组蛋白H3K27me3沉默子重塑上调胃黏膜高级别上皮内瘤变磷酸甘油醛激酶1表达

目的 绘制胃黏膜高级别上皮内瘤变(High-Grade Intraepithelial Neoplasia, HGIN)组织的组蛋白H3K27me3沉默子图谱,寻找沉默子调控的重要靶基因。方法 从本院内镜中心收集HGIN与正常胃黏膜组织各24例,采用H3K27me3染色体靶向切割和标签化(Cleavage Under Target&Tagmentation, CUT&Tag)测序技术捕获基因组修饰区域。通过生物信息学分析比较两类组织的沉默子信号特征以及差异;整合RNA测序数据及高通量染色体构象捕获技术(Hi-C)公共数据,分析沉默子重塑调控的靶基因及调控的潜在生物学过程。结果 与正常胃黏膜相比,HGIN组织H3K27me3修饰数量减少,信号强度全局性降低,呈现H3K27me3信号峰重塑现象;转录组差异分析结果显示,与正常胃黏膜组织相比,HGIN共有8 887个差异表达基因,其中表达上调基因4 335个,表达下调基因4 552个,其中CTNNB1等肿瘤发生相关基因显著上调;整合分析表观组学和转录组学数据,发现沉默子丢失可能在转录水平上调氨基酸生物合成、精氨酸与脯氨酸代谢和糖酵解等关键代谢基因,如糖酵解关键酶磷酸甘油醛激酶1(phosphoglycerate kinase1,PGK1)表达,进而促进胃黏膜上皮内瘤变。结论 组蛋白H3K27me3沉默子信号丢失是HGIN表观重塑特征之一,沉默子丢失可能与PGK1等糖酵解和氨基酸代谢基因表达紊乱相关。

不同评分模型对肝硬化患者经颈静脉肝内门体分流术后生存的预测价值

目的探讨Child-Pugh评分、终末期肝病模型(MELD)评分、联合血清钠离子的终末期肝病模型(MELD-Na)评分、慢性肝衰竭联盟-急性失代偿(CLIF-C AD)评分和经颈静脉肝内门体分流术(TIPS)术后生存Freiburg指数(FIPS)评分对肝硬化患者生存的预测价值。方法回顾性分析2014年1月—2021年2月我国西南地区多家医院行TIPS治疗的447例肝硬化患者的临床资料,其中生存组306例,死亡组62例。计算五种评分模型分值,并基于五种评分模型分别对患者进行生存分析。正态分布的计量资料组间比较采用独立样本的t检验;不符合正态分布的计量资料组间比较采用非参数Mann-Whitney U检验;计数资料组间比较采用Pearsonχ^(2)检验;采用Cox回归分析各评分模型对TIPS患者预后的影响;Kaplan-Meier法分析不同评分水平的患者死亡风险的差异,并采用Log-rank检验。各模型预测能力采用受试者工作特征曲线下面积(AUC)、不同时间点C指数及决策曲线进行评估。结果生存组患者年龄(Z=2.884)低于死亡组,Alb(t=3.577)、Na^(+)(Z=-3.756)均高于死亡组,而酒精性肝硬化患者比例(χ^(2)=22.674)、AST(Z=2.141)、PT(Z=2.486)、INR(Z=2.429)、TBil(Z=3.754)、腹水严重程度(χ^(2)=14.186)及五种模型评分均低于死亡组(P值均<0.05)。生存分析显示,各评分模型均能有效对TIPS患者预后进行风险分层。对各评分模型不同时间点C指数比较发现,Child-Pugh评分对术后生存预测能力较高,其次为MELD-Na评分、MELD评分和CLIF-C AD评分,而FIPS评分预测能力相对较差,此外,随时间延长,各评分预测效能均减弱。Child-Pugh评分术后1年生存率的预测效能最大(AUC=0.832),MELD-Na评分术后3年生存率的预测效能最大(AUC=0.726),而FIPS评分术后在1年和3年生存预测能力比较中均较差。结论五种评分模型均可作为肝硬化TIPS术后患者生存的预测方法,且都可为肝硬化TIPS患者提供有效的预后风险分层。在短期预测上Child-Pugh评分生存预测能力更好,长期预测上MELD-Na评分生存预测能力更好,而FIPS评分预测能力均相对较差。

幽门螺杆菌感染患者耐药的危险因素分析

背景:幽门螺杆菌(Hp)对抗菌药物的耐药性不断增加,已成为导致其根除率降低的主要因素。目的:探讨影响Hp耐药性的危险因素。方法:回顾性分析2016年12月—2021年3月陆军特色医学中心收治的396例Hp感染患者的相关资料。采用药敏试验评估患者对6种抗菌药(甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林、四环素、呋喃唑酮)的耐药情况。应用非条件Logistic回归分析探讨影响Hp耐药性的危险因素。结果:396例Hp感染患者中,对甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林、四环素、呋喃唑酮的耐药率分别为96.5%、45.5%、41.9%、0.3%、0.3%、0。多因素分析表明,既往方案使用过克拉霉素为克拉霉素耐药的危险因素(P<0.001),年龄>40岁为左氧氟沙星耐药的危险因素(P<0.001)。结论:甲硝唑、克拉霉素和左氧氟沙星的耐药率较高,在没有药敏试验结果支持的情况下应避免使用含上述抗菌药物的方案,特别是既往方案使用过克拉霉素或年龄>40岁的患者,经验性治疗应优先考虑使用阿莫西林、四环素和呋喃唑酮。

老年人根除幽门螺杆菌疗效和安全性的倾向性评分匹配分析

背景:老年人根除幽门螺杆菌(Hp)需权衡获益与风险。目的:探讨老年人接受Hp根除治疗的有效性、安全性和耐药情况。方法:从重庆大坪医院4项Hp根除治疗随机对照试验的研究队列中选择研究对象,采集基本资料和诊疗相关信息,采用倾向性评分匹配法匹配老年组(≥60岁)与非老年组(<60岁),分析两组患者的Hp根除率、依从性、不良反应、耐药率和根除率影响因素。结果:994例接受Hp根除治疗的患者初步入选,通过倾向性评分匹配,共244例患者纳入研究,每组122例。老年组与非老年组Hp根除率均在90%以上,两组间依从性、药物相关不良反应发生率和抗菌药物耐药率差异均无统计学意义(P均>0.05)。老年组Hp根除率分别按性别、吸烟史、饮酒史、合并疾病(高血压、糖尿病、手术史、炎症)、依从性等因素进行分层分析,差异均无统计学意义(P均>0.05)。老年复治患者克拉霉素耐药率显著高于初治患者(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示吸烟和依从性差是影响Hp根除率的独立危险因素。结论:老年人接受Hp根除治疗具有与非老年人同等的有效性和安全性。复治老年患者应避免选择含克拉霉素经验性根除治疗方案。

幽门螺杆菌毒力因子CagA通过靶向SHARPIN促进炎症反应的机制研究

目的幽门螺杆菌(H.pylori)引起的慢性炎症是胃癌的主要原因之一,本研究旨在探讨幽门螺杆菌的重要毒力因子细胞毒素相关蛋白A(CagA)促炎的作用及其调控机制。方法采用质谱鉴定CagA在AGS细胞内的相互作用蛋白,并通过免疫共沉淀、免疫荧光验证其相互作用。通过使用siRNA敲低后,免疫印迹法检测通路蛋白表达、qRT-PCR检测炎症因子mRNA水平、ELISA检测蛋白水平。使用血红素-伊红染色法(H&E)检测临床样本中CagA诱导的炎症反应。结果CagA与SHARPIN具有相互作用。与CagA敲除株相比,CagA激活了NF-κB信号通路并上调了炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA水平和蛋白表达(P均<0.05)。通过siRNA敲低SHARPIN后,炎症水平降低、NF-κB信号被部分抑制。临床样本中CagA^(+)样本炎症反应显著增加。结论CagA促进宿主炎症反应,干扰SHARPIN可部分抑制CagA所致炎症反应,表明CagA通过与SHARPIN结合这一新机制激活NF-κB信号通路促炎。

高剂量质子泵抑制剂-阿莫西林双联方案在幽门螺杆菌根除治疗中的研究进展

幽门螺杆菌感染人体后会引起慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关的淋巴组织淋巴瘤等多种疾病甚至诱发胃癌,而根除幽门螺杆菌可以有效治疗和预防胃内相关疾病,但随着抗生素耐药问题日益凸显,长期应用于临床的三联疗法或四联疗法面临着根除率下降、药物获取困难、继发性耐药风险高等诸多问题。近年来高剂量质子泵抑制剂(PPI)-阿莫西林双联方案在多项研究中取得了较好的效果,引起越来越多的关注。文章就高剂量PPI-阿莫西林双联方案的研究进展做一探讨。

去线性泛素化酶OTULIN促进胃癌细胞的有氧糖酵解及增殖

目的:检测卵巢肿瘤(ovarian tumor,OTU)结构域线性链接特异性去泛素化酶(OTU domain deubiquitinase with linear linkage specificity,OTULIN)在胃癌组织中的表达情况,并探讨敲除OTULIN基因表达对胃癌MKN45和AGS细胞增殖的影响,及可能的作用机制。方法:采用免疫组织化学法检测73例胃癌组织与24例正常胃黏膜组织中OTULIN的表达水平,分析OTULIN表达与胃癌临床病理特征和患者预后的相关性。收集并分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus database,GEO)中的胃癌数据验证上述结论。采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建敲除OTULIN表达的胃癌MKN45和AGS细胞并用蛋白质印迹法检测基因敲除效率;采用CCK-8法和软琼脂克隆检测敲除OTULIN表达对MKN45和AGS细胞增殖的影响。蛋白免疫沉淀-质谱技术筛选OTULIN和线性泛素分子(INT-Ub.7KR)的共同互作蛋白,发现线性泛素化修饰底物蛋白。利用丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)活性试剂盒检测敲除OTULIN表达后糖酵解限速酶的活性变化,乳酸定量试剂盒检测乳酸生成情况。最后采用免疫共沉淀及蛋白质印迹法验证OTULIN对底物蛋白线性泛素化作用。结果:免疫组织化学法检测结果显示,OTULIN在胃癌组织中的表达水平明显高于正常胃黏膜组织(P=0.0041),肿瘤组织中OTULIN高表达者生存期较短(P=0.0077)。TCGA和GEO数据库数据分析也显示胃癌组织OTULIN表达水平升高(P<0.05),且OTULIN高表达与患者不良预后相关(P=0.011)。统计结果显示,OTULIN高表达与TNM分期晚密切相关(P=0.0273),预测患者较短生存期(P=0.04)。敲除OTULIN基因可显著抑制胃癌细胞的增殖能力(P均<0.001),降低胃癌细胞中PK活性和乳酸生成水平(P均<0.01)。OTULIN可结合糖酵解途径的多个限速酶并下调它们的线性泛素化水平,包括丙酮酸激酶M1(pyruvate kinase M1,PKM1)和PKM2以及乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)和LDHB。结论:胃癌中OTULIN高表达可能是评估患者预后的一个新的生物标志物,OTULIN可能通过下调糖酵解限速酶的线性泛素化修饰,激活胃癌糖酵解途径,促进胃癌发展。