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乙型肝炎病毒表面抗原基因在人参细胞中的高效表达
被引量:
2
1
作者
高正伦
盛军
+5 位作者
刘丹
刘晓宇
李娟
郝淑美
吉海滨
刘建华
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2008年第2期119-122,130,共5页
目的提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)在人参愈伤组织细胞中的表达。方法构建一种植物细胞表达载体pBIBeo,该载体携带CaMV 35S双增强启动子和TMV(U1株)翻译增强子。用pBIBeo转化的农杆菌LBA4404与人参愈伤组织细胞共培养,经G418筛...
目的提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)在人参愈伤组织细胞中的表达。方法构建一种植物细胞表达载体pBIBeo,该载体携带CaMV 35S双增强启动子和TMV(U1株)翻译增强子。用pBIBeo转化的农杆菌LBA4404与人参愈伤组织细胞共培养,经G418筛选获得新生抗性细胞团PBIBeo,连续继代培养选育出用于植物源口服乙肝疫苗生产的高产细胞株。提取基因组DNA和mRNA,进行PCR和RT-PCR鉴定,Western blot鉴定HBsAg的特异性,电镜下观察纯化抗原颗粒大小,并以ELISA检测HBsAg的表达水平。结果转化的人参细胞基因组DNA进行PCR反应,得到约700 bp的启动子基因片段。提取mRNA进行RT-PCR反应,得到约700 bp的HBsAg基因片段。Western blot分析可见相对分子质量为24 000的特异性条带。亲和层析纯化细胞表达的HBsAg抗原,电镜观察可见平均直径为32 nm的颗粒。ELISA检测结果表明pBIBeo转化细胞株HBsAg表达量比pBIBSa转化细胞株提高1~2倍。结论人参细胞基因组已经整合了目的基因并稳定高效表达。
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关键词
乙型肝炎病毒表面抗原
人参愈伤组织细胞
表达
CaMV35S启动子
翻译增强子
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职称材料
题名
乙型肝炎病毒表面抗原基因在人参细胞中的高效表达
被引量:
2
1
作者
高正伦
盛军
刘丹
刘晓宇
李娟
郝淑美
吉海滨
刘建华
机构
吉林
大学
生命科学学院
长春
生物
制品研究所天然药物室
长春理工大学生物技术系
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2008年第2期119-122,130,共5页
文摘
目的提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)在人参愈伤组织细胞中的表达。方法构建一种植物细胞表达载体pBIBeo,该载体携带CaMV 35S双增强启动子和TMV(U1株)翻译增强子。用pBIBeo转化的农杆菌LBA4404与人参愈伤组织细胞共培养,经G418筛选获得新生抗性细胞团PBIBeo,连续继代培养选育出用于植物源口服乙肝疫苗生产的高产细胞株。提取基因组DNA和mRNA,进行PCR和RT-PCR鉴定,Western blot鉴定HBsAg的特异性,电镜下观察纯化抗原颗粒大小,并以ELISA检测HBsAg的表达水平。结果转化的人参细胞基因组DNA进行PCR反应,得到约700 bp的启动子基因片段。提取mRNA进行RT-PCR反应,得到约700 bp的HBsAg基因片段。Western blot分析可见相对分子质量为24 000的特异性条带。亲和层析纯化细胞表达的HBsAg抗原,电镜观察可见平均直径为32 nm的颗粒。ELISA检测结果表明pBIBeo转化细胞株HBsAg表达量比pBIBSa转化细胞株提高1~2倍。结论人参细胞基因组已经整合了目的基因并稳定高效表达。
关键词
乙型肝炎病毒表面抗原
人参愈伤组织细胞
表达
CaMV35S启动子
翻译增强子
Keywords
HBsAg
Ginseng callus cells
Expression
CaMV 35S promoter
Translation enhancer
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
乙型肝炎病毒表面抗原基因在人参细胞中的高效表达
高正伦
盛军
刘丹
刘晓宇
李娟
郝淑美
吉海滨
刘建华
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2008
2
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