ELR^+ CXC趋化因子诱导NETs生成的作用机制

目的探讨ELR^+CXC趋化因子诱导中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)生成的作用及机制。方法分离人外周血中性粒细胞,通过荧光染色和总MPO定量检测比较ELR^+CXC趋化因子、ELR-CXC趋化因子和非趋化性细胞因子对NETs的诱导作用。以CXCL8为代表性ELR^+CXC趋化因子,检测其诱导NETs的时效、量效关系,明确参与NETs生成的酶类成分,胞膜受体以及胞内信号分子机制。检测CXCL8对中性粒细胞ROS的上调效应及其在介导NETs生成中的作用。结果仅有ELR^+CXC趋化因子可刺激NETs释放(P<0.05或0.01)。其代表性因子CXCL8诱导NETs具有时间和剂量依赖性。抑制MPO、NE和PAD4活化,或者抑制CXCR1受体内化以及胞内ERK和p38的磷酸化,均可显著下调CXCL8诱导的NETs生成(P<0.01)。CXCL8还通过上调NOX2并增加胞内ROS水平介导NETs生成。结论ELR^+CXC趋化因子可诱导NETs生成,该作用与其结合CXCR1,激活ERK和p38,诱导NOX2活化和上调ROS生成有关。

抑制内质网钙离子释放在诱导巨噬细胞自噬及逆转LPS耐受中的作用

目的观察LPS耐受巨噬细胞自噬水平以及抑制内质网Ca 2+释放是否具有上调自噬水平和逆转LPS耐受的作用。方法分离Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞,LPS 5 ng/ml诱导耐受4 h,随后给予LPS 100ng/ml刺激,ELISA检测TNF-α和IL-6水平,Western blot和免疫荧光检测自噬蛋白(Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ)表达水平,Fluo-4 AM探针检测胞内Ca 2+浓度;在LPS刺激的同时给予胞内Ca 2+螯合剂(BAPTA)或内质网IP3通道阻断剂(2-APB)或CaMKⅡ抑制剂(KN-93),检测对自噬蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ表达以及TNF-α释放的影响。结果LPS耐受细胞经LPS再次刺激后,TNF-α、IL-6释放明显减少,自噬水平也显著下降,同时胞内Ca 2+水平异常增高;给予BAPTA或2-APB或KN-93能够降低胞内Ca 2+水平,上调LC3-Ⅱ/Ⅰ表达,增加TNF-α释放。结论LPS耐受的巨噬细胞自噬水平显著降低,抑制内质网Ca 2+通路是上调自噬水平并逆转LPS耐受的有效途径。

白蛋白对脂多糖诱导中性粒细胞胞外诱捕网生成的抑制作用

目的探讨白蛋白对脂多糖(LPS)诱导人外周血中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)生成的抑制作用及机制。方法分离人外周血中性粒细胞,分别培养于无白蛋白和含生理浓度白蛋白的培养体系中,加入LPS刺激,同时使用钙离子(Ca2+)以及自噬调节剂干预,采用sytox green染色法检测NETs,采用Fluo-4 AM染色法检测胞内Ca2+水平,免疫荧光法检测NETs相关蛋白髓过氧化物酶(MPO)、弹性蛋白酶(NE)和瓜氨酸化组蛋白H3(cit-H3)以及自噬体相关蛋白LC3B的表达。结果 LPS可诱导中性粒细胞释放NETs,白蛋白可抑制NETs生成;白蛋白可降低LPS刺激下中性粒细胞胞内Ca2+浓度和自噬水平。Ca2+载体可增强中性粒细胞自噬水平并促进LPS诱导的NETs生成,Ca2+螯合剂可降低自噬水平并抑制NETs生成。自噬激动剂可显著增强NETs,自噬抑制剂则显著抑制NETs。结论白蛋白对LPS诱导中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)生成具有抑制作用,其作用机制可能与减少中性粒细胞Ca2+内流进而抑制自噬有关。

小鼠烧伤创面脓毒症模型的建立与评价

目的建立一种稳定的小鼠烧伤创面脓毒症模型,检测其病理生理指标,为烧伤脓毒症相关研究提供标准化的动物模型。方法将小鼠背部侵入90℃水面接触8 s建立小鼠Ⅲ度烫伤模型,烫伤面积约15%~20%。2 h后痂下注射100μL浓度为0.75×10^(5) CFU/mL的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)造伤后创面脓毒症。连续12 d观测记录小鼠的体重、采食量、生存率和一般状态指标。在注射后1、2、3、5、7 d取小鼠外周血和肝组织,测定血清生化和炎症因子指标,观察肝组织病理改变。结果模型组建模后12 d的死亡率为30.2%。血清生化指标中ALT、AST、UREA和CREA均较建模前显著上升(P<0.05或P<0.01),TP和TBIL指标无明显变化。血清炎症指标中TNF-α、IL-6在建模后第1天升至最高值(P<0.01),随后逐日递减,分别至第3、7天恢复至造模前水平。肝组织病理切片结果显示在各个时相点均出现肝损伤表现。结论建立了操作简便可控、严重程度适宜的烧伤脓毒症模型,符合烧伤脓毒症的病理生理特点,可为相关机制研究和药物研发提供标准化的实验动物模型。

4I培养模式在高校生命科学交叉融合人才培养中的作用与展望

生命科学交叉融合人才的培养模式依旧处于探索阶段,本文提出的4I培养模式包括交叉课程的设置、交叉课题的融合选题、交叉研究的全过程指导与管理和最终的创新考核四个关键环节。基于4I模式,系统且有针对性地进行布局,将提升高等院校生命科学交叉融合型人才的培养水平。