臀大肌肌瓣联合筋膜脂肪瓣修复坐骨结节Ⅲ、Ⅳ期压力性损伤的疗效观察

目的探讨臀大肌肌瓣联合筋膜脂肪瓣修复坐骨结节Ⅲ、Ⅳ期压力性损伤的疗效。方法回顾性分析2018年6月—2020年9月陆军九五八医院骨科收治坐骨结节压力性损伤患者15例,男性10例,女性5例;年龄42~75岁,平均63.7岁;病灶累及单侧者12例、双侧者3例。原发疾病为脊髓损伤截瘫者8例,脑血管意外后遗症者4例,骨盆骨折长期卧床者3例。根据2016年修订版国际压疮指南分期,Ⅲ期创面5例、Ⅳ期创面10例。入院时创面面积2.0 cm×5.0 cm~8.5 cm×11.0 cm。一期彻底清创将慢性感染病灶转变为无菌新鲜创面,转移臀大肌肌瓣填塞空腔,设计筋膜脂肪瓣覆盖创口,术后观察切口愈合情况,随访患者压疮复发情况、臀部外观及肌瓣供区继发功能障碍和畸形情况等。结果13例患者切口Ⅰ级愈合,2例患者创面因粪便污染经二期换药后愈合。患者均获16~24个月随访,平均20.3个月。未见压疮复发,患处皮肤质地良好、外形饱满、轻度色素沉着、无窦道形成,供区无继发功能障碍或畸形。结论联合臀大肌肌瓣和筋膜脂肪瓣修复坐骨结节Ⅲ~Ⅳ期压力性损伤的临床效果较佳,术后未见压疮复发,患处皮肤质地和外形良好,供区无继发功能障碍或畸形。

鸦胆子苦醇调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对皮肤鳞癌细胞铁死亡的影响

目的:探讨鸦胆子苦醇调节核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通路对皮肤鳞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,cSCC)细胞铁死亡的影响。方法:CCK-8法检测0、100、250、500、700、900 nmol/L鸦胆子苦醇处理后人cSCC细胞系A431细胞增殖率,筛选出合适的鸦胆子苦醇作用浓度。体外培养的A431细胞随机分为对照组、鸦胆子苦醇低剂量组、鸦胆子苦醇高剂量组、特丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,TBHQ;Nrf2激活剂)组、鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组,以鸦胆子苦醇和TBHQ分组处理后,采用CCK-8法、Hoechst 33342染色法检测各组A431细胞增殖与凋亡;采用试剂盒检测各组A431细胞抗氧化因子[谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)]水平及铁死亡指标[铁含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)]水平;采用免疫印迹实验检测各组A431细胞增殖、凋亡及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,鸦胆子苦醇低、高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达均升高(P<0.05);鸦胆子苦醇高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达相比鸦胆子苦醇低剂量组进一步降低(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达进一步升高(P<0.05);TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。与鸦胆子苦醇高剂量组相比,鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论:鸦胆子苦醇通过下调Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路而促进铁死亡,诱导cSCC细胞凋亡,并抑制其增殖。

氢气通过抑制氧化应激促进创面愈合

目的:探讨氢气对创面愈合产生的影响及其分子机制。方法:将36只昆明小鼠采用随机数字表法分为对照组、腹腔注射生理盐水组、腹腔注射富氢生理盐水组,每组12只。记录创面愈合时间并在第3、7天采集创面进行组织学观察。采用H 2O 2对原代分离的人成纤维细胞进行氧化刺激,检测细胞活力及细胞活性氧(ROS)水平,通过免疫荧光实验检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平,并通过t检验评估组间差异。结果:腹腔注射富氢生理盐水组的创面愈合时间较对照组和腹腔注射生理盐水组更短[(11.17±0.68)d比(13.67±0.94)d,t=4.792,P<0.01;(11.17±0.68)d比(13.33±0.47)d,t=5.814,P<0.01]。在H 2O 2介导的氧化应激下,经富氢培养基处理的人成纤维细胞活力较标准培养基高[(58.64±15.19)%比(29.13±4.07)%,t=3.250,P<0.05]。加入Nrf2特异性抑制剂后,经富氢培养基处理的人成纤维细胞Nrf2荧光表达降低(0.44±0.06比1.64±0.33,t=8.632,P<0.01),HO-1荧光表达降低(0.42±0.06比1.36±0.14,t=15.130,P<0.01),细胞活力降低[(112.81±20.05)%比(156.41±10.78)%,t=4.692,P<0.01]。结论:氢通过激活Nrf2/HO-1通路缓解氧化应激反应从而促进创面愈合。

毛囊干细胞在皮肤创伤修复中的促进作用

毛囊干细胞介导毛囊再生,近年研究发现毛囊干细胞在皮肤创伤修复中也发挥重要作用。文章通过对以毛囊干细胞为基础所进行的各种实验总结,揭示了毛囊干细胞可以促进毛囊再生,参与血管形成,皮肤浅表神经修复再生,皮肤附属器官重建以及皮肤表皮重建等过程,阐明了毛囊干细胞在皮肤损伤修复过程中的重要作用,同时阐明目前毛囊干细胞对皮肤创伤修复这一方向所面临的局限以及未来的发展前景。

常见毛囊细胞角蛋白在毛囊周期中的表达研究

目的探讨常见毛囊细胞角蛋白在毛囊周期中的表达特征。方法取毛囊发育期、生长期启动、生长期、退化期和静止期的小鼠皮肤,石蜡切片后通过免疫荧光的方法,检测细胞角蛋白Krt5、Krt6、Krt10、Krt14、Krt15和Krt19的表达情况。结果 Krt5在静止期和生长期启动表达于所有毛囊上皮细胞,在其他时期表达不一致;Krt6表达于所有时期的外根鞘细胞和内根鞘细胞;Krt10表达于生长期和退化期的毛母质和内根鞘细胞,在其他时期表达不一致;Krt14在生长期和退化期表达于所有毛囊上皮细胞,在其他时期表达不一致;Krt15和Krt19表达于毛囊发育期、生长期启动和静止期的毛囊隆突区细胞,在生长期和退化期表达不一致。结论角蛋白作为毛囊结构或毛囊干细胞标记物仅适用于特定的毛囊周期。研究者在使用毛囊角蛋白作为标记物时,应首先明确其在毛囊周期中的表达情况。

碳离子注入硅橡胶的表面性能及其稳定性研究

目的探讨碳离子注入硅橡胶的表面性能及其稳定性。方法使用高能离子注入机在硅橡胶表面注入不同剂量碳,密闭静置6个月后,采用接触角测量、扫描电镜、原子力显微镜、X射线光电子能谱、X射线衍射以及傅里叶红外光谱检测其表征。通过人真皮成纤维细胞在其上的黏附与增殖情况来评价细胞相容性。结果相较于普通硅橡胶,注入组表面粗糙程度明显增加,且亲水性提高;表面及本体化学性质无明显变化;与成纤维细胞的亲和力提升。结合以往注入后即刻测试结果进行比较,发现以上表面性能在放置前后基本未受影响。结论将碳注入改性硅橡胶后,其表面性能提高,且相对稳定。

c-Casitas B谱系淋巴瘤原癌基因蛋白参与高糖抑制内皮细胞成管

目的探索高糖培养下内皮细胞c-Casitas B谱系淋巴瘤原癌基因蛋白(c-Cbl)表达与活性变化对其成管的影响。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分别以5.5 mmol/L正常浓度葡萄糖(NG)、15.2 mmol/L中等浓度葡萄糖(MG)和25.0 mmol/L高浓度葡萄糖(HG)的培养基处理24 h, 采用锁核酸修饰的反义寡核苷酸间隔物(LNA Gapmers)下调c-Cbl表达。蛋白质印迹法(Western blot)检测c-Cbl表达及磷酸化水平。侵袭小室(Transwell)、细胞计数试剂盒(CCK-8)试验检测细胞迁移、增殖能力, 成管实验判断细胞的成管能力, 并通过t检验评估两组间差异。结果 HG组细胞c-Cbl在Y731位点的相对磷酸化水高于NG组(3.27±0.18比1.00±0.19, t=15.140, P<0.01), HG组细胞迁移数低于NG组[(38.33±6.51)个比(180.67±16.17)个, t=-14.147, P<0.01], HG组CCK-8吸光度值低于NG组(0.45±0.05比1.25±0.05, t=-19.596, P<0.01), HG组细胞成管水平低于NG组[相对总长度(0.42±0.08)比(1.00±0.11);相对结节数(0.36±0.07)比(1.00±0.07);相对网眼结构(0.32±0.08)比(1.00±0.10);t=-7.119、-10.870、-9.114, P<0.01]。另外, 高糖下调c-Cbl(HG+c-Cbl KD)组CCK-8吸光度值高于高糖对照(HG+NC)组(0.81±0.06比0.46±0.06, t=6.906, P<0.01)、其迁移细胞数也高于HG+NC组[(85.00±9.00)个比(43.67±9.30)个, t=5.534, P<0.01], 并且HG+c-Cbl KD组细胞的成管能力高于HG+NC组[相对总长度(0.72±0.05)比(0.42±0.10);相对结节数(0.64±0.08)比(0.33±0.12);相对网眼结构(0.62±0.08)比(0.34±0.08);t=4.874、3.734、4.266, P<0.05]。结论高糖培养下c-Cbl磷酸化激活可抑制血管内皮细胞成管能力。

低浓度过氧化氢对HaCat细胞增殖和大鼠创面愈合的作用与机制研究

目的探讨低浓度过氧化氢(H_(2)O_(2))对创面愈合的促进作用及其可能的作用机制。方法建立大鼠全层皮肤缺损创面模型,将大鼠分为对照组(使用生理盐水)、高、低浓度H_(2)O_(2)组(分别使用3%,0.01%H_(2)O_(2)干预)。选取第0、3、6、9、12、15、18天共7个时间点评估创面愈合率,并在第3、6、9天对创面组织样本进行组织病理检测。使用CCK-8法探索了不同浓度的H2O2对HaCat细胞增殖的影响。将细胞分为对照组、35 μmol/L H_(2)O_(2)组、35 μmol/L H_(2)O_(2)+ML385组3组[使用5 μmol/L的核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂ML385预处理]检测各组的细胞增殖活性,并使用免疫荧光法及流式细胞分析技术分别检测各组细胞内磷酸化Nrf2(pNrf2)的核转位和活性氧(ROS)的水平。重复观测的创面愈合情况使用重复测量方差分析,多组间比较采用单因素方差分析,多个实验组与一个对照组间的比较采用Dunnett-t检验。结果与对照组相比,0.01%H_(2)O_(2)组在3、6、9、12、15、18d愈合率升高,使创面炎症期提前且缩短,3%H_(2)O_(2)组愈合率降低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。在细胞实验中,与对照组相比,25.92、43.2 μmol/L H_(2)O_(2)均可促进细胞增殖(吸光度:1.30±0.04比1.52±0.06、1.49±0.07),差异有统计学意义(P均<0.05),故选取35 μmol/L H_(2)O_(2)进行接下来的实验。与35 μmol/L H_(2)O_(2)组相比,对照组和35 μmol/LH_(2)O_(2)+ML385组HaCat细胞的增殖活性(吸光度:1.47±0.05比1.30±0.05、1.23±0.06),pNrf2核转位(荧光强度:30.81±14.31比9.11±4.45、13.61±6.83)降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,35 μmol/L H_(2)O_(2)组和35 μmol/L H_(2)O_(2)+ML385组ROS水平升高(平均荧光强度:593.56±19.98比621.56±32.08、701.44±54.04)差异有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度H2O2可通过提高细胞增殖活性促进创面愈合,且该过程受Nrf2调节。