右美托咪定抑制小胶质细胞活化发挥脑保护作用的实验研究

目的探讨右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对局灶性脑缺血再灌注(ischemiareperfusion,I/R)损伤的保护作用及其机制。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。取60只SD雄性大鼠按随机数字表法分为3组(n=20):Sham组、I/R组和Dex+I/R组。各组评估神经功能情况,检测梗死侧大脑皮层病理改变、半暗带神经细胞凋亡率、小胶质细胞活化率及皮层匀浆TNF-α水平。建立小胶质细胞氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型。将培养的BV2小胶质细胞分为Control组、OGD/R组和1μmol/L Dex+OGD/R组、10μmol/L Dex+OGD/R组。检测细胞上清液TNF-α浓度,及细胞内CD68、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达情况。结果与I/R组比较,Dex+I/R组神经功能评分降低(P <0. 05),大脑皮层病理损伤减轻,半暗带神经细胞凋亡率降低(P <0. 05),小胶质细胞活化率降低(P <0. 05),大脑皮层匀浆TNF-α浓度降低(P <0. 05)。与OGD/R组比较,1μmol/L Dex+OGD/R组、10μmol/L Dex+OGD/R组细胞上清液TNF-α浓度降低(P <0. 05),10μmol/L Dex+OGD/R组细胞内CD68、p-NF-κB p65表达减少(P <0. 05)。结论右美托咪定通过抑制小胶质细胞活化减轻脑缺血再灌注损伤发挥脑保护作用,可能与其抑制小胶质细胞NF-κB通路有关。

CD151通过上皮间质转化及干性相关通路调控非小细胞肺癌脑转移的机制研究

目的探讨四跨膜蛋白CD151在肺癌脑转移中的预测作用及相关分子通路机制。方法收集2010年12月至2015年6月本中心160例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者临床资料,其中脑转移患者88例,无脑转移患者72例,采用免疫组织化学方法检测CD151在肺癌组织的表达,并运用Spearman分析CD151表达与脑转移相关性。再选择人NSCLC细胞株HCC827,应用siRNA干扰、Western blot、划痕和Transwell实验检测敲低CD151表达对细胞增殖、迁移状况以及上皮间质转化(EMT)、干性通路相关蛋白表达的影响。结果相对于无脑转移患者,NSCLC脑转移患者肺癌组织CD151表达显著增加(P=0.012),Spearman分析表明CD151高表达与脑转移呈正相关(r=0.478,P=0.004)。通过siRNA敲低CD151可上调Ecadherin表达,并下调Vimentin、SOX2、CD44和CD133表达,同时降低HCC827细胞增殖(P=0.026)与迁移能力(P=0.032)。结论 CD151可能通过调控EMT、干性通路相关蛋白表达影响NSCLC细胞的增殖、迁移,CD151可能是NSCLC脑转移的潜在预测因子。

特发性弱精子症精浆蛋白差异表达研究

目的探讨精浆蛋白在成年男性特发性弱精子症中的差异表达情况。方法纳入2017年1-5月我院泌尿外科门诊特发性弱精子症患者15例作为试验组,年龄24~47岁。同时,纳入精液正常成年男性15例作为对照组,年龄21~44岁。用等重同位素多标签相对定量蛋白质组学(isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)的方法研究成年男性正常精浆蛋白以及特发性弱精子症患者的精浆蛋白表达情况。结果共发现精浆中2 784个蛋白质。其中,与正常组相比,特发性弱精子症患者精浆中表达上调蛋白数为14个,精浆中表达下调蛋白数为79个(表达差异倍数>1.2倍,且P<0.05)。经斑点印迹技术验证蛋白INF2表达水平与iTRAQ结果一致。经GO(gene ontology)蛋白功能注释及富集分析,特发性弱精子症精浆中差异蛋白功能主要包括调节钙离子跨膜转运、胞浆内转运以及螯合、蝶呤钼辅因子合成及代谢、调节铜离子跨膜转运等。经KEGG蛋白通路注释及富集分析,特发性弱精子症精浆中差异蛋白主要富集于叶酸生物合成、金黄色葡萄球菌感染等通路。结论特发性弱精子症患者精浆蛋白同正常成年男性精浆蛋白存在差异,其可能是引起特发性弱精子症的原因。

盐阈值与冠心病病变严重程度的相关性研究

目的研究盐阈值与冠心病病变严重程度之间的相关性。方法采用横断面设计,将2017年10月至2018年1月大坪医院心内科经冠状动脉造影确诊的198例冠心病患者作为冠心病组,选择性别和年龄与冠心病组患者相匹配的193例冠状动脉造影结果未达到美国心脏协会冠心病诊断标准的患者作为对照组。根据冠脉病变支数将冠心病组进一步分为单支、双支和三支病变组,根据Gensini积分评估冠脉病变严重程度。应用Na Cl溶液测定患者的盐阈值。比较各组患者盐阈值的差异,分析盐阈值与冠心病病变严重程度之间的相关性。结果冠心病组盐阈值显著高于对照组[(0.75±0.21)%vs(0.59±0.18)%,P<0.05],且随着冠状动脉病变支数的增加,盐阈值显著升高。Logistic回归模型控制冠心病的传统危险因素后发现盐阈值升高的患者冠心病风险增高(OR=3.012,P<0.05)。冠心病组中,盐阈值与冠脉病变严重程度(Gensini积分)成正相关(r=0.623,P<0.01)。结论盐阈值升高是冠心病的风险因素,且盐阈值水平与冠脉病变严重程度呈正相关关系。

G250纳米抗体靶向的载药纳米微泡抑制肾癌细胞生长的实验研究

目的制备G250纳米抗体靶向的携载替西罗莫司的脂质纳米微泡(G250-TEM-NBs),并联合超声靶向纳米微泡破坏(ultrasound targeted nano-bubble destruction,UTMD)辅助药物递送系统实现对肾癌细胞生长的抑制。方法采用水化薄膜法,联合机械震荡和静电作用制备G250-TEM-NBs,检测其粒径、ζ电位、包封率和载药效率。体外观察G250-TEM-NBs靶向结合肾癌786-O细胞的能力,通过CCK-8和TUNEL测量G250-TEM-NBs联合UTMD抗肿瘤细胞增殖诱导凋亡效果。结果 G250-TEMNBs平均粒径和ζ电位分别为(399. 67±31. 01) nm和(-23. 33±2. 62) m V,G250-TEM-NBs与肾癌786-O细胞的亲和力明显高于TEM-NBs(P <0. 05),G250-TEM-NBs联合UTMD抗肿瘤细胞增殖能力及诱导肿瘤细胞凋亡作用最强。结论 G250-TEM-NBs联合UTMD能显著抑制肾癌细胞生长,为肾癌靶向治疗提供了一种有效的新方法。

Hsa_circ_0000711在人肝癌细胞系中的功能研究

目的研究环状RNA hsa_circ_0000711在人肝癌细胞系中的表达以及对肝癌细胞生物学功能的影响。方法利用RT-qPCR检测环状RNA hsa_circ_0000711在肝癌细胞系的表达;通过小干扰RNA特异性敲低hsa_circ_0000711的表达;通过CCK-8实验检测肝癌细胞系的增殖情况;利用流式细胞技术检测细胞周期及细胞凋亡。Western blot检测下调hsa_circ_0000711后Cyclin D1、CDK4、cleavaed Caspase 3及Bcl-2蛋白的表达水平。结果 Hsa_circ_0000711在肝癌细胞HepG2和SMMC-7721中明显高表达(P<0.05)。与对照组相比,hsa_circ_0000711干扰组的肝癌细胞增殖能力显著降低(P<0.05),处于G_1期细胞增多(P<0.05),且凋亡细胞显著增加(P<0.05)。干扰hsa_circ_0000711的表达后,肝癌细胞中Cyclin D1、CDK4和Bcl-2的蛋白表达量显著降低(P<0.05),cleavaed Caspase 3蛋白表达量显著升高(P<0.05)。结论 Hsa_circ_0000711可能通过调控细胞周期及凋亡影响肝癌细胞的增殖。

p75NTR在大鼠外胚间充质干细胞不同融合状态中的表达差异与矿化相关性研究

目的探讨不同融合状态对p75 neurotrophin receptor(p75 NTR)在外胚间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs)中的表达影响。方法用酶消化法获取SD大鼠胚胎12.5 d(E12.5d)EMSCs,以不同细胞密度铺板,贴壁后即获得4种融合状态:半融合状态(1.0×10~4/cm^2)、融合前状态(1.5×10~4/cm^2)、融合状态(2.5×10~4/cm^2)、融合后状态(3.5×10~4/cm^2)。检测4种融合状态细胞矿化诱导前后p75NTR、Runt相关转录因子2(Runx2)和碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原蛋白(Col1)在mRNA水平和蛋白水平的表达,茜素红染色检测钙盐沉积情况。结果矿化诱导0 d时,p75NTR mRNA和蛋白在融合状态组表达最高,Runx2、ALP、Col1在4种融合状态表达水平无明显差异。矿化诱导3、7 d时,融合状态组p75NTR、Runx2、ALP mRNA表达水平均显著高于其他3组(P<0.05);同时融合状态组p75NTR、Runx2、Col1蛋白表达水平最高,差异具有统计学意义(P<0.05)。矿化诱导21 d时,融合状态组钙盐沉积量高于其他3组(P<0.01)。结论不同融合状态p75NTR表达差异显著,在融合状态组p75NTR表达最高,此时细胞矿化能力最强,表明p75NTR的表达与矿化呈正相关。

胸椎旁阻滞-丙泊酚复合全麻对肺癌手术患者血清VEGF-C、TGF-β1的影响

目的比较胸椎旁神经阻滞-丙泊酚静脉复合全麻(paravertebral nerve block-propofol intravenous balance general anesthesia,PPA)和七氟醚吸入复合全麻(sevoflurane inhalation balanced general anesthesia,SGA)对肺癌根治术患者血清VEGF-C、TGF-β1表达的影响。方法将肺癌根治术患者分成PPA组(n=23)和SGA组(n=23)。PPA组全麻诱导前行胸椎旁神经阻滞,给予0. 5%罗哌卡因(2 mg/kg),术中靶控输注丙泊酚(血浆浓度2. 6～3. 2μg/m L)和瑞芬太尼维持;SGA组术中予以七氟醚(1. 0～1. 5倍最低有效肺泡浓度)和瑞芬太尼维持。观察两组患者术中和术后24 h阿片类药物用量,术后2、8、24、48、72 h疼痛评分,以及术前和术后24 h血清VEGF-C、TGF-β1浓度。结果 PPA组术中瑞芬太尼使用量显著少于SGA组(P <0. 01),术后24 h舒芬太尼使用量显著少于SGA组(P <0. 01),术后2、8、24 h VAS评分显著低于SGA组(P <0. 01)。术后24 h血清VEGF-C浓度PPA组明显低于SGA组[(629±203) vs (908±222) pg/m L,P=0. 030],血清TGF-β1浓度PPA组也明显低于SGA组[(8. 37±2. 84) vs (10. 57±2. 47) ng/m L,P=0. 021]。结论胸椎旁神经阻滞-丙泊酚静脉复合全麻能降低肺癌根治术患者阿片类药物用量,改善其术后镇痛效果,降低其术后血清中肿瘤血管生成相关因子浓度。

639例胃内胆汁反流与禁食时间相关性的临床观察

目的观察胃镜检查时胃内胆汁反流与禁食时间的关系,探讨胃镜下诊断病理性胆汁反流的最佳禁食时间。方法将2016年1~6月我院因上消化道症状就诊的639例患者纳入本研究,根据胃镜检查前禁食时间长短分为上午组(禁食12~17 h)和下午组(禁食18~24 h)。比较2组患者胃内胆汁反流程度与禁食时间的关系,根据胆汁反流指数(bile reflux index,BRI)及胃内胆汁反流严重程度判断是否为病理性反流,探讨胃镜检查诊断胆汁反流性胃炎的合理禁食时间。结果纳入639例患者,其中上午组55例(16.98%,55/324)、下午组75例(23.81%,75/315)发生胆汁反流。下午组Ⅰ级胆汁反流发生例数显著高于上午组(50例vs 27例,χ~2=8.823,P=0.003),2组间Ⅱ级及Ⅲ级反流人数差异无统计学意义(Ⅱ级χ~2=0.02,P=0.89;Ⅲ级χ~2=0.07,P=0.89)。上午组有35例BRI≥14,下午组有29例BRI≥14。结合内镜下胆汁反流分级及BRI值,上午组确定为病理性胆汁反流人数显著高于下午组(χ~2=7.915,P=0.005)。根据BRI值,上午组发生反流患者中Ⅰ级有20例为生理性,7例为病理性,Ⅱ级和Ⅲ级则全部为病理性;下午组Ⅰ级中有45例为生理性反流,5例为病理性反流,Ⅱ级中有1例为生理性反流,16例为病理性反流,Ⅲ级则全部为病理性反流。下午组发生生理性胆汁反流人数多于上午组(χ~2=7.915,P=0.005)。自禁食12 h起,按照每小时出现胆汁反流人数分组,结合BRI值鉴别生理性和病理性胆汁反流,患者禁食时间过长(下午组)被误诊为病理性胆汁反流可能性更大。结论患者禁食时间过长易被误诊为病理性胆汁反流,内镜检查时间在禁食12~14 h内完成最为合适。

多重耐药铜绿假单胞菌的两种同源性分析方法的比较

目的以脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)为金标准,评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)在多重耐药铜绿假单胞菌(multi-drug resistant Pseudomonas aeruginosa,MDR-PA)同源性分析中应用的可行性。方法收集陆军军医大学第三附属医院2017年1-12月重症监护病房住院患者分离的20株MDR-PA非重复菌株,利用VITEK MS SARAMIS软件对MDR-PA蛋白图谱进行聚类分析,同时对其进行PFGE同源性分析,并将两种方法所得的分型结果进行对比分析。结果 MALDITOF MS同源性分析结果与PFGE同源性分析结果比较显示,20株MDR-PA通过MALDI-TOF MS聚类分析将其分为三大簇(Ⅰ型13株,Ⅱ型6株,Ⅲ型1株),而依据PFGE分型结果则将其分为6种亚型(A型2株,B型3株,C型4株,D型3株,E型7株,F型1株),其中有C型和E型中具有相同基因型菌株间,其MALDI-TOF MS亲缘性关系也较近,而其余4种亚型菌株间亲缘性比较,发现PFGE分型结果与MALDI-TOF MS聚类分析结果不完全相符。结论与PFGE同源性分析相比,MALDI-TOF MS同源性分析结果一致性不稳定,具有一定局限性,尚不能取代PFGE同源性分析。

妊娠期肝内胆汁淤积症总胆汁酸水平及终止妊娠时间与围产儿结局的关系

目的探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis pregnancy,ICP)不同血清总胆汁酸(total bile acid,TBA)水平及不同终止妊娠时间对围产儿结局的影响。方法回顾性分析2013年3月至2017年6月我院住院分娩的198例ICP孕妇,根据血TBA水平分为10~<40μmol/L组(Ⅰ组)、40~<100μmol/L组(Ⅱ组)以及≥100μmol/L组(Ⅲ组),又根据终止妊娠孕周分为<36周组(A组)、36~36+6周组(B组)以及≥37周组(C组),统计各组围产儿不良结局发生情况。结果与ⅠB组及ⅠC组相比,ⅠA组的围产儿不良结局显著增高(P<0.05);与ⅠC组相比,ⅠB组低体质量儿发生率显著增高(P<0.05),NICU入住和近期并发症发生率低,但差异无统计学意义(P>0.05);与ⅡB组及ⅡC组比较,ⅡA组的围产儿不良结局显著增高(P<0.05);与ⅡC组相比,ⅡB组低体重儿及近期并发症发生率高,但差异无统计学意义(P>0.05),两组新生儿均未入住NICU。Ⅲ组发病孕周均早于34周,终止妊娠孕周<36者,围产儿不良结局发生率高。结论当血TBA在10~<40μmol/L时妊娠满37周终止妊娠有利于降低围产儿不良结局发生率;当TBA在40~<100μmol/L时,妊娠36周终止妊娠是降低围产儿不良结局的节点;当TBA≥100μmol/L应根据胎儿成熟度斟酌利弊终止妊娠。

Musculin KO-Foxp3-GFPKI小鼠模型的制备及在严重创伤介导Treg-Th17失衡中的初步应用

目的制备转录因子Musculin(MSC)敲除(knockout,KO)-叉状头转录因子家族成员3(forkhead box P3,Foxp3)-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)敲入(knockin,KI)小鼠模型,并初步应用于严重创伤介导调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)-Th17失衡研究。方法通过MSCKO纯合子(homozygote,-/-)小鼠和Foxp3-GFPKI纯合子(homozygote,+/+)小鼠杂交,获取MSCKO(heterozygote,+/-)-Foxp3-GFPKI(+/-)杂合子小鼠,再按同笼兄妹近亲繁殖方法进行杂合子配对,直到获取MSCKO-Foxp3-GFPKI纯合子小鼠。将获得MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠连续交配5代以上,观察各代小鼠的基因型、表现型和遗传稳定性。对获取的MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠和Foxp3-GFPKI小鼠实施失血/骨折,3 h后取周围淋巴结(lymph nodes,LN)、肠系膜淋巴结(mesenteric lymph nodes,MLN)、肠道集合淋巴结(Peyer’s patches,PP)、脾(spleen,SP)、骨髓(bone marrow,BM)和胸腺(thymus,Thy)。流式细胞术检测机体免疫器官和组织Treg的分布变化,qPCR检测MSC、Foxp3、孤核受体-γt(orphan nuclear receptor-γt,ROR-γt)的表达水平,进一步验证MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠的实用性,并初步探讨MSC对严重创伤介导Treg-Th17失衡的影响。结果杂交获得的各代MSCKO-Foxp3-GFPKI纯合子小鼠均能表达各分子标志物,活力、体质量和繁育能力正常。流式细胞术检测结果显示,各免疫器官和组织中均存在不同强度的GFP信号;严重创伤3 h后,MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠Treg在LN、MLN、PP和SP中的百分比分别为5.81%、4.81%、1.41%和3.1%,较创伤前差异有统计学意义。qPCR检测结果显示,相对正常组而言,野生型创伤组MSC在外周淋巴器官MLN(6.154 9)和PP(7.789 7)中的相对表达量显著升高(P<0.05,P<0.01);Foxp3在MSCKO创伤组MLN(2.591 2)和PP(1.506 4)中的相对表达量上升(P<0.01),表明MSC缺失可使创伤后Treg-Th17平衡左移;而ROR-γt在同组MLN(0.5395)和PP(0.544 9)中的相对表达量下降(P<0.01),同样证实了Treg-Th17平衡发生了偏移。结论成功制备MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠,遗传性状稳定,分子标志物和表现型明确。严重创伤后MSC可以影响Treg的分布,并使Treg-Th17平衡发生偏移,提示MSC可能作为严重创伤后恢复机体内环境免疫稳态的潜在调节靶点。

新型血红蛋白代用品对创伤失血性休克大鼠重要器官功能的保护作用

目的观察一种新型血红蛋白代用品,产品代号YQ,对非控失血性休克大鼠重要器官的保护作用。方法 1 00只SD大鼠[雌雄各半,12周龄,体质量(220±20) g]随机分为(n=20):0. 5%YQ组、2%YQ组、5%YQ组、乳酸林格氏液(lactate Ringer,LR)对照组和全血组。采用切断脾动脉分支方法构建非控失血性休克模型,观察不同浓度YQ在不同复苏阶段(复苏血压维持50、70、80 mmHg,复苏后1、2h等)对重要脏器(肝、肾)血流量、组织氧分压、器官功能及血气的影响。结果在不同复苏阶段,与LR对照组比较:①3个YQ浓度均可增加大鼠的PaO_2和SaO_2。复苏2 h后2%YQ[(98.8±15. 9) mmHg]和5%YQ组[(98.6±14. 1) mmHg]对PaO_2的作用明显优于LR对照组[(68.6±5.6)mmHg](P <0.01);2%YQ[(92.1±2.5)mmHg]和5%YQ组[(93.6±2.4) mmHg]对SaO_2的作用明显优于LR对照组[(70. 6±8.5) mmHg](P <0.01),接近全血[(94. 3±3. 3) mmHg]。②3个YQ浓度均可增加经皮氧分压,其中5%YQ组效果最好,复苏2 h后其作用[(80.4±5. 9) mmHg]接近全血组[(80.0±7.3) mmHg],与LR对照组比较[(59.1±1.6) mmHg],有显著性差异(P<0.01)。③3个YQ浓度均可增加大鼠的肝肾血流量,其中5%YQ组效果最好,复苏2 h后其作用[肝:(218. 7±13. 8) U/min;肾:(187.4±10.9) U/min]接近全血组[肝:(220.4±18.2) U/min;肾:(179.2±16.3) U/min],明显优于LR对照组[肝:(171.4±20.4) U/min;肾:(169.4±4.7) U/min]。④3个YQ浓度组均可降低大鼠AST、ALT、BUN和Crea水平。与LR对照组比较[AST:(209.6±15.6) U/L;ALT:(54.9±3.6) U/L;BUN:(10.8±2.5) mmol/L;Crea:(47. 7±4. 4)μmol/L],复苏2 h后5%YQ组的肝肾功能[AST:(149.8±13.7)U/L;ALT:(45.9±4.2) U/L;BUN:(9.7±1.8) mmol/L;Crea:(25.8±2. 1)μmol/L]明显减低。结论 YQ通过改善肝、肾器官功能从而发挥对非控制失血性休克大鼠的保护作用。

大胞饮途径介导血管平滑肌细胞内脂滴聚集

目的探讨大胞饮途径是否介导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)内脂滴聚集。方法组织块贴壁培养法培养VSMCs;免疫荧光染色鉴定原代VSMCs;天然低密度脂蛋白(nLDL,50、200、800μg/mL)及脂多糖(LPS,200 ng/mL)刺激培养VSMCs,构建泡沫细胞模型;流式细胞术检测VSMCs对大胞饮示踪剂Lucifer Yellow(LY)和Di I标记的nLDL(Di I-nLDL)的摄取;油红O染色鉴定VSMCs内脂滴聚集。结果 (1)LPS刺激可促进VSMCs对nLDL呈浓度依赖性地摄取增加,导致细胞内脂滴的聚集逐渐增多。(2)200 ng/mL LPS刺激VSMCs 6 h,VSMCs对LY的摄取增加75%(P<0.01),对Di I-nLDL的摄取增加76%(P<0.01)。(3)应用胞饮抑制剂LY294002后,VSMCs对Di I-nLDL的摄取减少约29%(P<0.01),VSMCs内脂滴聚集明显减少。结论 LPS刺激诱导VSMCs通过大胞饮途径摄取nLDL,从而增加细胞内脂滴的聚集,促进平滑肌源性泡沫细胞形成。

线粒体靶向抗氧化肽SS-31对脓毒症大鼠血管通透性的保护作用

目的探讨线粒体靶向抗氧化肽SS-31对脓毒症大鼠血管通透性的影响及其机制。方法40只12周龄SD大鼠(雌雄各半,体质量约220 g)分成5组(n=8):假手术组(只开腹,不结扎盲肠和穿孔)、脓毒症组(盲肠结扎穿孔术制作脓毒症模型)、常规治疗组(conventional treatment,CT组,脓毒症模型12 h后,股静脉输注LR)、SS-31早期治疗组(常规治疗基础上在盲肠结扎穿孔前30 min尾静脉给予SS-31 3 mg/kg)和SS-31晚期治疗组(常规治疗基础上在盲肠结扎穿孔12 h后从股静脉输注LR联合SS-31)。通过荧光蛋白透过率的方法测定大鼠肺脏和肾脏的血管通透性,伊文思蓝染色透过率检测大鼠肠道通透性;离体取原代肺静脉内皮细胞观察LPS刺激(LPS组)及SS-31预处理(SS-31预处理组)后对内皮细胞的闭锁小带蛋白1(zonula occludes-1,ZO-1)的表达和细胞跨膜电阻(trans electric resistance,TER),以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)的影响,以无血清的基础培养基培养24 h的细胞作为正常对照组。结果 (1)与假手术组比较,脓毒症组大鼠肺脏、肾脏血管以及肠道组织的通透性明显增加,线粒体功能降低(P <0. 01);采用常规治疗(LR联合头孢呋辛钠和多巴胺同时输注)尽管可以降低脓毒症大鼠的通透性和减轻线粒体功能损害,但与脓毒症组比较,差异无统计学意义(P>0. 05); SS-31治疗可明显降低脓毒症大鼠肺脏、肾脏血管以及肠道组织的通透性和增加线粒体功能,与常规治疗组比较,差异有统计学意义(P <0. 01),其中SS-31早期治疗效果比晚期治疗效果更好。(2)与正常对照组比较,LPS组ZO-1表达明显降低,细胞结构排列紊乱,TER明显降低,ROS含量增加; SS-31预处理可使ZO-1表达增加,细胞间连接紧密,TER明显增加,ROS含量明显降低。结论 SS-31对脓毒症大鼠的血管通透性有保护作用,其机制可能与抑制线粒体氧化应激有关。

院前预警对缩短急性缺血性卒中患者就诊到溶栓时间的影响

目的观察院前预警对缩短急性缺血性卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者就诊到溶栓时间以及对患者预后的影响。方法对2016年6月至2017年6月经我院卒中绿色通道行静脉溶栓治疗的115例AIS患者临床资料进行回顾性分析,观察院前预警(n=40)和无院前预警经门、急诊就诊(n=75)进入卒中绿色通道患者就诊至接受重组组织型纤溶酶原激活剂(recombinant tissue plasminogen activator,rt-PA)静脉溶栓时间(door to needle time,DNT)的差异。同时观察2组患者发病至静脉溶栓时间(onset to needle time,ONT)、出院时的美国国立卫生研究院卒中量表(national institutes of health stroke scale,NIHSS)评分、90 d良好神经功能预后(m RS评分0~2)率、90 d死亡率的差异。结果院前预警组ONT略长于无院前预警组[(207.00±89.71)min vs(175.11±65.21)min,P=0.031];但DNT明显短于无院前预警组[(42.57±19.58)min vs(59.55±13.95)min,P<0.01];2组患者出院时NIHSS评分、90 d良好神经功能预后率、90 d死亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。进一步对各环节的时间节点分析结果显示,院前预警组患者入院-开始影像检查、获得影像结果 -患者家属同意溶栓的时间明显短于无院前预警组(P<0.05,P<0.01);2组患者开始影像检查-影像检查结束时间、患者家属同意溶栓-开始溶栓时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论院前预警可明显缩短患者DNT。对于不具备溶栓条件的机构转诊可疑AIS患者时,应做到院前预警。

HBV相关性肝癌患者CD19^+CD24^+CD38^+调节性B细胞和IL-10的检测及临床价值

目的检测HBV相关性肝癌患者CD19^+CD24^+CD38^+调节性B细胞(Bregs细胞)的分布频率及血清白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的水平并分析其临床意义。方法收集93例HBV相关性肝癌患者、47例HBV相关性肝硬化患者和57例健康体检者的外周血,采用流式细胞术检测CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率,化学发光法检测血清IL-10水平,并分析其与疾病分期、肿瘤个数、血管侵犯等临床指标的关系;同时收集20例HBV相关性肝癌患者的癌组织、癌旁组织和远癌组织,采用流式细胞术检测组织中CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率,并分析其与肿瘤位置的相关性。结果 HBV相关性肝癌外周血CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞显著高于肝硬化组和健康对照组,且HBV相关性肝癌晚期(C+D期)患者显著高于早期(0+A期)和中期(B期)患者(P<0.05,P<0.01);HBV相关性肝癌和HBV相关性肝硬化患者血清IL-10水平显著高于健康对照组(P<0.01);HBV相关性肝癌外周血CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率和血清IL-10水平与肿瘤个数、是否血管侵犯有密切关系;HBV相关性肝癌患者外周血CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率与血清IL-10呈正相关(r=0.46,P<0.01);HBV相关性肝癌患者癌组织和癌旁组织CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞频率显著高于远癌组织(P<0.01)。结论 CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞可能通过分泌IL-10在HBV相关性肝癌免疫微环境中发挥调节作用,参与肿瘤的发生、发展。

胞外DNA在急性呼吸窘迫综合征小鼠炎症损伤中的作用

目的研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)小鼠胞外DNA的生成情况及其对肺部炎症损伤的作用。方法以LPS(6 mg/kg)经鼻气管滴注法建立ARDS模型。40只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、DNaseⅠ组、LPS组和LPS+DNaseⅠ组,每组10只。造模后24 h取肺组织行HE染色观察肺组织病理改变;取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)检测细胞数量,采用超敏荧光核酸染料检测其中双链DNA浓度;采用ELISA检测BALF中白介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)浓度。结果 LPS组小鼠肺组织HE染色可见大量中性粒细胞浸润、肺泡结构破坏、肺泡出血及间质水肿,提示LPS诱导ARDS建模成功。LPS组BALF中细胞计数、MPO、IL-6、TNF-α和双链DNA浓度均分别显著高于对照组(P<0.05),LPS+DNaseⅠ组肺损伤评分和炎症指标均较LPS组显著降低(P<0.05)。结论 LPS诱导ARDS小鼠BALF中胞外DNA浓度升高,而DNaseⅠ能够降低ARDS小鼠BALF中DNA浓度,减轻肺部炎症损伤。

不同强度的低强度脉冲超声波对椎间盘退变的影响

目的 探讨不同强度的低强度脉冲超声波对椎间盘退变的影响,筛选低强度脉冲超声波的最佳治疗强度。方法 采用3种强度（0. 1、0. 5、1. 0 W/cm^2）的低强度脉冲超声波处理大鼠髓核细胞及筛选的最佳强度超声波处理针刺椎间盘模型小鼠; EdU检测髓核细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,定量PCR检测蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、波形蛋白等相关基因表达;组织学分析小鼠尾部椎间盘退变程度。结果 3种强度的低强度脉冲超声波能促进髓核细胞增殖及迁移,强度为0. 5 W/cm^2及1. 0 W/cm^2的低强度脉冲超声波作用较明显（P 〈0. 01）。低强度脉冲超声波也可上调正常环境及炎症刺激下髓核细胞中蛋白聚糖、波形蛋白等表达,其中强度为0. 5 W/cm^2、频率为3 MHz、占空比为50%中强度的低强度脉冲超声波作用最强（P 〈0. 01）。对照组小鼠椎间盘表现出明显退变表型,而超声组椎间盘退变程度的组织评分明显低于对照组（P 〈0. 01）。结论 低强度脉冲超声波可能通过上调椎间盘的蛋白聚糖、波形蛋白、Ⅱ型胶原表达,加快细胞增殖及迁移等,对椎间盘退变有一定防治作用,其中强度为0. 5 W/cm^2、频率为3 MHz、占空比为50%中强度的低强度脉冲超声波作用最明显。

桧木醇/纳米氧化锌/聚己内酯/聚乙二醇纳米纤维促进耐甲氧西林金黄色葡萄球菌伤口感染的愈合

目的制备桧木醇/纳米氧化锌/聚己内酯/聚乙二醇(beta-thujaplicin/zinc oxide nanoparticles/polycaprolactone/polyethylene glycol,β-T/ZnONPs/PCL/PEG)纳米纤维,并评价其对小鼠伤口感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)的治疗作用。方法通过静电纺丝技术制备纳米纤维后,用扫描电镜观察纳米纤维结构,采用傅里叶变换红外光谱仪考察纳米纤维和药物之间的结构和化学键,差示扫描量热仪测定纳米纤维的热力学性质;并采用稀释法测定纳米纤维的体外抗菌活性,MTT实验检测细胞毒性,选择BALB/c小鼠建立MRSA感染的伤口模型,考察纳米纤维的治疗作用。结果 1%β-T/0. 25%ZnONPs/PCL/PEG纳米纤维的直径为(255. 98±56. 08)nm,药物与载体材料之间的相容性较好。0. 5%β-T/0. 5%ZnONPs/PCL/PEG与1%β-T/0. 25%ZnONPs/PCL/PEG两种组分的纳米纤维对MRSA抗菌活性(P> 0. 05)和细胞毒性(P> 0. 05)相似,符合GB/T16886. 5-2011对生物材料的相关标准。动物实验结果显示,在建立伤口给予纳米纤维治疗的第7、11、15天,所有载药组对MRSA引起的伤口感染与裸露组、未载药纳米纤维组相比,具有较好的治疗作用(P <0. 05),在第11天,β-T/ZnONPs/PCL/PEG纳米纤维组伤口愈合率优于其他各组(P <0. 05)。通过病理学观察发现,制备的β-T/ZnONPs/PCL/PEG纳米纤维在促进感染性伤口愈合方面效果明显优于其他各组。结论桧木醇/纳米氧化锌/聚己内酯/聚乙二醇纳米纤维型创伤敷料符合目前对于理想型创伤敷料的要求,该新型敷料将来应用于临床治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引起的伤口感染,可以减轻伤口部位的炎症反应,具备一定的开发前景。