动物生理学理论课教学模式的探讨与实践

动物生理学是研究动物生命活动及其规律的科学,具有抽象性、系统性、微观性、实验性、动态性和进展快等特点。根据这些特点对动物生理学理论课教学模式进行了探讨。系统地讨论了每一教学环节的教学方法与手段,让学生系统地掌握动物生理学的基本知识、基本理论。

睾丸酮丛毛单胞菌LysR基因的克隆及对3α-HSD/CR表达的调节

采用分子克隆技术构建睾丸酮丛毛单胞菌LysR基因表达载体,并通过与PAX1共转化来分析LysR基因对3α-HSD/CR在E.coliHB101的表达调节。结果表明:酶切和DNA测序显示,所构建的表达质粒pKtac1-LysR含有编码LysR的基因序列且稳定性较好;共转化结果显示,加入重组质粒pKtac1-LysR的3α-HSD/CR的表达量显著高于加入pKtac1的3α-HSD/CR的表达量(P<0.01)。

猪白血病抑制因子的真核表达与活性分析

采用分子克隆技术构建猪白血病抑制因子(LIF)的真核表达载体,表达重组猪LIF蛋白并分析其活性。酶切和DNA测序显示,所构建的真核表达质粒pcDNA3.1-pLIF-MycHis含有编码分泌型猪LIF蛋白的cD-NA序列;免疫印迹分析显示,分泌到上清中的重组蛋白在相对分子质量约37 000的位置上有明显的增强表达条带;活性分析结果显示,重组蛋白能够维持小鼠E-14胚胎干细胞在未分化状态。该结果显示重组猪LIF蛋白在CHO细胞中进行了正确表达并具有很好的生物活性,能够用来培养小鼠胚胎干细胞,为用于猪胚胎干细胞系的研究奠定了良好的基础。

水通道蛋白在小鼠嗅上皮中的免疫定位

采用免疫印迹和免疫组织化学技术分析水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)在小鼠嗅上皮细胞中的表达情况。结果表明:AQP1在血管内皮细胞表达,AQP3在下层支持细胞和基底细胞表达,AQP4在上层支持细胞和基底细胞表达;AQP5在嗅毛和鲍曼氏腺的分泌细胞和导管细胞表达。结果显示了水通道蛋白在小鼠嗅上皮细胞中的表达位置,其中在支持细胞和基底细胞表达的AQP3和AQP4可能为嗅神经功能的维持提供了重要的微环境,在嗅毛和鲍曼氏腺的分泌细胞和导管细胞表达的AQP5可能在气味的感受方面起作用。

甲硫基腺苷对小鼠黑色素瘤B16F10细胞系的抑制作用

应用细胞培养技术研究了甲硫基腺苷对小鼠黑色素瘤B16F10细胞系体外增殖和体内增长的抑制作用。结果表明:甲硫基腺苷抑制了小鼠黑色素瘤B16F10细胞系的体外增殖(IC50为10μmol/L,P<0.01)和体内增长(抑瘤率为30.8%,P<0.05)。

黑龙江省家畜血清HEV抗体和抗原水平的检测

[目的]探索黑龙江省戊型肝炎病毒(HEV)在家畜中的分布情况。[方法]采用酶联免疫吸附试验法(ELISA),检测来自黑龙江省2个地区血清样品3月龄以上大猪719份、3月龄以下小猪840份、牛505份、羊515份HEV抗原和抗体阳性率。[结果]猪群抗体水平最高,猪群(89.71%)可能比其他种群更容易感染HEV(P<0.001)。黑龙江省共检测出HEV Ag阳性血清样品猪59份,牛3份,羊1份。与吉林、辽宁相比,黑龙江省猪群HEV感染率较高。[结论]黑龙江省猪群感染HEV较为普遍,且大猪感染率高于小猪。

猪白血病抑制因子多克隆抗体的制备及其免疫定位

目的:构建猪LIF原核表达载体,表达并纯化重组猪LIF蛋白,制备兔抗猪LIF多克隆抗体并进行免疫定位。方法:根据GenBank中猪LIFcDNA基因序列扩增出目的基因片段,将扩增的片段克隆进PET-31b表达载体的NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,经转化使其在大肠杆菌BL21中表达,产生重组猪LIF蛋白,纯化后作为抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;经ELISA和Western blotting分析鉴定抗体的效价和特异性;最后利用所制备的抗体进行LIF蛋白在猪体内的免疫定位。结果:酶切和DNA测序显示,所构建的原核表达质粒PET-31b-mpLIF含有编码成熟型猪LIF蛋白的cDNA序列;表达结果显示,诱导样品在相对分子质量约20000的位置上有明显的增强表达条带;纯化结果显示,重组蛋白在相对分子质量约20000的位置上有一条清晰、单一的条带;通过免疫新西兰大白兔,获得了特异性较高、效价达1∶10000的多克隆抗体;应用该抗体进行的免疫定位显示,LIF蛋白在心肌细胞、脾索和脾被膜的单层上皮细胞、肺成纤维细胞中有弱表达。结论:重组猪LIF蛋白在大肠杆菌中进行了高效、正确表达;得到了效价较高、特异性较强的多克隆抗体;LIF蛋白在心肌细胞、脾索和脾被膜的单层上皮细胞、肺成纤维细胞中有弱表达。

水通道蛋白AQP5在小鼠骨髓间充质干细胞中的免疫定位

水通道蛋白家族是由能够转运水和小的溶质分子透过细胞膜的膜蛋白分子构成。AQP5属于水选择性通道,其在机体组织内的表达非常广泛。间充质干细胞主要来源于骨髓和脂肪组织,能够诱导分化成间充质组织中的各类细胞。采用PCR、免疫印迹和免疫荧光技术分析了水通道蛋白AQP5在小鼠骨髓间充质干细胞中的表达情况。结果表明:AQP5在RNA和蛋白质水平上都有表达,并且与CD90,CD44在小鼠骨髓间充质干细胞膜上共表达。

羊肚菌多糖对人结肠癌细胞SW620体外增殖的抑制作用

目的:研究羊肚菌多糖对人结肠癌细胞SW620体外增殖的抑制作用。方法:采用mtt法、划线法和集落生成分析法检测羊肚菌多糖对人结肠癌细胞SW620的体外增殖抑制作用,采用流式细胞技术检测羊肚菌多糖对人结肠癌细胞SW620的凋亡作用,采用western blotting技术检测相关凋亡蛋白的表达情况。结果:1) 羊肚菌多糖对人结肠癌细胞SW620的体外增殖、细胞迁移、细胞集落形成具有抑制作用,其作用24 h的IC50为1220 &#177;50 μg/mL,48 h的IC50为968 &#177;63 μg/mL;2) 羊肚菌多糖通过凋亡途径抑制SW620细胞的增殖;3) 在羊肚菌多糖的作用下抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下降,而凋亡蛋白Bax和caspase-3的表达上升。结论:羊肚菌多糖能显著抑制人结肠癌细胞SW620的增殖,并通过上调Bax和caspaes-3的表达和下调Bcl-2的表达诱导SW620细胞凋亡。