M1基因模式差异对H9N2亚型禽流感病毒增殖特性的影响

为探究基质蛋白1(M1)对H9N2亚型禽流感病毒适应性的影响,研究基于M1的5种主要模式,利用反向遗传技术拯救了5株具有不同M1基因模式的H9N2亚型禽流感病毒,通过测定病毒的一步与多步生长曲线以及生长竞争优势试验探讨M1对H9N2亚型禽流感病毒增殖能力的影响,将MOI均为0.001的5株病毒共感染MDCK细胞,感染后48h提取细胞上清的病毒RNA,将反转录的cDNA样品进行单核苷酸多态性(SNP)测序。结果显示:M1为P5模式的H9N2亚型禽流感病毒增殖能力显著高于其余4株病毒(P<0.05),P5模式病毒的M1基因所涉及的9个可检测的氨基酸位点占比超过74%。研究表明,M1为P5模式的H9N2亚型禽流感病毒具有最强的增殖能力和明显的生长竞争优势,结果从M1对病毒增殖能力影响角度解释了该分支病毒在我国禽群中广泛流行的原因。

血凝素糖基化模式对G57基因型H9N2亚型禽流感病毒抗原性的影响

G57基因型H9N2亚型流感病毒是当前威胁我国养禽业健康发展的重要病原。该病毒的免疫逃逸机制是值得探究的科学问题。本研究利用反向遗传技术拯救了5株具有不同血凝素(hemagglutinin,HA)糖基化模式的病毒。基于交叉血凝抑制结果绘制的抗原图谱显示,这5株病毒存在明显的抗原差异。这种差异与HA上的第21,210,289,304位糖基化位点直接相关,其对病毒抗原性的影响由大到小依次为304,210,289,21位糖基化位点。结果表明,HA糖链可能影响其周围的抗原表位的暴露程度,进而影响抗体与HA的结合,致使具有不同HA糖基化模式的病毒表现出抗原差异。因此,加强对流感病毒位点特异性糖基化的认识,从而更加准确地辨析HA糖基化与抗原距离的关系,对预测特定毒株的免疫逃逸能力以及疫苗的设计提供了依据。

H9N2亚型禽流感嵌合病毒样颗粒的免疫效果

病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)是近年来病毒性疫苗研制领域的热点之一。本研究对前期所构建的2种展示H9N2亚型禽流感病毒h9.4.2.5分支HA蛋白的VLPs,即VLP-M1和VLP-Gag的免疫效果进行了比较。结果显示,这2种VLPs均可以刺激商品肉鸡产生体液免疫和细胞免疫应答。在免疫剂量相同时,以小鼠白血病病毒Gag蛋白作为骨架制备的VLP-Gag的免疫保护效果优于VLP-M1,表明该嵌合型VLPs的构建策略具有广阔的研究前景,不仅能够为开发区分感染和免疫动物的标记疫苗提供技术支撑,而且也可以为响应我国绿色、安全、环保的养殖模式做技术储备。

甲型流感病毒基质蛋白M1的研究进展

基质蛋白1(matrix protein 1,M1)提供了甲型流感病毒蛋白之间一个相互作用的“平台”。M1不仅维持了病毒粒子的形态和表面蛋白的稳定,而且还将8个分节段的基因组固定在病毒的核心位置,最终协调病毒的高效组装和出芽。由于M1的高度保守性,研究人员对其关注度相对较低。为此,对M1的结构和功能进行了详实的回顾,并展望了M1作为新型抗病毒药物靶点的潜能。通过对甲型流感病毒M1的深入理解,以期提高我们对其他病毒基质蛋白的关注度和研究兴趣。

血凝素的糖基化模式对G57基因型H9N2亚型禽流感病毒的稳定性和受体亲和性影响

G57基因型H9N2亚型禽流感病毒自2007年以来逐渐成为我国禽群中的优势基因型。序列分析显示,G57基因型病毒的血凝素主要存在5种糖基化模式。本研究利用反向遗传技术拯救了5株具有不同HA糖基化模式的病毒,分别命名为reHA7、reHA6、reHA5、reHA4、reHA3。稳定性试验结果显示,reHA6的热稳定性与酸稳定性最好,reHA7、reHA5次之,而reHA4、reHA3最弱。红细胞洗脱试验和红细胞凝集试验结果显示,reHA7的受体亲和性最强,reHA6、reHA5次之,而reHA4、reHA3最弱。固相结合试验结果显示,5株病毒均可与人型和禽型受体结合,并且reHA7与2种类型受体的亲和性最强,reHA6、reHA5次之,而reHA4、reHA3最弱。结果表明,血凝素糖基化模式影响H9N2亚型禽流感病毒的稳定性和受体亲和性,并以210位和305位糖基化位点的效应最为显著。本研究结果为深入理解H9N2亚型禽流感病毒的适应性进化提供了新的理论基础。

H9N2亚型禽流感嵌合病毒样颗粒的制备

病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗是近年的研究热点。本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统,以禽流感病毒的M1蛋白和小鼠白血病病毒的gag蛋白2种不同来源的基质蛋白作为骨架,分别构建了展示G57基因型H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的VLPs。在透射电镜下,所制备的VLP-M1和VLP-gag的形态结构与野生型H9N2亚型禽流感病毒类似,其中以gag蛋白为骨架的VLPs的粒子直径约为150 nm,明显大于VLP-M1粒子。血凝试验结果显示,VLP-gag比VLP-M1提高了1个血凝滴度。Western blot鉴定进一步证实所构建的VLP-M1和VLP-gag中可以同时检测到HA和M1或gag蛋白。由此表明,VLP-gag的表面积大于VLP-M1,其表面镶嵌的HA数量多于VLP-M1。本研究为进一步比较VLP-gag和VLP-M1的免疫原性和免疫保护效果奠定了基础。

H3N8亚型马流感病毒样颗粒的免疫防治效果评价

利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建了含有H3N8亚型马流感病毒HA、NA和M1蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。VLPs的鉴定结果表明,3种蛋白正确组装出了类似于天然病毒粒子的形态结构,且具有血凝活性。将VLPs免疫马匹制备高免血清,分别设计小鼠先被动免疫再攻毒以及先攻毒再紧急注射免疫血清,结果证明马高免血清对H3N8亚型马流感病毒感染具有良好的预防和治疗效果,为研制H3N8亚型马流感VLP疫苗提供了理论依据。