乙型肝炎卡介苗联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗免疫效果的比较

目的:比较乙型肝炎卡介苗联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗的免疫效果。方法:实验动物采用豚鼠,按0、1、2月三针免疫程序接种,并于每针免疫后1个月采血,ELISA方法检测血清抗体滴度。实验分三部分进行。实验一:三种不同规格的联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗的比较;实验二:同一规格连续三批联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗的比较;实验三:联合疫苗与两种单价疫苗同时免疫的比较。结果:在三个实验中,联合疫苗组第一针血清抗体滴度均低于对照组,但无统计学差异;联合疫苗组第二、三针血清抗体滴度均高于对照组,也无统计学差异,实验组各组之间无明显差异。结论:联合疫苗组三针免疫程序的HBsAg的效力与单价乙型肝炎疫苗组相似。

国产与进口DMEM培养基培养CHO-C28细胞效果比较

目的比较国产与进口DMEM培养基培养CHO-C28细胞的效果。方法采用国产DMEM培养基与进口DMEM培养基培养同批CHO-C28细胞,收集培养上清,检测HBsAg表达水平。采用相同条件纯化培养上清中的HBsAg,比较二者的层析图谱及纯化抗原的电泳图谱。并用其抗原制备疫苗,进行异常毒性和效力试验。结果培养上清中HBsAg表达水平,国产培养基略好于进口培养基,二者纯化图谱和抗原电泳图谱一致。两种培养基制备的疫苗异常毒性试验均合格,小鼠效力试验结果差异无显著意义。结论国产培养基在细胞培养中安全、有效,达到进口培养基水平,可用于规模化生产。

纯化乙型肝炎病毒表面抗原新层析工艺的建立

目的建立提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)纯度和收率的新工艺。方法采用微滤法、疏水层析、“穿透式”阴离子交换层析、硫酸纤维素亲和层析和凝胶过滤层析进行HBsAg的纯化。结果采用新建立的工艺,HBsAg收率在50%以上,纯度大于95%,各项检定结果均符合《中国药典》三部(2005版)要求。结论新工艺提高了HBsAg的纯度和收率,适用于规模化生产。

HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌不同部位的表达

目的:分析比较HBV PreS2蛋白在大肠杆菌细胞周质和细胞质中的融合表达情况。方法:构建大肠杆菌细胞周质中融合表达HBV PreS2蛋白的载体pMAL-P2x/S2和细胞质中融合表达载体pMAL-C2x/S2,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE和Western Blot检测,分析HBV PreS2-MBP融合蛋白在菌体不同部位的表达情况及表达产物的存在形式。结果:细胞周质中表达的融合蛋白有一部分被降解了,而细胞质中表达出了完整的融合蛋白。细胞质中表达的融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白两种形式存在。结论:HBV PreS2-MBP融合蛋白适合在大肠杆菌细胞质中表达。

毕赤酵母表达乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化和免疫效果

目的研究重组毕赤酵母表达的乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化方法及免疫效果。方法甲醇诱导含preS2S基因的重组毕赤酵母菌,采用蔗糖区带速率离心、Butyl-S-Sepharose 4FF疏水层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析等方法,对表达产物进行纯化。纯化后蛋白经SDS-PAGE和Western blot方法鉴定,制备成疫苗,并进行效力试验。放射免疫法检测免疫小鼠血清抗体浓度,计算ED50和相对效力。ELISA法检测血清中的preS2S抗体。结果纯化后的preS2(epi)S蛋白相对分子质量约为27000,且能与特异性抗体结合。两批纯化蛋白制备的疫苗ED50分别为0.35和0.48μg/ml,参比苗为0.52μg/ml。2批疫苗的体外相对效力分别为1.5和1.1,均合格,血清抗体平均浓度为808和784mIU/ml,参比苗为312mIU/ml。2批疫苗免疫小鼠后均产生了preS2抗体。结论该纯化方法实用有效,纯化后的preS2(epi)S蛋白比S蛋白具有更好的免疫原性。

饲养细胞用于挽救濒死的珍稀贴壁细胞

目的挽救濒于死亡的珍稀贴壁细胞。方法将濒于死亡的RINm5F细胞接种到一定量体外培养的小鼠腹腔细胞中,经过一段时间的培养,待RINm5F细胞逐渐长成岛状时,传代并再连续添加2次饲养细胞培养后,传2代,冻存。结果濒于死亡的RINm5F细胞与饲养细胞共培养,随着时间的延长,细胞生长速度加快,饲养细胞逐渐死亡,再经2次与饲养细胞共培养,细胞已恢复正常生长,冻存后复苏生长状态良好。结论添加饲养细胞的方法可用于挽救濒于死亡的细胞。

氢氧化铝佐剂配制工艺的优化

目的优化氢氧化铝[A(lOH)3]佐剂配制工艺。方法对A(lOH)3配制工艺中的反应温度、氢氧化钠(NaOH)溶液的滴入速度、气体流量和反应终点pH值进行优化,观察配制的A(lOH)3溶液的状态。分别以原工艺和优化工艺配制的A(lOH)3溶液为佐剂制备重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞),比较二者的外观和效力。结果优化的A(lOH)3配制工艺为:反应温度70～72℃;NaOH溶液滴入速度185ml/min,10个点滴入;气体流量0.2bar;反应终点pH值5.80±0.05,以该工艺配制的A(lOH)3胶体颗粒大小均匀,呈淡淡的蓝白色,不发生沉淀。以优化工艺配制的A(lOH)3溶液为佐剂制备的重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)无沉淀,为均匀的胶体,成品放置3年外观无显著变化;疫苗效力略有提高,但不显著。结论优化了A(lOH)3溶液佐剂的配制工艺。

ClC-2氯通道在大鼠小梁网中的表达

目的分析电压门控性氯通道ClC家族中的ClC-2氯通道在大鼠小梁网中的表达,探讨ClC-2在青光眼发病机制中的可能作用。方法经前房内注射玻璃酸钠建立大鼠慢性高眼压模型,取正常大鼠及模型大鼠小梁网组织,采用RT-PCR法检测ClC-2基因mRNA的转录水平,免疫组化法检测ClC-2蛋白的表达水平。结果在正常大鼠和慢性高眼压模型大鼠小梁网组织中,均可检测到ClC-2的表达,且模型大鼠ClC-2基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均较正常大鼠降低。结论大鼠小梁组织中存在ClC-2氯通道的表达,该通道的表达受小梁网的一些病理因素的影响。