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题名缺氧诱导的外泌体活化自噬促进肝癌进展
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作者
王坪锋
胡培
童堃
童尧尧
李莹
严世荣
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机构
湖北医药学院湖北省胚胎干细胞研究重点实验室
湖北医药学院生物医学工程学院
湖北医药学院附属太和医院检验科
长江大学附属黄冈市中心医院检验科
长江航运总医院检验科
湖北医药学院药学院湖北省武当地方中药研究重点实验室
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出处
《山西医科大学学报》
CAS
2023年第8期1019-1028,共10页
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基金
湖北省自然科学基金项目(2020CFB235)
陈孝平基金肝胆胰恶性肿瘤研究计划项目(CXPJJH1200001-2020340)。
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文摘
目的探讨缺氧诱导的外泌体对肝癌进展的调节作用及其机制。方法将Huh7细胞置于0.1%O_(2)培养箱培养24 h作为缺氧组,另设常氧组,提取外泌体,纳米追踪技术检测外泌体的浓度和粒径大小,免疫印迹检测HSP70、Alix、CD63的表达。将Huh7细胞分为对照组(PBS)、常氧外泌体组(20μg/ml常氧外泌体)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体),实时无标记细胞分析仪(real-time cell analysis,RTCA)实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,免疫印记检测细胞PCNA、cyclin D1、Bax、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3、p62的表达,激光共聚焦检测自噬流的改变。Huh7细胞分为对照组(PBS)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体)、缺氧外泌体+3-MA组(5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤+1 h后20μg/ml缺氧外泌体),检测细胞增殖、迁移和相关蛋白的表达。结果与常氧组相比,缺氧组外泌体浓度增加,但外泌体粒径的大小没有明显变化,缺氧组外泌体标记蛋白HSP70、Alix、CD63的表达增加(P<0.05)。与常氧外泌体组相比,缺氧外泌体组Huh7细胞增殖和迁移能力增强(均P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达上调,Bax、E-cadherin和p62的表达下调(均P<0.05),自噬流增强(P<0.05)。与缺氧外泌体组相比,缺氧外泌体+3-MA组Huh7细胞增殖、迁移和上皮间质转化作用减弱(P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达下调(P<0.05),Bax、E-cadherin和p62的表达上调(P<0.05)。结论缺氧诱导的外泌体可以参与细胞自噬的发生进而促进肝癌进展。
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关键词
肝细胞癌
外泌体
缺氧
自噬
自噬流
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Keywords
hepatocellular carcinoma
exosome
hypoxia
autophagy
autophagy flux
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分类号
R735.7
[医药卫生—肿瘤]
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