miR-494通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胰岛β细胞增殖、抑制其凋亡增加胰岛素分泌

目的 探究微小RNA-494 (miR-494)与胰岛β细胞功能和妊娠糖尿病之间的关系。方法 选择20例妊娠糖尿病患者和健康体检者,反转录PCR测定其外周血miR-494的含量;培养INS-1胰岛细胞瘤细胞,分别采用含低糖(3.3 mmol/L)和高糖(16.7 mmol/L)处理后,采用ELISA测定胰岛素含量来评价胰岛细胞基础和高糖刺激的胰岛素分泌能力;采用miR-494模拟物对照、miR-494模拟物、miR-494抑制物对照、miR-494抑制物分别处理INS-1细胞24、48、72 h,收集细胞。采用噻唑蓝(MTT)法检测INS-1细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡;反转录PCR检测INS-1细胞Wnt3a、β联蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和c-Myc的mRNA表达;Western blot法检测细胞Wnt3a、β-catenin、cyclin D1、c-Myc蛋白表达。结果 与正常对照组相比,妊娠糖尿病患者空腹胰岛素、空腹血糖、1 h血糖和2 h血糖显著升高;外周血miR-494含量降低。过表达miR-494的INS-1细胞上清液胰岛素浓度增加,当给予高糖后,过表达miR-494进一步促进胰岛素分泌。过表达miR-494明显促进INS-1细胞活性,抑制INS-1细胞凋亡;miR-494能够显著性促进Wnt3a、β-catenin、cyclin D1、c-Myc的mRNA和蛋白表达,miR-494抑制物处理则结果相反。结论 miR-494通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胰岛β细胞增殖、抑制其凋亡增加胰岛素分泌。

复明汤调控TGF-β1/Smad3通路抑制肺成纤维细胞活化及肺上皮损伤减轻博来霉素诱导的肺纤维化

[目的]探讨复明汤用于肺纤维化治疗的具体作用机制,为其临床应用奠定理论基础。[方法]通过荧光素酶报告基因检测复明汤对转达化生长因子β1(TGF-β1)信号通路的影响,采用蛋白印记法(Western blot)检测其对TGF-β1诱导的Smad2/3依赖途径和肺Smad信号传导的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot法检测复明汤对细胞外基质(ECM)相关mRNA和蛋白水平及上皮损伤相关mRNA和蛋白的影响,最终构建小鼠肺纤维化模型,明确复明汤对小鼠肺纤维化的治疗效果。[结果]复明汤可拮抗TGF-β1/Smad3信号传导,其不仅可抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞损伤,而且可降低TGF-β1诱导的成纤维细胞分化、细胞外基质生成和成纤维细胞迁移。体内实验表明复明汤可抑制博来霉素诱导的肺损伤,甚至减弱小鼠中已成形的肺纤维化。[结论]复明汤可通过介导TGF-β1/Smad3通路减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化,为复明汤治疗肺纤维化的临床应用奠定理论基础。

三子养亲汤对支气管哮喘模型大鼠尿皮质素及肺表面活性蛋白-D表达的影响

目的探讨三子养亲汤(SZ)对大鼠实验性支气管哮喘的保护作用及潜在机制。方法以卵清蛋白(OVA)致敏和激发诱发支气管哮喘,将大鼠随机分为5组:对照组、模型组、地塞米松(阳性药,1 mg/kg)组、SZ治疗(200 mg/kg)组和SZ单给药(不造模,200 mg/kg)组。试剂盒法检测血清免疫球蛋白E(IgE)水平。ELISA试剂盒法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的炎性生物标志物白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ);Dunger’s稀释液染色法进行BALF中嗜酸性粒细胞计数;试剂盒法检测BALF中氧化氮应激生物标记物丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平、超氧化物歧化酶(SOD)的活性;实时荧光定量PCR法检测BALF中诱导型一氧化氮合酶(iNOs)RNA水平。以Western blotting法检测肺匀浆中肺表面活性蛋白-D(SP-D)表达水平;免疫组化测定肺中尿皮质素(UCN)的表达。HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化。结果与模型组比较,SZ治疗可显著降低血清IgE水平(P<0.05);显著降低BALF中MDA含量,同时显著提高SOD活性和GSH含量(P<0.05);显著降低BALF中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ和TNF-α水平(P<0.05);显著降低肺组织中SP-D和UCN的蛋白表达(P<0.05);HE染色结果表明,SZ显著改善模型大鼠肺组织炎症病变。结论 SZ可通过下调SP-D和UCN表达改善OVA诱导的支气管哮喘。