miR-126调控肺鳞癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨miR-126在调控肺鳞癌细胞SK-MES-1增殖中的作用及机制。方法取10对肺鳞癌组织和癌旁组织,利用q PCR检测各个组织中miR-126的表达水平;合成并将miR-126 mimic和NC转染进入SK-MES-1细胞后,q PCR检测miR-126在上述细胞中的表达,并用MTS检测12、24、48 h时细胞的活力。构建野生型和突变型(nuclear receptor coactivator,NCo A) 7 3’UTR插入p MIR-REPORTTM luciferase vector载体,并将其与pRL-TK质粒共转染进入SK-MES-1细胞,之后分别将等量的miR-126和NC再转染进入SK-MES-1细胞,利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测萤火虫和海肾荧光素酶活性。应用q PCR和western blot检测转染miR-126 mimic后不同时间点NCo A7 mRNA和蛋白以及芳基烃受体核转运子(Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT)蛋白的变化。应用co-IP检测NCo A7与ARNT蛋白的相互作用。转染ARNT siRNA以及NC 48 h后,应用q PCR和western blot检测ARNT mRNA和蛋白的表达,并用MTS评估其对SK-MES-1细胞增殖的抑制作用。结果肺鳞癌组织中miR-126的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。转染miR-126 mimic 12、24和48 h后,SK-MES-1细胞中miR-126的表达水平均显著高于0 h组(P<0.05),而NCo A7 mRNA和蛋白、ARNT蛋白的表达水平显著低于0 h组(P<0.05)。荧光素酶报告基因结果显示野生型NCo A7 3’UTR质粒和miR-126 mimic共转染组的相对荧光素酶活性较野生型NCo A7 3’UTR质粒和NC共转染组明显的降低(P<0.05)。Co-IP的结果显示NCo A7与ARNT蛋白之间有相互作用关系。应用ARNT siRNA转染后较NC组可显著下调ARNT mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),其中S1和S2序列siRNA沉默效果较好。MTS结果显示转染S1和S2后12、24、48 h的细胞增殖水平显著低于NC组(P<0.05)。结论 miR-126在肺鳞癌中的表达水平较低。上调肺鳞癌细胞SK-MES-1中miR-126表达后,通过其下调靶点NCo A7的表达,进而可抑制ARNT介导的细胞增殖。miR-126可作为潜在的治疗肺鳞癌的靶点。

FeNO与诱导痰细胞分类检测的相关性

呼出气一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide,FeNO)检测和诱导痰细胞分类检查作为一种无创性检查方法,越来越多的用于临床,其中FeNO广泛应用于哮喘的诊断、治疗反应的监测以及哮喘患者症状控制情况的评估和急性加重的预测[1-5]。目前FeNO检测在我国临床应用的时间比较晚,且在诊断哮喘的价值中各国研究结果报道亦不一致[6-8]。诱导痰细胞分类计数亦是评价慢性气道炎症疾病的重要检测手段,在早期哮喘、慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary,COPD)的病情判断和疗效监测中都发挥重要作用,特别在嗜酸性粒细胞性支气管炎的诊断中,诱导痰中嗜酸性粒细胞所占比例>3%几乎是该疾病的唯一诊断依据[9-11]。可见,两项检测均在肺部慢性炎症疾病的诊断、治疗和监测中发挥重要价值。FeNO检测和诱导痰细胞分类检查分别与外周血中嗜酸性粒细胞比例具有一定的相关性已有文献报道[12],然而FeNO与诱导痰细胞检测间的相关性如何,目前这方面的研究报道甚少。我们分析了FeNO与诱导痰细胞分类检测结果的相关性,以期为评估慢性气道疾病的诊治和监测提供指导意义。

Rab26对小细胞肺癌H446细胞增殖和迁移的影响

目的探讨Rab26对小细胞肺癌H446细胞增殖和迁移的影响。方法设立Rab26质粒过表达组及Rab26 siRNA组,培养H446细胞,分别将含有Rab26过表达质粒和Rab26 siRNA瞬时转染H446细胞,同时设立空白对照组。48 h后,流式细胞仪检测转染效率,同时检测每组细胞中Rab26在mRNA及蛋白水平表达情况; MTT检测每组细胞的增殖情况,划痕试验观察每组细胞迁移的速度。结果Rab26过表达质粒组转染效率为(76.8±4.3)%,Rab26 siRNA组转染效率为(79.5±3.57)%,均为有效转染;转染48 h后,发现Rab26质粒过表达组中Rab26在mRNA和蛋白水平均较空白对照组表达水平显著上调(P<0.05),siRNA组结果显示Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.05); MTT检测结果显示转染24 h和48 h后,空白对照组细胞活力分别为(56.4±3.23)%、(100±4.31)%; Rab26质粒过表达组细胞活力分别为(42.5±3.59)%、(62. 3±2. 97)%; Rab26 siRNA组细胞活力分别为(75±3. 86)%、(123.4±5.66)%,即Rab26质粒过表达组细胞活力较空白组显著降低(P<0.05),而Rab26 siRNA组细胞活力较空白组显著升高(P<0.05),Rab26可抑制H446细胞的增殖;划痕实验结果显示转染24 h和48 h后,空白对照组细胞迁移率分别为(0.53±0.03)μm/min、(0.32±0.04)μm/min; Rab26质粒过表达组细胞迁移率分别为(0.21±0.04)μm/min、(0.22±0.04)μm/min; Rab26 siRNA组细胞迁移率分别为(0.61±0.02)μm/min、(0.42±0.03)μm/min,即Rab26质粒过表达组细胞迁移率较空白组显著较少(P<0.05),而Rab26 siRNA组细胞迁移率较空白组显著增加(P<0.05),Rab26可抑制H446细胞的迁移。结论 Rab26可抑制小细胞肺癌H446细胞的增殖和迁移,故调控Rab26的表达有望成为小细胞肺癌治疗的新靶点。

术前干预口腔致病菌再分布对降低肺癌术后呼吸机相关性肺炎的临床分析

呼吸机相关性肺炎(ventilator associated pneumonia,VAP)指建立人工气道(气管插管或气管切开)并接受机械通气(mechanical ventilation,MV)时所发生的肺炎,包括发生肺炎48h内曾使用人工气道进行MV者[1]。目前VAP国内发病率在6.0%~52.3%[2]。VAP可分为早发性(MV时间≤4d)、晚发性(MV时间≥5d)两种[3-5]。前者在气管插管患者中极为常见[6]。气管插管时,细菌伴随口咽分泌物同气管导管经声门进入呼吸道,可造成口咽部细菌移位增加VAP发生率[7]。