抗间皮素嵌合抗原受体修饰T细胞治疗卵巢癌的实验研究

目的观察抗间皮素(mesothelin,MSLN)嵌合抗原受体修饰的T细胞对卵巢癌细胞的杀伤作用,探索新的卵巢癌治疗手段与策略。方法设计人源化抗人间皮素的嵌合抗原受体融合基因;构建慢病毒表达载体;感染人外周血单核细胞,制备稳定表达抗MSLN嵌合抗原受体的T细胞(chimeric antigen receptor-modified T cells,CART);Western blot、qRT-PCR、流式细胞术检测CAR的表达;免疫组织化学法和Western blot检测卵巢癌样本及细胞系中MSLN表达;体内和体外实验验证CART细胞对卵巢癌细胞的杀伤能力。结果与正常组织相比,卵巢癌组织MSLN表达显著升高(P<0.01);成功制备了抗MSLN-CART细胞;体外实验证明,抗MSLN-CART细胞能够特异性识别和杀伤MSLN阳性的卵巢癌细胞,效靶比为2^(-4)∶1时,MSLN-CART杀伤率仍达到80%;NOD/SCID小鼠卵巢癌原位移植瘤模型证明,经尾静脉回输抗MSLN-CART细胞(1×10~7/只,共2次),原位移植瘤消失。结论抗MSLN-CART细胞能有效、特异且安全地杀伤卵巢癌细胞,抑制肿瘤的生长。

急性髓系白血病干细胞源性巨噬样细胞生物学特性的研究

目的探讨急性髓系白血病干细胞(acute myeloid leukemia stem cells,AML LSCs)分化成AML LSCs源性巨噬样细胞的生物学现象、生物学特点及潜在的病理学意义。方法分选AML细胞系Kasumi-3中AML LSCs,在巨噬细胞条件培养基中培养14 d,从形态学、免疫表型、分泌细胞因子、吞噬功能等角度鉴定获得的贴壁细胞,明确AML LSCs源性巨噬样细胞的基本生物学特点。检测与AML LSCs源性巨噬样细胞共培养的Kasumi-3细胞表面耐药蛋白水平、胞内化疗药物浓度和对柔红霉素(DNR)的摄药量,初步评价AML LSCs源性巨噬样细胞促进白血病耐药的作用及可能机制。结果培养获得的AML LSCs源性巨噬样细胞呈多形性,以多角形和椭圆形贴壁细胞为主,透射电镜观察发现细胞呈椭圆形,胞浆丰富,有较多空泡;近胞核处高尔基体富集;包膜绒毛丰富且较长。AML LSCs源性巨噬样细胞特异性表达CD11b、CD163、CD206,分泌一定水平IL-10和IL-13。细菌吞噬实验证明其可吞噬大量呈绿色杆状荧光的E.coli菌,随着孵育时间的延长,吞噬数量逐渐增多。激光共聚焦显微镜观察发现与AML LSCs源性巨噬样细胞共培养的Kasumi-3细胞表面ABC转运蛋白表达明显强于对照组,DNR摄药量低于悬浮培养Kasumi-3细胞(54.75±4.28 vs 93.84±3.93,P<0.01),对DNR、阿霉素(ADM)、阿糖胞苷(Ara-C)和足叶乙甙(VP-16)均有一定的耐药性。结论 AML LSCs在特定条件下可以分化成为AML LSCs源性巨噬样细胞,后者有类似巨噬细胞的生物学特性,参与白血病耐药的形成。

C型尼曼-匹克蛋白2在胃癌组织中的表达及其功能初步研究

目的观察C型尼曼-匹克蛋白2(Niemann-Pick protein C2,NPC2)在胃癌中的表达情况,分析其预后意义,初步探讨NPC2对胃癌的调控作用。方法利用胃癌数据库和组织芯片,比较NPC2在胃癌与正常胃黏膜中的表达差异;列联表分析NPC2表达与胃癌患者临床病理参数的相关性;Kaplan-Meier分析和COX回归分析NPC2表达在胃癌中的预后判断意义;通过GSEA挖掘NPC2调控胃癌细胞的可能分子机制;利用Transwell试验检测下调NPC2后胃癌细胞迁移能力的变化。结果相较于正常胃黏膜,NPC2在胃癌中高表达[GSE33335:(7.917±0.077)vs(7.601±0.074),P=0.0096;GSE63089:(9.083±0.123)vs(8.435±0.148),P=0.0001;组织芯片:(4.596±0.230)vs(3.336±0.176),P<0.0001];其表达水平与胃癌患者的AJCC临床分期(GSE15459:P=0.009;组织芯片:P=0.04)、区域淋巴结转移(组织芯片:P=0.04)等临床病理参数相关;NPC2高表达者预后不良(TCGA:P<0.0001;GSE15459:P=0.0023;组织芯片:P=0.0032),其表达水平是胃癌的独立预后预测因素(TCGA:风险比为2.140,95%CI为1.523~3.006,P<0.0001;组织芯片:风险比为1.926,95%CI为1.108~3.348,P=0.02);细胞黏附分子相关基因在NPC2高表达胃癌中显著富集,提示其或与胃癌细胞的侵袭迁移相关;下调胃癌细胞中的NPC2表达后,显著抑制其迁移能力(NC组vs si-1组:P=0.00004;NC组vs si-2组:P=0.000449)。结论NPC2表达与胃癌患者预后密切相关,并在细胞迁移中发挥重要调控作用,可作为胃癌的潜在诊疗靶标。

成人型弥漫性胶质瘤术前MRI增强等级影响IDH突变和WHO分级

目的分析成人型弥漫性胶质瘤的临床特征和磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)特征,定义成人型弥漫性胶质瘤术前MRI增强等级(ET等级),并探究ET等级与异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)突变和WHO分级之间的关系。方法回顾性分析2018年1月至2023年12月我院经手术病理证实的306例成人型弥漫性胶质瘤患者的临床数据,其中IDH突变型169例,IDH野生型137例。分析两种IDH状态患者性别、年龄、MRI信号是否均匀、肿瘤边界是否清晰、水肿是否明显、邻近脑室受压情况和ET等级方面的差异,建立logistic回归模型,找出影响IDH突变的独立影响因素,并分析ET等级与IDH状态和WHO分级之间的相关性。结果IDH不同状态患者在年龄、MRI信号是否均匀、肿瘤边界是否清晰、水肿是否明显、邻近脑室受压情况和ET等级方面的差异具有统计学意义。通过Forward法筛选自变量纳入Logistic回归模型,ET等级、年龄和边界是IDH突变状态的独立影响因素,并且与IDH突变呈负相关。年龄每增加1岁,IDH突变型成人型弥漫性胶质瘤的概率减少0.93倍。建立的回归模型预测IDH状态的准确性为0.859,敏感度为0.852,特异度为0.869,AUC为0.922(0.892~0.952)。ET等级与WHO分级显著相关,在WHO 2级脑胶质瘤患者中占比最突出的是noET,在WHO 3级脑胶质瘤患者中占比最突出的是ET2,在WHO 4级脑胶质瘤患者中占比最突出的是ET3。结论成人型弥漫性胶质瘤患者术前MRI的ET等级与IDH突变状态呈负相关,与WHO分级呈正相关,ET等级有助于IDH突变状态和WHO分级的判定。

FOLR1与MSLN蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的研究FOLR1(folate receptor 1)和MSLN(mesothelin)在上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer, EOC)中的表达和临床意义。方法获取GEO、TCGA数据库(Ovarian Cancer TCGA, Provisional;GSE6008;GSE66957;GSE49997)EOC临床样本信息和转录组测序表达矩阵;分析不同组织的表达情况及其与肿瘤的分期、预后的关系;收集本院2018-2019年EOC(105例)、卵巢交界性肿瘤(11例)、正常卵巢组织(30例);免疫组化法检测FOLR1和MSLN表达情况与卵巢癌患者临床病理特征间的关系。结果 GEO、TCGA数据库分析显示:EOC组织中FOLR1和MSLN mRNA表达量明显高于正常组织(P<0.05),Ⅲ~Ⅳ期病人表达量明显高于Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌(P<0.05),生存分析显示FOLR1高表达的患者预后好(总体生存期:P<0.05;无病生存期:P<0.05),MSLN高表达患者预后差(总体生存期:P<0.05;无病生存期:P<0.05)。146例卵巢组织免疫组化分析显示:FOLR1和MSLN蛋白在正常卵巢组织中低表达,交界性卵巢肿瘤组织中表达上升,在EOC组织中表达明显升高,阳性表达率分别为80.95%、53.33%。不同组织类型的表达具有统计学差异(P<0.001);Ⅲ~Ⅳ期病人阳性率明显高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05);淋巴结转移的患者MSLN的阳性率明显升高(P<0.05)。TCGA数据库亚组生存分析显示在mRNA水平MSLN低表达和FOLR1高表达的患者(M^LF^H)预后最好,MSLN高表达和FOLR1低表达的患者(M^HF^L)预后最差(中位生存期70.57 vs 25.85个月,P<0.000 1)。相比于M^LF^L组,M^HF^L组早期(<50个月)预后较好,而超过50个月则生存率明显下降,但此种差异无统计学意义。结论 FOLR1高表达的EOC患者预后好,MSLN高表达的患者预后差。两种蛋白可能共同参与了EOC的进程,联合检测FOLR1和MSLN两种蛋白的表达,有助于EOC的预后判断。

人乙醛脱氢酶家族1成员A3调控胰腺癌细胞的侵袭能力

目的探讨人乙醛脱氢酶家族1成员A3(aldehyde dehydrogenase 1 family member A3,ALDH1A3)在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达情况,并研究其对胰腺癌侵袭的调控及可能的机制。方法利用癌症和肿瘤基因图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中胰腺癌患者数据集、基因组织表达项目(Genotype-Tissue Expression Project,GTEx)中正常胰腺组织基因表达谱数据和肿瘤细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)数据库中胰腺癌细胞系的基因表达谱矩阵,分析ALDH家族各亚型的表达情况;Transwell实验检测敲低ALDH1A3对胰腺癌细胞侵袭能力的影响;基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探讨ALDH1A3与JAK/STAT3通路活化的关系。结果 ALDH1A3在胰腺癌组织中的表达高于正常胰腺组织;在胰腺癌细胞系中的表达高于其他ALDH亚型;下调ALDH1A3可以降低胰腺癌细胞系的侵袭能力;JAK/STAT3通路在ALDH1A3高表达胰腺癌患者中显著富集;下调ALDH1A3可抑制STAT3的磷酸化。结论 ALDH1A3参与调控胰腺癌细胞的侵袭,其机制可能与JAK/STAT3通路的活化有关。

乙醛脱氢酶家族18成员A1对结直肠癌预后的判断意义及其对骨髓细胞瘤原癌基因表达的影响

目的观察乙醛脱氢酶家族18成员A1[aldehyde dehydrogenase family 18 member A1,ALDH18A1,又称为吡咯啉-5-羧酸合成酶(pyrroline-5-carboxylate synthetase,P5CS)]在结直肠癌的表达及预后判断意义,探讨ALDH18A1与骨髓细胞瘤原癌基因(myelocytomatosis oncogene,MYC)的相关性及对其表达的影响。方法利用肿瘤基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO),比较ALDH18A1在人结直肠癌和正常结肠组织的表达,列联表分析ALDH18A1与临床病理参数的相关性,Kaplan-Meier及Cox回归分析ALDH18A1的预后判断意义;四唑化合物(methyl-thiazolyldiphenyl-sulfophenyl-tetrazolium bromide,MTS)检测下调ALDH18A1表达对结直肠癌细胞增殖的影响;分析ALDH18A1与MYC基因表达的相关性; Real-time PCR和Western blot检测敲低ALDH18A1后MYC基因的表达,基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探讨ALDH18A1与MYC下游靶基因活化的关系。结果 ALDH18A1在结直肠癌组织高表达,与其临床病理参数及预后相关(风险比为1. 996,95%置信区间为1. 012～3. 939,P=0. 046);下调ALDH18A1表达抑制结直肠癌细胞增殖; ALDH18A1与MYC表达正相关;下调ALDH18A1抑制MYC基因表达;ALDH18A1高表达患者中,c-MYC靶基因显著富集。结论 ALDH18A1可作为结直肠癌患者的预后判断因子,并可能通过调控MYC基因表达而抑制结直肠癌细胞的增殖。

艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶与结直肠癌转移及预后的关系

目的寻找与结直肠癌转移相关并具有预后预测意义的溶酶体分子。方法获取TCGA数据库结直肠癌数据集(Colon Adenocarcinoma TCGA-632)结直肠癌临床样本信息和基因转录组测序表达矩阵;通过基于LASSO(least absolute shrinkage and selection operator)算法的Logistic回归筛选与远处转移相关的溶酶体基因;进一步利用基于LASSO算法的COX回归模型,筛选与结直肠癌患者预后相关的基因,并选择回归系数最大的艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(iduronic acid-2-sulfatase,IDS)进行研究;收集本院2007-2008年50例结直肠癌患者肿瘤组织标本进行免疫组织化学染色,分析组织中IDS表达量与转移及预后的关系。结果 TCGA数据库分析显示:发生淋巴结转移的结直肠癌患者IDS mRNA相对表达量高于无淋巴结转移的患者(N0vsN1-2:-0.103±0.073 vs 0.303±0.123,P=0.003);发生远处转移的结直肠癌患者IDS mRNA相对表达量高于无远处转移的患者(M0vsM1:0.017±0.071 vs 0.636±0.296,P=0.003);IDS高表达患者的预后较低表达患者不良(总体生存期:P=0.008;无病生存期:P=0.007);COX回归分析显示:IDS mRNA高表达是结直肠癌患者预后不良的独立预测因素(P=0.014,风险系数为2.651,95%CI:1.217~5.775);50例结直肠癌组织免疫组化分析显示:发生淋巴结转移的结直肠癌患者IDS mRNA相对表达量高于无淋巴结转移的患者(N0vs N1-3:27.324±0.698 vs 40.674±3.528,P=3.0×10^-5);发生远处转移的结直肠癌患者IDS mRNA相对表达量高于无远处转移的患者(M0vs M1:27.941±0.952 vs 39.320±3.467,P=1.2×10^-5);IDS高表达患者预后不良(P=7.2×10^-5);COX回归分析显示:IDS高表达是预后不良的独立预测因素(P=0.008,风险系数为5.847,95%CI:1.585~21.568)。结论 IDS高表达的结直肠癌患者转移发生率高、预后差,IDS可作为结直肠癌患者独立预后预测因子。

纪念孔祥复院士

孔祥复(Hsiang-fu Kung)教授,著名分子生物学家和分子肿瘤学家,中国科学院院士,陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军临床病理学研究所终身教授、西南癌症中心名誉主任、肿瘤免疫病理学教育部重点实验室学术委员会副主任委员,博士生导师,重庆市首席医学专家。孔先生原籍湖北省阳新县,1942年出生于重伕市合川区,后迁居台湾。1963年毕业于台湾中兴大学生物化学专业,1969年毕业于美国Vanderbilt大学医学院并获博士学位。