我国百日咳疫苗生产用菌株主要抗原片段基因序列分析

目的对我国百日咳疫苗生产用菌株主要抗原片段基因进行序列分析,为我国百日咳疫苗的研制和质量控制提供依据。方法分别从我国百日咳杆菌疫苗生产用菌株CS株基因组DNA中扩增百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)、外膜蛋白(Pertactin,PRN)、菌毛蛋白2(Fimbriae 2,FIM2)、菌毛蛋白3(Fimbriae 3,FIM3)基因,克隆至pMD18-T载体,测序,并与GenBank中登录的百日咳杆菌其他菌株的PT、PRN、FIM2、FIM3基因序列进行比较,构建系统进化树。结果百日咳杆菌CS株PT、PRN、FIM2和FIM3基因的扩增产物大小均与预期一致。CS株PT基因与国内的另一疫苗生产株18323亲缘关系最近,在同一分支上,且与国际标准株Tohama在同一亚分支内;PRN、FIM2和FIM3基因与国际标准株Tohama均在同一进化分支上。结论百日咳杆菌CS株与国际标准菌株Tohama亲缘关系较近,与临床分离的其他流行株亲缘关系较远。

麻疹减毒活疫苗细胞工厂多次收获工艺探索

目的建立麻疹减毒活疫苗细胞工厂多次收获工艺。方法采用细胞工厂培养2BS细胞,以不同感染复数接种麻疹病毒,绘制病毒生长曲线以确定适宜感染复数。在感染后不同时间点,微量滴定法比较仅收获胞外病毒与收获胞内外病毒的滴度。比较单次收获与多次收获病毒的滴度,并对原液和冻干成品进行稳定性试验。结果确定细胞工厂培养麻疹病毒的适宜感染复数为0.010~0.100。感染后108~168 h细胞外病毒滴度与含胞内病毒滴度无明显差异(t=0.524,P>0.05)。多次收获得到的病毒总量高于单次收获。单次收获与多次收获得到的病毒原液-65 ℃保存3个月,病毒滴度下降均不超过每毫升0.3 lg半数细胞物培养感染量,冻干成品37 ℃保存1周,滴度下降均不超过每毫升0.5 lg半数细胞培养物感染量。结论建立了细胞工厂培养麻疹减毒活疫苗的多次收获工艺。