敲除Vanin-1促进肾缺血再灌注损伤后功能恢复的作用及机制

目的探讨血管非炎症分子1(vascular noninflammatory molecule-1,Vanin-1)在缺血再灌注损伤后肾组织的表达水平及其与肾脏功能恢复的关系。方法选取8周龄BALB/c野生型、Vanin-1基因敲除雄鼠,采用完全随机法分为假手术组、缺血再灌注组、敲除组、敲除+缺血再灌注组,每组6只。缺血再灌注组、敲除+缺血再灌注组分离双侧肾蒂后夹闭35 min,后松开夹闭,恢复血流;假手术组、敲除组仅暴露肾蒂,不夹闭。术后0、3、14 d,留取血清、尿液、肾组织标本,检测血清肌酐、尿素氮水平,检测尿液TGF-β水平,PAS染色明确肾组织损伤严重程度,免疫组化检测肾组织Vanin-1表达水平。提取野生型和Vanin-1基因敲除鼠原代肾小管上皮细胞,传代至第2代,设置对照组、对照+损伤组、敲除组、敲除+损伤组,损伤条件为缺氧(1%O2,94%N2,5%CO2,48 h)、复氧(5%CO2,95%空气,24 h),模拟体内缺血再灌注损伤模型,收取肾小管上皮细胞和上清,检测Vanin-1蛋白和上清中TGF-β表达水平。结果缺血再灌注损伤后第3天,与假手术组相比,缺血再灌注组、敲除+缺血再灌注组血清肌酐、尿素氮水平明显升高(P<0.05),PAS染色提示肾组织损伤明显;但缺血再灌注组与敲除+缺血再灌注组小鼠比较,血清肌酐、尿素氮水平无明显差异,PAS染色提示两组肾组织损伤无明显差异。缺血再灌注后第14天,该两组血清肌酐、尿素氮、PAS肾组织损伤均比缺血再灌注后第3天显著恢复,敲除+缺血再灌注组的恢复速度均明显快于缺血再灌注组,PAS肾组织慢性化改变明显轻于缺血再灌注组(P<0.05),且敲除+缺血再灌注组尿中TGF-β水平明显低于缺血再灌注组(P<0.05)。免疫组化结果提示:损伤后第14天,肾组织Vanin-1表达明显升高(P<0.01),且主要表达于受损肾小管上皮细胞。细胞实验结果显示:予以缺氧-复氧损伤后,对照+损伤组肾小管上皮细胞Vanin-1蛋白表达明显升高(P<0.01),上清中TGF-β水平明显高于敲除+损伤组(P<0.05)。结论 Vanin-1可促进缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞TGF-β分泌,延缓肾脏功能恢复,促进急性肾损伤向慢性肾脏病进展。

低谷蛋白大米(W0868)对小鼠营养状况及肾功能的影响

目的研究低谷蛋白大米(W0868)饮食对小鼠营养状况及肾功能的影响。方法雄性6~8周龄C57/BL6雄性小鼠30只,采用随机数字表法分为常规饲料组、正常大米组和低谷蛋白大米组(n=30)。常规饲料组给予常规鼠粮,普通大米组给予普通大米与常规饲料1:1混合的普通米饲料,低谷蛋白大米组给予低谷蛋白大米与常规饲料1:1混合的低谷蛋白米饲料喂养。每只小鼠单独给予自由摄食,每日定时监测摄食量。分别于饮食干预后每间隔1周监测体质量,于第4、8、12周时留取24 h尿,于12周时留取血清和肾组织标本。采用评估营养状况的指标包括体质量、血清学指标(总蛋白、白蛋白、前白蛋白、球蛋白、钙、磷等),肾功能指标包括血肌酐、尿素氮,尿液检测指标包括尿肌酐、尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR)、β-N-乙酰氨基葡糖糖苷(NAG),24 h尿蛋白总量。肾组织病理损伤程度采用PAS染色。结果同一时间点各组每只小鼠的平均摄食量和各组小鼠体质量在饮食干预期间未见明显差异。各组小鼠血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、钙、磷等营养状况指标及肾功能指标于饮食干预12周后未见明显差异。低谷蛋白米组小鼠尿蛋白总量于12周时低于饲料组和普通大米组,尿ACR、NAG水平在4、8、12周时均低于饲料组和普通大米组。各组小鼠肾组织病理学改变未见明显差异。结论低谷蛋白大米(W0868)饮食可以明显降低小鼠尿蛋白水平而保护肾功能,并且对小鼠营养状况无影响。