LncRNA PCBP1-AS1通过调节PCBP1/miR-199/XBP1通路促进肝癌细胞EMT转化

目的:本研究旨在探讨lncRNA PCBP1-AS1在肝细胞癌EMT转化中的调控作用及其机制,为肝细胞癌的防治提供新靶点。方法:收集了21例肝细胞癌患者的肝癌组织和相应的癌旁正常组织作为细胞检测标本。采用Real-Time PCR检测和蛋白免疫印迹法检测细胞中lncRNA PCBP1-AS1,miR-199,XBP1等基因的表达;使用皮尔逊相关系数法分析lncRNA PCBP1-AS1表达水平与肝细胞癌TNM分期的相关性;并利用生物信息学预测及荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PCBP1-AS1与miR-199间的相互作用;通过转染miR-199 mimc或inhibitor构建miR-199 mimc或inhibitor的Hep3B细胞模型;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;划痕实验检测细胞的迁移能力;CCK-8法检测细胞活力;LDH释放实验检测细胞毒性。结果:与癌旁组织相比,肝癌组织中LncRNA PCBP1-AS1表达明显增加,其水平与肝细胞癌的TNM分期呈正相关;信息学预测lncRNA PCBP1-AS1与miR-199存在相互作用;miR-199 mimic可以显著减少转染lncRNA PCBP1-AS1-wt报告基因质粒的Hep3B细胞荧光素酶活性;转染lncRNA PCBP1-AS1质粒可明显上调Hep3B细胞中lncRNA PCBP1-AS1、XBP1、Snai1、Vimentin mRNA及蛋白的表达,下调miR-199、E-cadherin mRNA及蛋白的表达,增加Hep3B细胞的活力、迁移、侵袭能力,减少Hep3B细胞LDH的释放,而上述作用可被miR-199 mimic抑制或被miR-199 inhibitor促进。结论:lncRNA PCBP1-AS1通过结合miR-199并减少其表达水平,可上调肝癌细胞中XBP1Snai1、Vimentin的表达,同时下调E-cadherin基因的表达,从而促进了上皮-间充质转化(EMT),是肝细胞癌的潜在靶点。