色氨酸代谢物调控Th17/Treg分化在小鼠哮喘变应原特异性免疫治疗中的作用及机制研究

目的对色氨酸代谢物调控Th17/Treg分化在小鼠哮喘变应原特异性免疫治疗中的作用及机制进行研究。方法将30只BALB/c鼠随机法分为5组:对照组、哮喘组、OVA-SIT组(OVA:鸡卵白蛋白;SIT:变应原特异性免疫治疗)、OVA-SIT+1-MT组(1-MT:IDO抑制剂,1-甲基色氨酸),OVA-SIT+1-MT+KYN组(KYN:色氨酸代谢产物,犬尿氨酸)。哮喘组:第0、7 d予OVA致敏,第6周每天予1%OVA雾化激发,50 d予10%OVA加强激发;OVA-SIT组:第4周每天予大剂量OVA皮下注射,余同哮喘组;OVA-SIT+1-MT组:第4周每天在腹腔内注入1-MT,1 h后予大剂量OVA皮下注射h,余同哮喘组;OVA-SIT+1-MT+KYN组:第3周每天加入1-MT,第4周每天加入KYN,末次加入KYN后1 h予大剂量OVA行免疫治疗,余同哮喘组。末次激发6 h内检测气道高反应性;对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数分析;ELISA检测血清Ig E及BALF中IL-5、IL-10、IL-17;流式细胞技术检测脾脏CD4+RORγt+T及CD4+Foxp3+T细胞分化情况。结果 OVA-SIT+1-MT+KYN组较OVA-SIT+1-MT组酸性粒细胞浸润减少,炎症反应明显减轻。前者BALF中Il-5为74.8~86.8(83.48±6.02)pg/m L,IL-17为33.8~46.5(38.72±4.61)pg/m L,CD4+RORγt+T细胞为2.45~2.82(2.60±0.14)%,CD4+Foxp3+T细胞为7.83~9.09(8.36±0.53)%;后者BALF中Il-5为240.3~285.1(259.65±16.27)pg/m L,IL-17为55.2~65.8(59.97±3.76)pg/m L,CD4+RORγt+T细胞为4.31~5.34(4.94±0.38)%,CD4+Foxp3+T细胞为5.93~6.59(6.33±0.28)%,因此OVA-SIT+1-MT+KYN组中Il-5、IL-17细胞因子以及脾脏中CD4+RORγt+T细胞均明显低于OVA-SIT+1-MT组,差异均有统计学意义(P<0.01),而前组脾脏中CD4+Foxp3+T细胞水平明显高于后者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论色氨酸代谢产物有助于特异性免疫治疗减轻气道炎症作用,其机制与通过调控Th17及Treg分化有关。

吲哚胺2,3双加氧酶与FeNO在儿童过敏性哮喘中的诊断效能

目的评估儿童过敏性哮喘患儿中吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)水平,以及IDO水平与呼出气一氧化氮浓度(fractional exhaled nitric oxide,FeNO)之间的关系。方法选取2015-2016年我院儿科门诊5周岁以上的初次诊断为过敏性哮喘的患儿共33例,并纳入33例同期健康体检的年龄、性别匹配的健康儿童作为对照组;对受试对象进行完整的病史采集、肺功能检查、皮肤点刺试验、嗜酸性粒细胞计数、病情严重程度评分、FeNO测定;留取静脉血和诱导痰液用高效液相色谱法检测IDO代谢产物色氨酸及犬尿氨酸浓度。结果与对照组儿童比较,儿童过敏性哮喘患者外周血及诱导痰液中IDO含量明显降低(P=0.001),与FeNO呈负相关关系(R=-0.564,R=-0.525),与患儿年龄、性别、血嗜酸性计数、严重程度分级等均没有显著相关关系(P>0.05);IDO联合FeNO对预测儿童过敏性哮喘的敏感性(96.7%)和特异性(93.3%)均较两者单用更高。结论 IDO在儿童过敏性哮喘患者中的表达明显降低,特别是在高FeNO水平的患儿中。IDO水平与哮喘严重程度没有显著关系,IDO与FeNO联合检测可作为临床辅助诊断儿童过敏性哮喘的生物学标志。

OVA特异性免疫治疗对哮喘小鼠IL-23/Th17轴的影响及机制研究

目的腹部皮下注射大剂量卵白蛋白(OVA)建立小鼠哮喘免疫治疗模型,探讨IL-23/Th17轴在小鼠哮喘模型经皮免疫治疗过程中的作用。方法选择18只BALB/c小鼠为建模研究对象,按随机数字表法分为3组:空白对照组、哮喘对照组和哮喘免疫治疗组,每组6只小鼠。哮喘免疫治疗组予10μg OVA于0、7 d腹腔注射致敏,21~27 d持续1周予1 mg OVA腹部皮下注射诱导免疫耐受,35~41 d予1%OVA雾化激发;哮喘对照组在21~27 d OVA皮下注射等量生理盐水,其余处置同哮喘免疫治疗组;空白对照组采用等量生理盐水致敏及激发。50 d予10%OVA加强激发1次。末次激发24 h内检测气道反应性;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计数细胞总数及细胞分类计数;ELISA法检测血清OVA特异性Ig E、BALF中IL-5、IFN-γ、IL-23、IL-10的表达;HE染色观察肺组织病理改变;流式细胞仪检测各组脾、肺组织Treg、Th17细胞比例;q-PCR检测肺组织转录因子。结果哮喘免疫治疗组气道反应性、BALF中嗜酸性粒细胞计数、IL-23水平及血清OVA特异性Ig E水平明显低于哮喘对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而BALF中IFN-γ水平与哮喘对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);同时HE染色发现哮喘免疫治疗组肺组织炎症较哮喘对照组明显减轻;流式细胞技术检测发现外周血Treg细胞百分比明显高于哮喘对照组,差异有统计学意义(P<0.05);q-PCR检测肺组织转录因子表明免疫治疗组Foxp3明显高于哮喘对照组,而RORγt明显低于哮喘对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论大剂量OVA特异性免疫治疗能够减轻哮喘小鼠气道慢性炎症反应,同时引起Th17细胞下降伴随IL-23表达降低;其机制可能与纠正肺部IL-23/Th17轴有关。

全胃肠外营养对幼鼠免疫功能和炎症反应的影响

目的探讨全胃肠外营养(total parenteral nutrition,TPN)对幼鼠免疫功能及全身炎症的影响。方法将18只6~8周龄的SD雄性幼鼠分为3组:正常组、对照组和TPN组,每组6只。正常组不予置管,对照组幼鼠行右颈静脉置管后予以生理盐水治疗,对照组和正常组幼鼠均喂食标准鼠粮和水,TPN组幼鼠行右颈静脉置管后予以TPN治疗,并禁食、禁水,14 d后处死幼鼠。采用全自动流式血细胞计数仪检测外周血的血常规,流式细胞术检测脾脏细胞中HLA-DR表达、外周血Treg细胞比例、内毒素诱导单核细胞产生TNF-α的能力、淋巴细胞(CD4^(+)、CD8^(+)T)凋亡以及用植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激后产生IFN-γ的能力,ELISA法检测外周血血浆中IL-1β、TNF-α、IL-10、IL-4水平。结果与正常组及对照组比较,TPN组幼鼠静脉血淋巴细胞数量减少(P<0.05),脾脏细胞HLA-DR表达降低(P<0.05),TPN组幼鼠外周血Treg细胞的比例(8.54±1.20)明显高于正常组(3.02±1.49)及对照组(3.00±0.75)幼鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。TPN组幼鼠经内毒素诱导产生TNF-α的细胞所占比例(8.73±3.11)明显低于正常组(39.07±16.17)及对照组(43.23±18.40),而CD4^(+)T淋巴细胞经PHA刺激后所产生IFN-γ的百分比TPN组(0.65±0.46)明显少于正常组(2.94±1.62)与对照组(2.97±1.39),差异均有统计学意义(P<0.05),TPN组幼鼠淋巴细胞(CD4^(+)、CD8^(+)T)晚期凋亡增多(P<0.05),IL-1β、TNF-α水平增加(P<0.05)而IL-10、IL-4水平降低(P<0.05)。结论持续2周的TPN可导致幼鼠先天性及获得性免疫功能受损,促炎因子增加,尽早开始肠内营养对于减少免疫损伤及全身炎症具有重要意义。

成年烧伤患者静脉血栓栓塞症风险评估量表的编制及信效度检验

目的编制成年烧伤患者静脉血栓栓塞症风险评估量表,并检验其信效度。方法基于文献系统评价、Delphi法及层次分析法构建成年烧伤患者静脉血栓栓塞症风险评估初始量表。采用横断面研究设计,使用该量表和Caprini风险评估模型对陆军军医大学第一附属医院烧伤科2015年1月至2022年12月收治的300例成年烧伤患者进行调查,对量表进行信效度检验和风险分层。结果构建出包含烧伤伤情因素、导管置入情况、手术相关因素等5个维度,23个条目的“成年烧伤患者静脉血栓栓塞症风险评估量表”。探索性因子分析共提取5个公因子,累计方差贡献率为58.959%。量表各维度与总量表相关系数为0.572~0.868(P<0.01),维度间相关系数为0.186~0.545(P<0.01)。量表各条目的内容效度指数为0.857~1.00,全体一致的量表的内容效度指数为0.826,平均量表的内容效度指数为0.980。量表与Caprini风险评估模型的相关系数为0.683(P<0.001)。总量表的Cronbach’sα系数为0.839,ROC曲线下面积为0.840,大于Caprini风险评估模型的ROC曲线下面积0.762。结论构建出成年烧伤患者静脉血栓栓塞症风险评估量表,量表得分35~36分为低风险;37~43分为中风险;≥44分为高风险。