高活力纤维素酶菌株康氏木霉B—7的选育与产酶条件的研究

野生型康氏木霉８５４－Ｂ＿２分别经物理化学诱变因子，ＴＤＰ辐射器和空间微重力辐射等因素的多级处理，得到１株形态发生明显改变的变异株Ｂ—７，其固体培养物的纤维素酶各组分酶活力，如滤纸糖酶活力（ＦＰＡ）为３４ｕ／ｇ，羧甲基纤维素酶活力（ＣＭＣ—ａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ，β－葡萄糖苷酶活力（β－Ｇｌａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ，与８５４－β２相比，分别提高５．９倍，７．６倍和４．２倍。其固体培养的最佳条件是：ｐＨ６．０，２８～３０℃，９６小时，最适培养基成分为：青草粉：麸皮＝７：３，１．５～２．０倍水和（ＮＨ４）２ＳＯ４１．５～２．０％（均以固体料计）。

犬瘟热荧光抗体技术的应用研究

用硫酸铵盐析法和蔗糖梯度离心法，从犬瘟热病毒人工感染犬的肝、脾中浓缩提纯犬瘟热病毒，以其免疫家兔，制备兔抗犬瘟热病毒免疫血清，再经硫酸铵沉淀与ＱＡＥ－葡聚糖凝胶Ａ５０层析提取ＩｇＧ，于４℃低速搅拌标记异硫氰酸荧光素，制成兔抗犬瘟热病毒抗原荧光抗体。用上述荧光抗体检测２１只犬瘟热病毒人工感染犬和３５只自然感染犬的１１６份白细胞，抗原阳性１０９份，而健康犬、传染性肝炎犬、犬细小病毒肠炎犬的３７份血液白细胞，全部为抗原阴性。另外，用同样染色法检查了２５份犬瘟热死亡犬脾细胞涂片，有２３份为抗原阳性；而健康犬、传染性肝炎犬和犬细小病毒肠炎犬的１７份脾细胞涂片无一为抗原阳性。对１４１份犬瘟热病犬标本，用电镜或病毒分离证明为犬瘟热病毒抗原阳性的有１３８份，直接ＦＡ染色法检查也为抗原阳性的有１３２份，敏感性为９５．７％；经电镜检查或病毒分离证明为抗原阴性的５７份标本，直接ＦＡ染色检查全部为阴性，特异性为１００％。用直接ＦＡ染色法和以细胞病变（ＣＰＥ）为感染指标的ＴＣＩＤ５０检测法对３５份犬瘟热病毒鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）培养物的毒力进行检测，结果分别平均为４．８５和４．７２ｌｏｇ１０／０．１ｍＬ但直接ＦＡ染色法比ＣＰＥ客观?

狂犬病病毒糖蛋白转基因小鼠的构建研究

将狂犬病病毒糖蛋白ｃＤＶＡＢｇｌⅡ（１．６７ｋｂ）片段正向插入ｐＭＴ０１０／Ａ＋ＢａｍＨⅠ切点，构建重组质粒ｐＭＴ０１０／Ａ＋－Ｒｇｐ，用ＥｃｏＲⅠ＋ＳａｌⅠ对ｐＭＴ０１０／Ａ＋－Ｒｇｐ进行双酶切后，回收含有狂犬病病毒糖蛋白ｃＤＮＡ和绵羊ＭＴ启动子的２．７６ｋｂ片段，通过显微注射技术将该片段注入小鼠单细胞受精卵雄前核内，在进行胚胎移植后，获得４４只小鼠，经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交及原位杂交检测，证明有９只携带有目的基因。目的基因（即转基因）按孟德尔特性遗传给其后代，由此相应建立了９个转基因鼠系，对其中６个鼠系分别命名为ＴｇＮ（ｏＭＴ－Ｒｇｐ）ＩＬｇｅ、ＴｇＮ（ｏＭＴ－Ｒｇｐ）２Ｌｇｅ……ＴｇＮ（ｏＭＴ－Ｒｇｐ）６Ｌｇｅ。

痘苗病毒高效表达载体的构建研究

构建了能使重组痘苗病毒在感染早期和晚期高效表达外源基因的痘苗病毒载体，表达效率高于迄今报道的任何一个痘苗病毒载体。应用这种新型痘苗病毒载体表达氯化乙酰转移酶（ＣＡＴ），１０６感染细胞中的最高表达量达６０μｇ左右，占细胞总蛋白的１８％。在病毒感染早期，突变型Ｐ７．５启动子表达ＣＡＴ的量比天然的Ｐ７．５启动子高７倍。

动物抗病毒感染基因工程育种研究进展

动物抗病毒感染基因工程育种研究进展殷震，扈荣良（长春农牧大学兽医研究所长春１３００１２）动物传染病，尤其是动物病毒性传染病，严重威胁畜禽健康。一些很早发现的传染病迄今未能有效控制。随着集约化饲养和养殖条件的改变，近年来又相继发生和流行一些新的传染病。...

应用免疫胶体金标记技术对狂犬病病毒形态发生学的抗原定位研究

利用包埋后免疫胶体金标记技术，通过透射电子显微镜，对感染ＢＨＫ２１细胞的鹿狂犬病病毒进行了形态发生的抗原定位。结果：感染细胞的细胞质内有５种包涵体，其中４种被免疫胶体金特异性标记，这些病毒抗原是多成分的，另一种未被免疫胶体金标记的包涵体可能是病毒核酸；感染细胞的细胞质内大量堆积的病毒前体物质包涵体，其中可能有病毒装配后多余的成分，表明病毒各组分并不是按比例需要而合成的。

表达大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合蛋白工程菌株的免疫原性研究

对已构建的重组质粒ｐＸＳＴ１（含有ＳＴ１和ＬａｃＺ基因）进行了核苷酸序列分析和免疫原性研究。序列分析结果表明，该质粒中含有２个正向串联在一起的ＳＴ１基因，且融合在ＬａｃＺ基因的上游，具有正确的阅读框架。免疫实验结果表明，构建的ＤＨ５α（ＰＸＳＴ１）重组菌株安全无毒。该重组菌株表达的ＳＴ１融合蛋白能够诱发ＢＡＬＢ／ｃ鼠产生抗体，且抗体能中和天然ＳＴ１肠毒素活性，具有较好的免疫保护作用。这表明ＤＨ５α（ｐＸＳＴ１）工程菌株可以作为预防幼畜腹泻的菌苗候选株。

中药癣螨净研制及对太与狐螨病的治疗研究

中药癣螨净研制及对太与狐螨病的治疗研究王祥生，刘小芳（中国人民解放军长春农牧大学军事兽医研究所）于洪俊（中国人民解放军长春农牧大学小动物医院）螨病是犬、狐常见皮肤病，如治疗不及时常降低毛皮质量和观赏价值，严重者可导致死亡，此外犬疥螨还可传给人，影响人...

猪瘟病毒石门株特异cDNA片段的扩增与序列分析

以猪瘟病毒感染细胞中提取的细胞总ＲＮＡ为模板，应用反转录─聚合酶链反应，在化学合成的两对特异引物引导下，成功地扩增出了两个石门株的ｃＤＮＡ片段。电泳证明它们的大小与预计的３４６ｂｐ和１２０ｂｐ完全一致。酶切分析证实了它们应有的酶切位点。随后对这两个片段进行了克隆和序列测定，并与国外株的序列进行了比较。结果证明本实验扩增的两个ｃＤＮＡ序列与Ａｌｆｏｒｔ株和Ｂｒｅｓｉａ株的同源性分别是９５．２％和９８．５％。

乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

曾在一个儿童患者体内，发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株，其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ，而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ，表明ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明，突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒＨＢＶＨＢｓＡｇ１２６Ｉｌｅ相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响ａ抗原决定簇（ａ１２４－ａａ１４７）的抗原性。为了证实这一点，构建了突变Ｓ基因表达质粒，在ＳＶ４０早期启动子的控制下进行抗原表达。利用ＨＢｓＡｇ９肽（Ｔｈｒ－Ｉｌｅ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｉ单克隆抗体和９肽（Ｔｈｒ－Ｔｈｒ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｔ单克隆抗体进行放射免疫测定，结果表明，这种Ｓｅｒ１２６突变蛋白对抗ｉ单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱，对抗ｔ单克隆抗体的反应性则与ＨＢｓＡｇ１２６Ｔｈｒ接近。但用三种抗－ａ单克隆抗体的检测结果揭示，突变蛋白ＨＢｓＡｇ１２６?

体外培养细胞中特异反义RNA表达对猪瘟病毒增殖的抑制作用

应用免疫荧光抗体技术检测了整合有猪瘟病毒反义基因的ＰＫ－１５细胞克隆对猪瘟病毒的抑制效应。结果表明，５个不同的反义基因片段对猪瘟病毒的抑制效率存在很大的差异，其中Ａ片段的抑制效率最高（９４％～９８％），Ｂ片段次之（５８％～７６％），Ｃ片段再次（６４％以下），Ｄ片段和Ｅ片段未见明显的抑制效应。抑制效率的差异可能与反义基因片段的位置、长短以及反义ＲＮＡ表达质粒载体有关。

鸡痘病毒282E_4株2．2kbTK基因序列分析

将鸡痘病毒２８２Ｅ４弱毒株基因组中的３．７ｋｂＨｉｎｄⅢ片段克隆到ＫＳ（—）质粒中，亚克隆后，获得含ＴＫ基因正反方向插入的２．２ｋｂＨｉｎｄⅢ－ＣｌａＩ片段的质粒ｐＫＦＡ和ｐＫＦＢ，进而构建出正反方向的系列嵌套缺失质粒。用Ｔ７、Ｔ３引物所做的核苷酸序列分析表明，２．２ｋｂＨｉｎｄⅢ－ＣｌａＩＴＫ基因序列长为２１５９ｂｐ，含有两个完整的读码框架（ＯＲＦ）Ｘ和ＴＫ，并确证了ＴＫ基因内存在单一酶切点ＮｃｏＩ。由该片段内的重复序列分析发现，在Ｘ和ＴＫ两个ＯＲＦ侧翼存在１５ｂｐ的正向重复序列。

HIV－1外膜（env）基因在重组痘苗病毒中的高效表达

应用重组痘苗病毒作载体，在ＡＴＩ、Ｐ７．５突变型早期启动子控制下，高效表达了（经定点突变去除一处早期终止信号的）ＨＩＶ－１ｅｎｖ基因。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证明，晚期启动子活性强的ｐＳＦＪ２－３８能更高效地表达ｅｎｖ基因。经Ｌｅｎｔｉｌ－Ｌｅｃｔｉｎ提取以及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后的激光扫描测定结果，在１０７个感染细胞中可产生５０－７０μｇ的Ｅｎｖ蛋白。

狂犬病无毒疫苗株SRV_9G基因主要功能区的序列分析

通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出了狂犬病无毒疫苗株（ＳＲＶ９）糖蛋白（Ｇ）基因膜外主要功能区的两个片段，共约７４０个ｂｐ（４５０～１１４４），含有可以诱导中和抗体的两个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将两片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ位点。采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。将这一序列与已发表的狂犬病病毒ＳＡＤＢ１９株的相应序列通过计算机进行比较分析。结果证明两者核苷酸序列的同源性为９８．６％，推导氨基酸序列的同源性为９５．９％，主要抗原区内的几个重要氨基酸（如３３３位精氨酸等）发生了变异，糖基化位点也改变。

检测抗原抗体反应的新制剂──胶体金探针

检测抗原抗体反应的新制剂──胶体金探针常国权，杨盛华（长春农牧大学军事兽医研究所１３００６２）胶体金作为透射电镜的特异性示踪物始于１９７１年［１］；作为扫描电镜示踪物始于１９７５年［２］。后来，胶体金示踪系统又相继被用于光镜［３］、荧光显微镜［４］以...

化学修饰单克隆抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

化学修饰具有底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）结合部位的单克隆抗体（４Ａ４），使其结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）转变成谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团硒代半胱氨酸（Ｓｅ－Ｃｙｓ），因而产生高活力的含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）．突变的４Ａ４（ｍ４Ａ４）的ＧＰＸ活力达到了天然酶活力的１９％，并对ｍ４Ａ４的酶学性质和动力学性质进行了研究；硒代谷胱甘肽（ＧＳｅＨ）连到４Ａ４结合部位，其ＧＰＸ活力由３．８６Ｕ／μｍｏｌ提高到５９８．９Ｕ／μｍｏｌ用黄嘌呤氧化酶／次黄嘌呤为中心的心肌线粒体自由基损伤模型证明Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ（ｍ４Ａ４）可减轻活性氧对线粒体的损伤。

减蛋综合征病毒100K蛋白基因的克隆与序列分析

用常规方法提取减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国分离株（ＡＡ２株）病毒ＤＮＡ，分别构建了限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ、ＳｐｈⅠ、ＰｓｔⅠ水解片段的全基因文库，并对其中１００Ｋ蛋白基因的序列进行了分析。ＥＤＳＶ１００Ｋ蛋白基因位于减蛋综合征病毒基因组５５．７～６４．８物理图谱单位（ｍ．ｕ），共２０９１个核苷酸（ｎｔ），其编码产物由６９６个氨基酸（ａａ）组成，推测其分子量为７７．７ｋＤ。编码蛋白氨基酸同源性分析表明，ＥＤＳＶ１００Ｋ蛋白与人腺病毒（Ａｄ２、Ａｄ５、Ａｄ１２、Ａｄ４１）、Ⅰ群禽腺病毒（ＣＥＬＯ和ＦＡＶ１０）的同源性为３２．３～３４．４％之间，而与羊腺病毒（ＯＡＶ）的同源性达到５６．４％。

禽多杀性巴氏杆菌保护性荚膜抗原基因PCA_（10）的高效表达及其免疫原性

以ＰｓｔＩ酶切含禽多杀性巴氏杆菌保护性荚膜抗原基因片段ＰＣＡ１０的重组质粒ｒＰＣＡ１０，收集基因片段ＰＣＡ１０，经修饰后依次连接到系列高效表达载体ＰＥＶ—Ｖｒｆ１～３的ＢａｍＨＩ切点上，转化至Ｅ．ｃｏｌｉＲＲＩ（ｐＲＫ２４８ｃＩｔｓ）中。经快速检测，这３种载体的重组子中均有ＰＣＡ１０插入。以间接ＥＬＩｓＡ检测重组子转化菌，只有ＰＥＶ—Ｖｒ１３载体的重组子转化菌与禽巴氏杆菌保护性荚膜抗原（ＰＣＡ）抗血清呈阳性反应，且ＯＤ值为原克隆菌株ｒＰＣＡ１０的３倍，初步证明ＰＣ１０已克隆至高效表达载体ＰＥＶ—Ｖｒｆ３上，而且读码框架正确。用ＥＬＩｓＡ阳性表达克隆株ＰｃＡ７１—Ｖｒｆ３免疫小鼠和鸡，均达到７０％的保护率。