CelliGen^TM310型生物反应器功能组成、故障处理及应用

使用生物反应器进行大规模动物细胞体外培养,已经成为生物技术产品研究和开发的关键工艺步骤,为细胞生长提供了一个适宜的环境,能够显著提高动物细胞的培养密度,使之快速增殖作为制备生物制品的基质,从而保证工业规模生产的产品质量。本文以型号为CelliGenTM310生物反应器为例,对其基本结构、主要功能、常见问题处理及实际应用进行阐述,以期对使用者有所帮助。

热休克处理的肿瘤细胞培养上清对脐血淋巴细胞活性的影响

肿瘤微环境（tumor microenvironment）是肿瘤所处的内环境,由肿瘤局部浸润的免疫细胞、间质细胞及所分泌的活性介质、微血管、组织液等与肿瘤细胞本身共同构成[1,2]。不仅包括肿瘤所在组织的结构、功能和代谢,也与肿瘤细胞自身内环境有关。肿瘤细胞可以通过自分泌和旁分泌,改变和维持自身生存和发展的条件,促进肿瘤的生长和发展。

冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度FFA法的建立及验证

目的:建立并验证荧光灶法(FFA)检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度的可行性。方法:采用FFA分别检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗H1N1型、H3N2型、B型单一病毒收获液病毒滴度,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性和耐用性。结果:该方法专属性良好;准确度回收率均为80%~115%,病毒滴度的试验内及试验间精密度RSD值均<10%;3个型别样品稀释倍数对数与病毒滴度呈线性关系,相关系数R2均>0.98;不同孵育温度的病毒滴度RSD值均<10%,耐用性良好。结论:建立的FFA具有良好的专属性、准确度、精密度、线性及耐用性,可用于冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度检测。

冻干鼻喷流感减毒活疫苗毒种工艺优化及双向鉴别方法建立

优化冻干鼻喷流感减毒活疫苗的毒种制备工艺,消除DI颗粒的影响,并建立双向鉴别试验方法。方法 使用WHO推荐2021-2022年北半球流感疫苗生产用H3N2型、B型毒株作为原始毒株,使用原有工艺制备主代与工作代毒种,利用优化工艺,以终末稀释度法选取高稀释度制备主代与工作代毒种,通过电镜下观察毒种DI颗粒消除情况。从而达到优化毒种制备工艺的目的;分别使用野毒株抗雪貂血清和减毒株抗雪貂血清对减毒株和野毒株进行血凝抑制试验,若减毒株抗原性与推荐株相一致,证明方法适用于冻干鼻喷流感减毒活疫苗主种子批毒种抗原性的鉴别,结果 工艺优化后毒种病毒滴度较高,电镜下观察工艺优化后的工作代毒种,DI颗粒有明显消除,减毒株抗原性与推荐株相一致。结论 通过终末稀释度法制备出了病毒滴度较高工作代毒种,双向鉴别方法适用于冻干鼻喷流感减毒活疫苗主种子批毒种抗原性的鉴别。

酪氨酸酶转运对黑色素生成影响研究进展

哺乳动物毛色的形成依赖于黑色素细胞中黑色素数量及分布比例,酪氨酸酶类(TYR/TYRP1)的转运及其活性是黑色素合成的关键。衔接蛋白(AP-1/3)和溶酶体相关细胞器生物合成复合物(BLOC-1,2,3)将TYR/TYRP1从早期核内体转运至黑素小体,若TYR/TYRP1无法转运至黑素小体中,黑色素合成则会受到抑制。ATP7A将铜离子转移到TYR/TYRP1,从而激活TYR/TYRP1活性,ATP7A的减少同样会使黑色素细胞中黑色素合成量减少。关注这些复合物在转运TYR/TYRP1的作用及影响其活性的因素,可以从不同的角度解析黑色素合成机理,以此为基础探索哺乳动物毛色的淡化机制,以期为阐明人类黑色素合成障碍的相关疾病提供理论依据。

SOE-PCR法合成狂犬病毒单链抗体基因Fv57

目的:通过一系列短引物拼接合成狂犬病毒糖蛋白单链抗体基因Fv57。方法:采用SOE-PCR的方法,利用多条短的寡核苷酸引物,经过6轮PCR,拼接合成800bp左右的狂犬病毒糖蛋白单链抗体基因Fv57,并利用此方法修正了上述PCR过程中产生的多处突变,从而获得正确的单链抗体基因序列。结果:采用SOE-PCR法合成的基因序列经测序及酶切鉴定,与预期结果一致。结论:成功地利用SOE-PCR法合成了狂犬病毒糖蛋白单链抗体基因Fv57,为其下一步构建原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达奠定基础。

肺癌患者外周血淋巴细胞亚群与性别、年龄及临床分期的关系

目的探讨肺癌患者外周血淋巴细胞亚群与性别、年龄及临床分期的关系。方法四色免疫荧光标记流式细胞仪分析。结果 (1)肺癌组与正常对照组比较CD3+、CD3+CD4+及CD3-CD16+CD56+细胞百分数明显下降,而CD3+CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞无显著变化;(2)女性CD3+CD4+细胞明显多于男性,而CD3-CD16+CD56+细胞明显少于男性;(3)51-60岁年龄段患者CD3+CD4+细胞百分数明显低于≦50岁和≥61岁年龄段患者的CD3+CD4+细胞百分数,而CD3+CD8+细胞百分数明显高于≦50岁和≥61岁年龄段患者的CD3+CD8+细胞百分数;50岁年龄段患者CD3+CD16+CD56+细胞百分数明显少于51-60岁和≥61岁年龄段患者的CD3+CD16+CD56+细胞百分数;(4)随着临床分期愈晚免疫指标变化愈明显,Ⅰ期与Ⅱ期之间差异不明显。结论肺癌患者外周血淋巴细胞亚群多项指标发生明显改变,且与性别、年龄及临床分期关系密切。

酸热法提取山葡萄籽油工艺优化及油脂脂肪酸组成分析

对酸热法提取山葡萄籽油工艺进行优化。以提油率为评价指标,采用单因素实验研究了盐酸浓度、料液比、酸热时间、酸热温度和浸提时间对山葡萄籽油提取效果的影响,并运用响应面法进行工艺优化。结果表明:最佳提取工艺条件为料液比1∶6、盐酸浓度4. 09 mol/L、酸热时间59. 37min、酸热温度75. 85℃、浸提时间1. 99 h,在此条件下,提油率为26. 005%;山葡萄籽油脂肪酸组成以亚油酸为主,含量达到70. 59%,其次为油酸(13. 34%)、棕榈酸(8. 63%)和硬脂酸(4. 27%),而花生酸、亚麻酸、棕榈油酸、豆蔻酸的含量相对较低。

水痘减毒活疫苗初次免疫后11年免疫持久性研究

目的:观察水痘减毒活疫苗(VarV)受试者初次免疫后11年的抗体几何平均滴度(GMT)和阳性率,并评价其免疫持久性。方法:选择2006年9月于广西永福县开展的VarV随机、双盲Ⅲ期临床试验中接种1针剂国产VarV的受试者100名作为试验组,50名接种1针剂进口VarV(平行试验)的受试者作为对照组;采集初次免疫后11年的静脉血3.0 ml,膜抗原荧光抗体法检测血清中水痘病毒抗体,计算血清抗体阳性率、抗体GMT和不同中和抗体滴度人数的百分比,并与初次免疫后30 d抗体水平进行比较。结果:VarV初次免疫后11年,2组全人群、幼儿和儿童抗体GMT分别为37.01、42.31、28.21和22.63、22.83、21.93,抗体阳性率分别为98.00%、100.00%、93.94%和94.00%、92.31%、100.00%,中和抗体滴度≥4的人数占比分别为98.00%、100.00%、93.94%和94.00%、92.31%、100.00%;试验组幼儿的GMT、抗体阳性率及中和抗体滴度≥4的人群数占比明显高于对照组(P<0.05);2组全人群、幼儿及儿童的抗体GMT均明显低于初免后30 d(P<0.05),但抗体阳性率仍保持较高水平(≥92.31%)。结论:VarV免疫后11年仍具有较好的免疫原性,但抗体GMT水平随时间推移呈明显下降趋势。

甲肝灭活疫苗(Vero细胞)在2岁以上中国健康人群的免疫原性和安全性研究

目的比较甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗(Vero细胞)与甲肝灭活疫苗(二倍体细胞)在2岁以上健康人群中的免疫原性和安全性。方法采用随机、盲法、对照的设计,选择2 100名2岁以上甲肝易感者,分为A、B两组,按照0、6月免疫程序,接种甲肝灭活疫苗(Vero细胞)或甲肝灭活疫苗(二倍体细胞)并观察安全性;所有受试者于免前、全程免后1个月采血(前600名还需采集首剂免疫后1个月血样),采用间接酶联免疫吸附试验方法(ELISA)检测抗甲肝病毒抗体(抗-HAV),评价免疫效果。结果 1剂后A组抗-HAV阳转率为96.05%(成人)和92.78%(儿童),B组为94.92%(成人)和96.61%(儿童);2剂后A组为99.61%(成人)和99.53%(儿童),B组为99.41%(成人)和100.00%(儿童)。两组间抗-HAV阳转率均无统计学差异。安全性方面,A组不良反应率为32.41%(成人)和53.61%(儿童),B组为35.56%(成人)和53.33%(儿童),1级反应为主,组间无统计学差异。结论甲肝灭活疫苗(Vero细胞)对2岁以上的人群免疫原性和安全性良好。

胰岛素样生长因子1基因多态性与生产性能关系研究进展

胰岛素样生长因子1(IGF-1)是一种活性蛋白多肽物质,由IGF-1基因编码,具有类胰岛素功能,它对促进动物机体生长发育、调节机体物质代谢和治疗众多疾病等方面具有重要意义。探讨IGF-1基因功能区多态性对动物体生产机能的作用,具有重要的实践意义与经济价值。论文对IGF-1基因功能、基因多态性与生产性能关系进行综述,以其为相关研究提供参考。

检测水痘-带状疱疹病毒糖蛋白水平双抗体夹心ELISA法的建立和验证

目的:建立可快速检测水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白抗原水平的双抗体夹心ELISA法,并验证其特异性、线性、准确性和精密性。方法:采用抗VZV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测VZV糖蛋白抗原水平。优化抗体组合、抗体工作浓度、包被条件、封闭条件、酶标抗体反应条件和显色条件,并对建立的方法进行特异性、线性、准确性及精密性验证。结果:捕获抗体VZV-mAb-03和酶标抗体VZV-mAb-HRP-02的组合为最优双抗组合,其最适浓度分别为450.0和0.1μg·L^-1,最适包被条件为0.05 mol·L^-1 Tris-HCl(pH值为8.7±0.1)在4℃条件下包被过夜(18 h),最适封闭条件为1%牛血清白蛋白(BSA)在37℃条件下封闭2 h,最适样品稀释液为磷酸盐吐温缓冲液(PBST),抗原夹心与酶标抗体最适反应条件均为37℃、1 h,最适显色条件为37℃、15 min。经验证,该方法与其他人用疫苗及辅料成分无交叉反应;线性范围为500~2600 PFU·mL^-1,回归系数(R2)>0.95;批内回收率82.2%~115.7%,变异系数(CV)<10.2%;批间回收率80.5%~118.6%,板内CV<17.4%,板间CV<14.9%。结论:建立了一种基于检测双抗体夹心的VZV糖蛋白抗原水平的ELISA检测方法,符合定量检测需要,可用于VZV疫苗的研发和生产过程中的抗原水平检测。

植物多糖药理功效研究进展

我国植物资源蕴藏丰富,为植物多糖的开发和利用奠定了深厚的物质基础。天然植物多糖属于植物体内一类非常重要的生物大分子,同时也是有效维持和保证生物体生命活动能够正常运转的基本物质,具有抗肿瘤、免疫调节、抗病毒及抗氧化等多种药理作用,可作为天然的免疫调节剂,已成为国内外学者的研究热点之一。本文综述了近年来国内外有关植物多糖免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血压、抗血栓、降血糖、对免疫性肝损伤的保护以及抗辐射活性等药理作用功效的研究进展,以期为植物多糖更好的开发和利用,及在药品、食品等相关领域的广泛应用提供良好的理论基础。

刺五加的化学成分及药理活性研究进展

随着刺五加临床效果的肯定以及临床应用的不断扩大,国内外学者对刺五加的化学成分、药理作用以及制剂临床应用进行了深入的研究。本文通过对近年来刺五加苷类、黄酮类、木脂素类、多糖类等化学成分的研究进展,以及刺五加对心脑血管系统、神经系统、内分泌系统、免疫功能调节、抗癌、保护肝脏、抗衰老、抗氧化、抗炎、降血压、抗应激等药理活性研究进展的阐述,旨在为进一步深入开发和利用刺五加植物资源提供重要参考。

玉竹的化学成分及药理作用研究进展

综述玉竹化学成分和药理作用研究进展。玉竹中主要含有多糖、甾体皂苷、黄酮、挥发油等多种化学成分,具有降血糖、免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、延缓皮肤衰老等药理作用。

刺五加多糖镇痛抗炎作用及其免疫调节机制的研究

目的探讨刺五加多糖的镇痛抗炎作用及其免疫调节机制。方法①将60只SPF级昆明种小鼠随机分为正常组、对照组、阳性对照组、刺五加多糖高剂量组(ASPS200)、刺五加多糖中剂量组(ASPS100)、刺五加多糖低剂量组(ASPS50)。除正常组(10只)外,其余50只小鼠采用热板法或醋酸扭体法建立镇痛模型,各组进行相应干预,测定各组小鼠镇痛率、扭体反应抑制率、脾脏指数、胸腺指数及血清中细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β的水平。②将60只SPF级昆明种小鼠随机分为正常组、对照组、阳性对照组、刺五加多糖高剂量组(ASPS200)、刺五加多糖中剂量组(ASPS100)、刺五加多糖低剂量组(ASPS50)。除正常组(10只)外,其余50只小鼠采用鸡蛋清致小鼠足趾肿胀或醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加建立炎症模型,各组进行相应干预,测定足趾肿胀抑制率、腹腔毛细血管通透性提高抑制率、脾脏指数、胸腺指数及血清中细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β的水平。结果①与对照组比较,阳性对照组和刺五加多糖高剂量组小鼠痛阈值延长(P<0.05),扭体抑制率提高(P<0.05),小鼠血清中细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β的水平不同程度下降(P<0.05);刺五加多糖各剂量组小鼠脾脏指数和胸腺指数不同程度高于对照组(P<0.05);刺五加多糖各剂量组小鼠脾脏指数、胸腺指数、血清中细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β的水平不同程度高于阳性对照组(P<0.05)。②与对照组比较,阳性对照组和刺五加多糖高剂量组小鼠足趾肿胀抑制率和腹腔毛细血管通透性提高的抑制率升高(P<0.05),小鼠血清中细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β的水平不同程度下降(P<0.05);刺五加多糖各剂量组小鼠脾脏指数和胸腺指数不同程度高于对照组(P<0.05)。刺五加多糖各剂量组小鼠脾脏指数、胸腺指数、血清中细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β的水平不同程度高于阳性对照组(P<0.05)。结论刺五加多糖可改善小鼠镇痛抗炎模型状况,其作用机制可能是改善免疫器官指数,调节相关免疫细胞因子水平。

青紫蓝兔棒状杆菌病的诊断与治疗

从发病情况、临床症状、病理剖检、实验室检查等方面对临床发生的青紫蓝兔棒状杆菌病例进行综合诊断。采用氨苄青霉素和庆大霉素对体表淋巴结化脓且已破溃的患兔进行治疗,并对比2种药物的治疗效果。结果表明,氨苄青霉素对青紫蓝兔棒状杆菌感染的治疗效果更优。

人呼吸道合胞病毒纳米抗体的构建及活性

目的 通过免疫羊驼和噬菌体建库筛选出人呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)纳米抗体(nanobodies,Nbs),并评价其结合活性和中和活性。方法 使用RSV重组F蛋白免疫2只羊驼,构建噬菌体文库,筛选得到纳米抗体的骨架区(framework region,FR)和抗原互补决定区(complementarity determining region,CDR)序列,将序列重组构建出3株RSV纳米抗体,使用Ni-NTA亲和层析纯化后,ELISA法检测纳米抗体的结合活性,RSV A2株评价纳米抗体的中和活性。结果 3株纳米抗体BF-42、BF-46、Fh-24相对分子质量约为17 000,纯化后抗体纯度约为95%;BF-42、BF-46浓度为0.16μg/mL,Fh-24浓度为32 ng/mL时仍有结合活性,三者结合能力存在剂量依赖性;3株纳米抗体浓度为450μg/mL时,均可保护50%Hep2细胞免受病毒感染,出现50%致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),能够有效中和病毒。结论 构建的3株纳米抗体具有较高的结合活性和一定的中和能力,为RSV纳米抗体的应用奠定了基础。

呼吸道合胞病毒重组F蛋白疫苗的制备及免疫效果评价

目的制备呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)重组F蛋白疫苗,并对其免疫效果进行评价。方法制备两种基于RSV F蛋白的RSV疫苗:一种是以细菌样颗粒(bacterial like particle,BLP)为佐剂的黏膜疫苗,一种是以Al(OH)_(3)为佐剂的注射疫苗。将40只雌性BALB/c小鼠随机分为4组:BLP-F、BLP对照、AL-F和AL对照组,每组10只,BLP-F和BLP对照组经鼻内接种,AL-F和AL对照组经皮下接种。分别于第0、14、28天各免疫1次。末次免疫后2周,ELISA法检测小鼠血清IgG抗体效价及鼻洗液中IgA抗体效价,空斑试验检测中和抗体效价。结果两种疫苗均诱导了高水平的血清结合抗体和中和抗体,注射疫苗的诱导能力强于黏膜疫苗,注射疫苗可诱导血清中IgG升高,比黏膜免疫应答高约10倍,但不能诱导IgA升高,而黏膜疫苗可诱导高水平的黏膜IgA,但血清中IgG抗体相对较低。结论两种基于RSV F蛋白的疫苗均为有前途的候选疫苗,每种疫苗均有其自身的优势。后续研究将采用联合免疫的方式评估这两种疫苗作为免疫原的可行性,以同时增强针对RSV的全身和黏膜免疫应答。

百日咳疫苗接种对婴幼儿百日咳临床表现的影响探究

婴幼儿进行百日咳疫苗接种后,分析接种后临床表现以及产生的影响。方法:针对我院收治的百日咳患儿240例开展分析,以回顾性分析的方式进行实验(时间:2019年6月-2020年6月),了解患儿的各项资料,接种资料等,用以分析大于3月龄接种组和未接种组呼吸道感染情况,不同剂次疫苗接种对患儿呼吸道感染的影响、大于3月龄接种组以及未接种组外周血细胞计数比较。结果:①接种组和未接种组出现主要并发症为:肺炎,组内出现肺炎,支气管炎的几率无差异(p>0.05);未接种组重症肺炎率高于接种组,上呼吸道感染率比对,未接种组低于接种组,组间存在同质性(P<0.05)。②小于3月龄患儿,实施0剂次组以及1次剂组呼吸道的感染率无差异(p>0.05),分析大于3月龄患儿,不同接种剂次患儿上呼吸道感染、肺炎,重症肺炎率存有差异(p<0.05);0剂次组患有上呼吸道感染、肺炎,重症肺炎率最高,患病率最低为4剂次组,组间具有统计学意义(P<0.05)。③未接种组白细胞最高值、淋巴细胞绝对值、血小板计数均比接种组高,组间存在同质性(p<0.05);组内中性粒细胞/淋巴细胞比率、血小板压积无差异(p>0.05)。结论:临床上,对婴幼儿进行百日咳疫苗接种,可降低患有重症肺炎、呼吸衰竭等几率,也能够避免出现其它严重的并发症。