agrB/D/C对Agr系统活性及金黄色葡萄球菌毒力的影响

目的:构建金黄色葡萄球菌(金葡菌)ΔagrB/D/C/Newman敲除株,分析agrB/D/C对Agr系统活性及金葡菌毒力的影响,为深入研究不同型别Agr系统对金黄色葡萄球菌的致病作用提供依据.方法:利用同源重组技术,以pBT2为敲除载体,构建ΔagrB/D/C/Newman敲除株,检测野生株和敲除株的溶血能力,色素形成能力,生物膜形成能力及毒力基因表达.结果:成功构建了ΔagrB/D/C/Newman敲除株,与野生株Newman相比,敲除株溶血能力显著降低,色素形成能力显著降低,生物膜形成能力显著增加;敲除株培养上清中的蛋白种类和数量较野生株显著减少;实时荧光定量PCR(RT-PCR)结果显示ΔagrB/D/C/Newman敲除株毒力因子的转录水平较野生株显著降低.结论:agrB/D/C能够影响AgrA的表达从而影响Agr系统的功能,agrB/D/C基因敲除后显著改变毒力因子的表达水平.

人血管内皮细胞上与2型登革病毒相互作用蛋白的筛选与鉴定

目的建立高效病毒受体筛选方法,筛选并鉴定人血管内皮细胞膜上与2型登革病毒(DENV-2)相互作用的蛋白。方法用纯化的DENV-2 E蛋白DⅢ区(EDⅢ)分子代替全病毒颗粒与转印至PVDF膜的人血管内皮ECV304细胞膜蛋白进行孵育,建立改良的VOPBA和2D-VOPBA技术筛选相互作用蛋白,筛选出的候选蛋白经质谱分析、Western blot和免疫共沉淀(Co-IP)实验鉴定;利用抗体阻断实验和激光共聚焦显微技术观察和验证候选蛋白与DENV-2感染的关系;经生物信息学分析,预测候选蛋白与DENV-2 EDⅢ蛋白的对接复合物模型及其结合热点残基。结果筛选出相对分子质量34 000、43 000和55 000这3个候选蛋白,其中相对分子质量43 000和55 000蛋白经鉴定分别为细胞骨架微丝蛋白(fibrous-actin,F-actin)和波形蛋白(vimentin),均可与DENV-2 EDⅢ蛋白在体外发生特异性结合,并且vimentin蛋白可表达于人血管内皮细胞表面,其抗体可部分阻断DENV-2感染;激光共聚焦显微镜观察到在DENV-2感染的前5 min就可引起ECV304细胞中actin的重排,并且actin与病毒E蛋白有明显的随感染时间增强的共存现象。最后,利用生物信息学分别预测了actin和vimentin与DENV-2 EDⅢ蛋白的结合模型及结合残基。结论成功建立了高效的病毒受体筛选技术,并证实筛选到的actin和vimentin蛋白可作为辅助受体或相互作用蛋白,通过与DENV-2 EDⅢ蛋白结合参与DENV-2感染人血管内皮细胞。

大数据背景下医学生《生物信息学》课程教学的思考

生物信息学是生物学和计算机科学相结合的一门交叉学科。随着计算机互联网信息技术的不断突破和“精准医疗”的火热开展，生物医学领域迎来了大数据时代。医学生对生物信息学知识的需求从单基因层面转向对海量医学数据的分析处理上。本研究分析了大数据时代的特征，对大数据背景下医学生《生物信息学》所面临的教学理念，课程覆盖面及教学平台无法适应新时代要求等问题进行了剖析；并据此提出通过优化课程设置，转变教学理念，引入新型教学方法和搭建与时俱进的教学平台等措施，强化生物信息学教学的改革，以应对大数据时代的挑战。

噬菌体裂解酶专家共识——齐鲁公共卫生云讲堂

随着抗生素持续、不合理应用乃至滥用,使得细菌对抗生素的耐药性日益严重。特别是抗多黏菌素mcr-1基因以及耐万古霉素"超级细菌"的发现,标志着"后抗生素时代"的来临。为了应对细菌的耐药性、抗生素残留所导致的机体免疫力下降以及环境污染等问题,我国正在全力推进"减抗、限抗、禁抗"战略的实施,这是破解抗生素长期应用引发系列问题的根本之策,是事关畜禽健康养殖、公共卫生安全和人类健康的一件大事。这一战略的实施也对"安全、有效、质量可控,无残留、无污染"的绿色新型替抗剂的研发提出新的需求,亟需在这些方面寻求新的突破口,其中噬菌体裂解酶是一个重要的突破方向。噬菌体裂解酶作为一类新型抗菌蛋白,在应对细菌耐药性方面具有独特优势,在减抗、降抗中具有公共卫生战略价值。为推动噬菌体裂解酶的研究与应用,现汇聚全国十多位从事噬菌体裂解酶研究的专家和相关企业,联合齐鲁公共卫生云讲堂、噬菌体国际研讨会和《中国兽医学报》,专题研讨国内外关于噬菌体裂解酶的基础研究成果和实际应用案例,对噬菌体裂解酶的发展趋势进行分析、研判,形成一系列共识。

伤寒沙门菌三基因敲除株的构建及其减毒效果分析

目的通过敲除伤寒沙门菌与体内生存相关的基因构建减毒株。方法采用同源重组方法进行基因敲除,将涉及铁摄取的外膜转运蛋白编码基因iroN、fepA、cirA全部敲除。采用小鼠感染模型测定野生株和突变株的毒力水平,采用概率单位加权回归法计算半数致死量(LD50)。结果采用同源重组方法将3个基因一一敲除,成功构建三基因敲除株。贫铁培养基中的生长曲线显示突变株生长较野生株明显缓慢;以动物模型检测的毒力水平显示,野生株和突变株的LD50分别为3.64×10CFU和3.56×10^6CFU。结论伤寒沙门菌外膜转运蛋白编码基因iroN、fepA、cirA敲除后病原菌毒力显著减低,为减毒疫苗的后续评价奠定了基础。