桦褐孔菌不同提取物抗弓形虫效果的比较

为了探讨桦褐孔菌不同提取物抗弓形虫的效果,对桦褐孔菌水煎剂、多糖、白桦脂醇的体外抗弓形虫作用和对感染弓形虫小白鼠的治疗效果进行了比较。结果表明,体外试验中3种提取物均能抑制弓形虫的生长和繁殖,其中多糖组的抗虫效果优于其他2组,但试药组均弱于阳性对照组;在染虫试验中,桦褐孔菌多糖组中小白鼠平均存活天数与阳性对照组比较无显著性差异,表明桦褐孔菌多糖体内抗虫效果较好。

桦褐孔菌多糖对小鼠脏器中弓形虫感染的影响

研究桦褐孔菌多糖对小鼠脏器中弓形虫感染的影响,探讨桦褐孔菌多糖对小鼠的保护作用。建立小鼠弓形虫感染模型,设立空白对照组,感染对照组,阳性对照组,桦褐孔菌多糖组。治疗结束后,采集脏器,用半定量PCR检测各脏器中弓形虫基因拷贝数。桦褐孔菌多糖治疗组小鼠的肝脏、脾脏、肺脏中的虫体拷贝数显著低于阴性对照组。表明桦褐孔菌多糖能够减少弓形虫在小鼠脏器中的感染。

桦褐孔菌多糖的提取及含量测定方法的研究

采用水提醇沉法提取桦褐孔菌粗多糖,并利用苯酚-硫酸比色法,以葡萄糖为标准品,测定桦褐孔菌菌核及其粗多糖中多糖的含量。结果表明,桦褐孔菌粗多糖得率为17%,桦褐孔菌菌核中多糖含量为2.068%,桦褐孔菌粗多糖中的多糖含量为22.43%。该方法桦褐孔菌粗多糖得率高,加样回收率在99%以上,且5h内显色稳定,重现性好,适合用于中药桦褐孔菌多糖的提取及含量测定。

反相高效液相色谱法测定醋酸奥曲肽中奥曲肽含量

【目的】建立高效液相色谱法测定醋酸奥曲肽中奥曲肽含量的方法。【方法】色谱柱:ZORBAX 300SB-C8柱(2.1 mm×150 mm,5μm),流动相:A:0.1%TFA水B:0.1%TFA乙腈,流速:0.25 ml/min,柱温:40℃,检测波长:210 nm,进样量:20μl。【结果】奥曲肽浓度在0.08～0.2 mg/ml范围内,线性关系良好,r=0.9999;检测限为0.02 mg/ml;加样回收率平均为101.28%,RSD为0.58%。【结论】分析方法可行,准确度高,此法可用于醋酸奥曲肽中奥曲肽含量的测定。

桦褐孔菌多糖对弓形虫感染小鼠基因表达谱的影响

探讨桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小鼠基因表达谱的影响,并对其抗虫机理进行分析。BABL/C小鼠腹腔接种RH株弓形虫速殖子103个,建立小鼠弓形虫感染模型。将小鼠随机分成3组:空白对照组、感染对照组、桦褐孔菌多糖治疗组。采集动物肝脏迅速冻存,提取总RNA,检测RNA质量,扩增RNA,进行芯片杂交,扫描后进行数据分析。结果:经SOM分析筛选出桦褐孔菌多糖治疗组的有效差异基因,并对其进行功能注释,分析其治疗弓形虫的主要原因。结果表明:桦褐孔菌多糖可有效治疗弓形虫感染引起的病理损伤,其抗弓形虫机理是通过调节宿主细胞因子水平,促进Th1/Th2平衡,控制Toll样受体信号通路以及对机体整体调控达到抗弓形虫目的。

多肽化合物MLA有关物质测定方法研究

目的:建立多肽化合物MLA有关物质可靠的测定方法。方法:通过高效液相色谱对流动相、色谱柱、梯度、柱温、波长等不同条件摸索,优化最佳检测方法。结果:试验最终选择条件IV,用安捷伦Zorbax 300 SB-C18色谱柱,柱温选择25℃,检测波长选择220 nm进行测试,并验证了该检测方法的专属性。结论:本实验条件建立的MLA有关物质的测定方法稳定可靠,各杂质能够较好分离,不会干扰测定。

桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小鼠CD4^+和CD8^+ T淋巴细胞亚群的影响

将40只昆明种小鼠随机分成4组:空白对照组、阴性对照组、蒿甲醚组和桦褐孔菌多糖组,每组10只。每组小白鼠腹腔接种弓形虫RH株速殖子1×102个,建立小鼠急性弓形虫感染模型。采用流式细胞仪检测脾中CD4+、CD8+T细胞百分数及CD4+/CD8+T细胞比例,探讨了桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的影响。结果显示,桦褐孔菌多糖组中CD4+T细胞百分数及CD4+/CD8+T细胞比例与其他3组比较差异极显著(P<0.01);阴性对照组CD8+T细胞百分数显著高于桦褐孔菌多糖组(P<0.05),与其他2组比较差异极显著(P<0.01)。结果表明,桦褐孔菌多糖可有效调节感染弓形虫小白鼠的CD4+T细胞百分数及CD4+/CD8+比例,达到抗弓形虫目的。

桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小鼠治疗作用及其对血清中细胞因子含量的影响

建立小鼠弓形虫病模型后,将小鼠随机分成6组,统计小鼠存活率及时间,再应用ELISA检测血清中IFN-γ、IL-2等细胞因子水平,以检测桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小鼠的治疗效果及对小鼠血清中IFN-γ、IL-2细胞因子水平的影响。结果表明,桦褐孔菌多糖中剂量组小鼠存活率最高;桦褐孔菌多糖的高、中剂量组IFN-γ水平极显著高于其他各组(P<0.01),高剂量组IL-2水平与其他各组比较差异极显著(P<0.01);除感染组外,其余各组IFN-γ、IL-2均在第6天出现峰值。说明桦褐孔菌多糖中剂量治疗弓形虫感染小鼠效果最好,并且中剂量可使小鼠血清中IFN-γ、IL-2值升高到适当水平,有效改善弓形虫感染对小鼠的伤害。

抗菌肽V13KL原核表达载体的构建及其表达产物的鉴定

将V13KL编码基因片段克隆到原核表达载体pET30b(+),并在目的蛋白N端设计肠激酶酶切位点,构建出pET30b(+)-VK13L重组质粒,转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),优化诱导条件,使得抗菌肽得到了高效表达。经Tricine-SDS-PAGE和Western blotting鉴定,目的蛋白的相对分子质量与预期一致。结果表明,V13KL基因成功克隆并且获得表达,在诱导体系中加入1mmol/L IPTG诱导6h便可检测到蛋白表达。

真核表达载体pIRES2-EGFP-V13KL的构建及在COS-7细胞和小鼠胚胎中的表达

构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-V13KL,瞬时转染COS-7细胞及对小鼠受精卵进行原核注射,旨在通过抗菌肽V13KL在COS-7细胞、小鼠胚胎中的表达情况评价其对细胞生理状态、胚胎发育方面可能产生的影响。结果显示,V13KL可以与EGFP在COS-7细胞中高效共表达,转染效率为75.8%,且原核注射后约10%的胚胎发育成带有绿色荧光的囊胚。