乙醇通过促进上皮间质转化增强结直肠癌细胞的侵袭转移能力

目的研究乙醇对结直肠癌细胞HT29、SW480增殖、侵袭迁移能力的影响,并探讨其作用机制。方法利用CCK-8实验检测乙醇对HT29和SW480细胞增殖活性的影响,采用相关分析得出IC50值,建立结直肠癌细胞株低浓度乙醇染毒模型;流式细胞术检测细胞周期分布,细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,流式细胞术检测细胞ROS水平,Western blot检测细胞E-cadherin、N-cadherin和vimentin等上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达情况,利用乙醛检测试剂盒检测乙醇作用下乙醛的浓度。结果乙醇对HT29、SW480细胞的IC50值分别为436、424 mmol/L;随着乙醇浓度的增大,处于G1期细胞的占比增大;细胞划痕实验结果显示,与对照组相比,各浓度组乙醇处理后,HT29、SW480细胞愈合百分比皆明显增加(P<0.05);Transwell实验显示,在无基质胶和有基质胶条件下,乙醇处理皆能显著增加HT29、SW480细胞穿透小室的细胞数量(P<0.05)。进一步实验结果显示,乙醇能明显增加HT29、SW480细胞内的ROS水平(P<0.05);Western blot实验结果显示乙醇作用后HT29、SW480细胞内EMT相关蛋白E-cadherin表达显著降低,N-cadherin和vimentin的表达明显增加(P<0.05);乙醇浓度的升高,细胞中乙醛浓度随之增大。结论乙醇可能通过ROS介导EMT途径增强结直肠癌细胞的侵袭迁移能力。

同源重组修复通路基因遗传变异与结直肠癌易感性的关联研究

目的探讨我国人群同源重组修复(homologous recombination repair,HRR)通路关键基因的单核苷酸多态性与结直肠癌(colorectal cancer,CRC)易感性关联。方法以生物信息学分析结合文献筛选同源重组修复通路关键基因;采用基于通路分析的病例-对照研究设计,共纳入2001年1月至2004年6月于陆军军医大学3所附属医院普通外科经病理诊断的413例新发CRC病例与1 671例非肿瘤患者对照。以ILLUMINA人类基因组芯片对筛选出的基因上下游50 kb区域内的TagSNPs分型,采用logistic回归模型计算SNPs与CRC的关联。结果筛选出17个HRR通路中的关键基因;在17个基因及上下游50 kb区域内的2 207个SNP中有16个位点与结直肠癌风险关联显著,其中RAD52基因3’-UTR的rs11226位点携带A等位基因者的CRC风险相对携带G者增加约1.4倍(OR=1.42,95%CI=1.22~1.66,P=6.67×10-6);CRTC3-AS1基因内含子区rs75893366位点携带G等位基因者的CRC风险仅为携带A者的0.4倍(OR=0.43,95%CI=0.25~0.74,P=1.81×10-3)。但仅rs11226位点经bonferroni校正后在男性和女性中均具有显著性。结论同源重组修复通路中17个关键基因的单核苷酸多态性与结直肠癌患病风险显著关联,提示同源重组修复通路基因的遗传变异可能影响结直肠癌的遗传易感性。

乙醇代谢通路基因拷贝数变异与结直肠癌易感性的关联分析

目的探讨主要的乙醇代谢基因乙醇脱氢酶1B(ADH1B)、乙醛脱氢酶-2(ALDH2)和细胞色素P450 2E1(CYP2E1)拷贝数变异与中国西南地区人群结直肠癌(colorectal cancer,CRC)风险的关联。方法共纳入2001年1月至2004年6月陆军军医大学3所附属医院收集到的449例CRC和449例无癌对照。采用多重基因拷贝数定量方法 AccuCopy^(TM)对3个候选基因进行拷贝数检测,随机选取10%的样本进行拷贝数验证,采用二元Logistic回归分析CNV与CRC风险之间的关联。结果 ADH1B和ALDH2基因拷贝数在CRC病例和对照人群中没有变化,均为2拷贝。CYP2E1拷贝数在CRC患者和对照人群中分布差异有统计学意义(P=0.046)。Logistic回归分析发现CYP2E1拷贝数增加是CRC发生的危险因素(OR=2.47,95%CI:1.04~5.85,P=0.041)。分层后结果显示,年龄>50岁,肿瘤位于结肠,乙醇摄入量≤50 g的人群中,CYP2E1拷贝数增加与CRC风险具有关联。结论 CYP2E1拷贝数增加与中国西南地区人群CRC的发病风险具有显著关联。

PC4基因启动子区多态性与结直肠癌发病风险的关联研究

目的通过对PC4基因启动子区潜在功能性SNP位点与结直肠癌的发病风险的关联分析,探索PC4基因遗传变异作为结直肠癌遗传易感性分子标记的可能性。方法 (1)经生物信息学方法筛选PC4基因启动子区SNP位点;(2)采用探针法和测序法对选定SNP位点进行基因分型后于病例对照研究中作多因素Logistic回归分析。结果 (1)筛选出PC4启动子区7个潜在功能性SNP位点;(2)位点rs116123859 CC+CT基因型(OR=4.89,95%CI=1.29~18.51,P=0.020;OR_(adj)=3.31,95%CI=0.84~13.06,P_(adj)=0.087)和位点rs6891588 AG+GG基因型(OR_(adj)=1.28,95%CI=1.00~1.64,P_(adj)=0.048)与结直肠癌的发病风险有关联,但效应微弱;(3)随个体携带的"风险"倾向基因型的数量增多,结直肠癌风险也有随之增加的趋势(P_(trend)=0.004);(4)单倍型T_C_C_G_G_A_A、T_G_A_G_G_G_A患结直肠癌的风险是其他单倍型的2倍(OR分别为2.67、2.98,95%CI分别为1.78~4.02、1.46~6.04,P值分别为<0.001、0.003)。结论 PC4基因启动区单核苷酸多态性与结直肠癌的风险之间具有显著关联性,提示PC4基因启动子区多态性具有作为结直肠癌遗传易感性分子标记的潜能。