依赖性蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和活化的转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)]的表达。结果通过从TCMSP数据库中总结分析解毒通络调肝方中潜在成分,表明该方具有较好的稳定性和重复性;不同浓度的解毒通络调肝方对INS-1细胞活力无抑制作用(P>0.05),但能够抑制高糖诱导的胰岛素分泌的降低(P<0.05),提高INS1、INS2、PDX1和MafA的mRNA表达(P<0.05),抑制IRE1α、PERK、ATF6蛋白表达(P<0.05)。结论解毒通络调肝方能够通过提高胰岛素合成相关基因的表达,促进INS-1细胞的胰岛素分泌,降低内质网应激,以恢复细胞内稳态平衡,减少糖毒性对β细胞损伤。

六菌子颗粒水提工艺研究

目的优化六菌子颗粒的经水提取工艺条件,为六菌子颗粒的进一步开发奠定基础。方法选用L9(34)正交试验,以六菌子颗粒水提液中总多糖的含量为考察标准,研究加水量、煎煮时间、煎煮次数对水提工艺的影响,并对水提工艺的稳定性进行验证,筛选出六菌子颗粒的最佳水提工艺。结果水提工艺中选取的各因素对多糖含量影响的作用为:C提取次数>A加水量>B煎煮时间,试验得出六菌子颗粒的最佳提取工艺是A2B2C3,即10倍水,提3次,每次1.5 h。结论优化的水提工艺稳定、可行,可用于六菌子颗粒中各药材的提取,为六菌子颗粒制剂的开发提供实验依据。

玉米须的提取工艺研究

目的:建立玉米须的提取工艺。方法:以玉米须中总黄酮含量为指标,筛选了提取工艺。结果:玉米须经除杂,酌予碎断,置提取罐中,加60%乙醇回流提取三次,每次为1.5小时,每次加醇量为药材的20倍量,合并提取液,浓缩至相对密度1.05～1.10(250C)的清膏,干燥,即得。结论:该方法指标明确,操作合理,便于在生产中使用。

和血止痛颗粒制备工艺研究

目的确定和血止痛颗粒提取的最佳工艺及优选制剂成型工艺参数。方法以出膏率为指标,采用正交试验设计法,考察因素为溶剂用量倍数、提取时间、提取次数。并进行了制剂成型性研究。结果最佳提取工艺为:加水量为药材量的8倍,煎煮三次,每次1.5 h;成型工艺参数:清膏:淀粉:乳糖(1:1:1),混匀,制成颗粒,80℃干燥。结论优化工艺合理、稳定,重现性好,为和血止痛颗粒的生产提供试验依据。