人体外受精与胚胎移植的研究

目的 :观察体外受精胚胎移植 (IVF -ET)治疗不孕症的疗效。方法 :从 2 0 0 0年 1 0月～ 2 0 0 1年 6月底 ,对 6对夫妇进行 6个周期的IVF -ET ,采用GnRH -a/FSH/HMG/HCG方案超促排卵 ,进行体外受精、胚胎移植。结果 :6例接受治疗的妇女中 ,1例获生化妊娠 ,2例获临床妊娠 ,其中 1例成功诞生男女双婴。结论

卵泡液内微量元素与体外受精-胚胎移植结局关系的研究

目的探究IVF-ET不同妊娠结局者卵泡液内微量元素水平变化,以及其与妊娠结局者的关系。方法2017年2—4月方便选取该院进行IVF-ET治疗的97例女性不育患者进行研究,根据妊娠结局分为妊娠组(59例)、非妊娠组(38例),采用GnRH-a-Gn-hCG方案控制排卵,卵泡穿刺后收集上清卵泡液,电感耦合等离子体质谱法检测卵泡液铜、锌、铁、硒、铅水平。结果妊娠组卵泡液中微量元素锌、硒[(0.52±0.13)ppm、(54.93±3.44)ppb]水平均高于非妊娠组[(0.30±0.18)ppm、(40.51±4.21)ppb],差异有统计学意义(t=6.514、17.649,P<0.05)。妊娠组与非妊娠组卵泡液中微量元素铜、铁水平差异无统计学意义(P>0.05)。高龄组较非高龄组妊娠率低(42.86%、68.12%),差异有统计学意义(χ^2=5.333,P<0.05),高龄组与非高龄组比较微量素锌、铜、铁、硒及铅均差异无统计学意义(P>0.05)。结论卵泡液中微量元素锌、硒与IVF-ET妊娠结局有相关性,微量元素铜、铁、铅与IVF-ET妊娠结局无相关行。卵泡液中微量元素铜、铁、锌、硒、铅与IVF患者年龄无相关性。

男性不育症患者X染色体雄激素受体基因外显子1、3、4状态筛选研究

目的研究雄激素受体（androgen receptor,AR）基因与特发无精症之间的关系。方法运用分子生物学方法分别检测35名无精症患者和20名对照组正常男性雄激素受体基因的3个功能区的DNA片段,结果实验组患者和正常男性AR外显子1中（CAG）n重复数在11~27之间,两组无显著差别,35例无精症患者用PCR扩增出雄激素受体外显子3（exon3）片段35例（100%）和外显子4（exon4）片段34例（97.15%）,20名正常已生育男性扩增出AR外显子3（exon3）片段20例（100%）和外显子4（exon4）片段20例（100%）。结论（CAG）n基因多态性与男性精子生成障碍无相关性,exon4缺失通过影响靶细胞核的类固醇激素-受体结合物数量在精子发生中的作用需进一步探讨。

中国人原发无精症雄激素受体基因研究

目的:明确雄激素受体基因与原发无精症之间关系。方法:运用聚合酶链反应技术,对实验组30例原发无精症和对照组10例正常健康已生育的男性进行雄激素受体基因外显子3和外显子4缺失检测分析。结果:实验组检出1例外显子4缺失病人,外显子3缺失在实验组和对照组均未检出。结论:外显子4缺失通过影响结合了类固醇激素的雄激素受体核移位而影响精子的发生,而对男性表型的表达无影响,雄激素受体基因外显子4缺失是男性无精症的病因之一。

血清LIF、HB-EGF与冻融胚胎移植术后妊娠结局的相关性及对妊娠成功预测价值分析

目的:探讨血清白血病抑制因子(LIF)、肝素结合表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)与冻融胚胎移植术后妊娠结局的相关性及对妊娠成功预测价值分析.方法:选取2019年3月至2019年12月拟进行冻融胚胎移植术患者的92个周期,随访根据妊娠结局分为妊娠组(32周期)和非妊娠组(60周期),比较两组年龄、不孕年限、子宫内膜形态、移植日子宫内膜厚度等可能影响妊娠结局的因素;比较2组移植日血清LIF、HB-EGF水平,并采用Logistic回归分析法明确可能导致妊娠失败的危险因素;通过绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析血清LIF、HB-EGF水平对妊娠成功的预测价值.结果:妊娠组与未妊娠组子宫内膜形态、移植日子宫内膜厚度比较,差异有统计学意义(P<0.05);妊娠组移植日血清LIF质量浓度[(24.45±2.91)pg/mL]高于未妊娠组[(19.32±2.04)pg/mL],HB-EGF质量浓度[(3320.59±300.74)pg/mL]高于未妊娠组[(2430.55±261.37)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归分析,子宫内膜形态、移植日子宫内膜厚度、血清LIF、HB-EGF水平均是导致冻融胚胎移植术后妊娠失败的危险因素(OR=3.074、2.563、4.437、3.881,P<0.05);经ROC曲线分析,血清LIF预测冻融胚胎移植术后妊娠成功的灵敏度、特异度、准确度和AUC分别为84.38%、76.67%、79.35%、0.760;血清HB-EGF水平预测的灵敏度、特异度、准确度和AUC分别为78.13%、73.33%、75.00%、0.722.结论:血清LIF、HB-EGF水平与冻融胚胎移植术后妊娠结局关系密切,且两者对冻融胚胎移植术后妊娠成功有较高预测价值.

早孕小鼠子宫内膜组织中IASPP表达对胚胎着床的作用

目的:探讨早孕小鼠子宫内膜组织中P53凋亡刺激蛋白抑制因子(IASPP)的表达对胚胎着床的作用。方法:对NIH雌鼠进行阴道涂片以确定其动情周期,采用实时荧光定量PCR、Western blot以及免疫组化等分别在分子和蛋白水平上检测雌鼠子宫内膜上IASPP的表达情况;对实验组小鼠左侧子宫角注射IASPP抑制剂,最后测量IASPP在未孕小鼠及妊娠小鼠第2至7天子宫内膜的表达和胚胎着床数,进行统计分析。结果:IASPP的转录水平随时间推移而缓慢升高,并于雌鼠孕期内的第4天达到峰值(P<0.05),之后IASPP水平缓慢降低。Western blot实验结果也表明IASPP的蛋白水平随时间推移而缓慢增加,在雌鼠动情周期的第5天到达峰值(P<0.05),随后缓慢降低,与转录水平变化结果大致相近。免疫组织化学染色的结果显示,早孕小鼠子宫腔上皮、腺上皮的胞膜和胞浆,血管内皮以及基质细胞的细胞核表达IASPP蛋白均高于未孕组,且各个妊娠阶段表达存在差异;从怀孕开始,IASPP呈现表达逐渐增强的趋势,至孕第7天表达开始下降。从孕第8天开始,实验组左侧子宫胚胎着床数为(1.402±0.517),右侧为(6.420±1.075),对照组左侧子宫胚胎着床数的范围为(6.500±1.090),对照组右侧子宫胚胎着床数的范围为(6.200±0.919),数据显示实验组小鼠的左侧胚胎着床数明显低于右侧胚胎着床数(P<0.05),而对照组小鼠的左右侧子宫胚胎着床数目无明显差别(P>0.05)。结论:妊娠早期的小鼠子宫内膜组织中p53凋亡刺激蛋白抑制因子IASPP持续表达,并正向参与胚胎的着床调控过程。

DNA甲基转移酶1的表达对小鼠精原干细胞分化的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达对小鼠精原干细胞(SSC)分化的影响。方法:采用两步酶消化法从1周龄BALB/c雄性小鼠睾丸组织中分离获取SSC,将DNMT1-siRNA、siRNA阴性对照(NC-siRNA)转染入分离纯化后第三代SSC,分别命名为DNMT1-Si组、DNMT1-NC组,另取未转染细胞命名为对照组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western印迹检测转染24 h后各组DNMT1 mRNA和蛋白表达水平,并检测转染后细胞基因组甲基化水平。干细胞生长因子诱导SSC向精母细胞方向分化,采用RT-qPCR法和Western印迹检测诱导分化48 h生殖细胞增殖相关蛋白(Nanos2)、早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)、维甲酸刺激蛋白(Stra8)mRNA和蛋白表达水平。结果:转染24 h后,DNMT1-Si组DNMT1 mRNA(0.13±0.03)和蛋白相对表达量(0.44±0.08)、DNA甲基化水平[(14.16±2.62)%]均低于对照组[0.94±0.08、1.21±0.11、(27.15±3.54)%]和DNMT1-NC组[0.93±0.09、1.19±0.10、(26.85±3.55)%,P<0.05],对照组与DNMT1-NC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。分化48 h后,与对照组和DNMT1-NC组比较,DNMT1-Si组Nanos2、PLZF mRNA和蛋白相对表达量降低,Stra8 mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05);对照组与DNMT1-NC组Nanos2、PLZF、Stra8 mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低DNMT1可促进小鼠SSC向精母细胞方向分化,其机制可能与降低基因组甲基化水平,抑制Nanos2、PLZF表达,促进Stra8表达有关。

男性不育与Y染色体

目的:观察精子数目异常与小Y染色体及内分泌性腺激素水平。方法:对262名少精及无精症患者检测染色体,并对其中11例小Y染色体及随机抽取的15例Y染色体正常的患者运用磁性分离酶免疫测定法分别检测性腺激素。结果:小Y染色体检出率为4.19%(11/262),其内分泌性腺激素均呈高卵泡刺激素、高黄体生成素和低睾酮水平,与Y染色体正常的无精及少精症患者相比较,差异有显著性(P<0.05)。而小Y染色体不同精子数组各内分泌性腺激素比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:精子数目异常可能与小Y染色体有关,小Y染色体基因改变可能是导致其内分泌性腺激素的变化因素。