miRNA-149改善坐骨神经慢性压迫损伤大鼠神经病理性疼痛的机制研究

目的 探究miR-149对大鼠坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)引起的神经病理性疼痛(NP)的影响及分子机制。方法 将72只SD大鼠随机分为假手术组(sham)、CCI组、CCI+miR-149 agomir阴性对照(CCI+agomir-NC)组、CCI+miR-149 agomir组、CCI+miR-149 agomir+pc-NC组、CCI+miR-149 agomir+pc-CaMKⅡγ组,每组12只。采用CCI诱导建立NP大鼠模型,于建模前及建模后的第3天、第7天、第11天、第14天利用Von Frey检测大鼠的机械痛敏,热辐射法检测大鼠的热痛敏;建模后第14天用RT-qPCR法检测大鼠背根神经节(DRG)中miR-149和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ (CaMKⅡγ) mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测DRG中CaMKⅡγ蛋白水平;尼氏(Nissl)染色观察DRG神经元尼氏小体变化;免疫荧光法检测脊髓神经元中CaMKⅡγ表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测DRG中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白介素1β (IL-1β)和干扰素-γ (IFN-γ)含量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与CaMKⅡγ的靶向关系。结果 与sham组比较,CCI组大鼠机械痛阈值和热痛阈、DRG中miR-149表达下降,DRG中CaMKⅡγ的mRNA和蛋白水平、CaMKⅡγ阳性表达神经元数量、TNF-α、IL-1β和IFN-γ水平升高,且DRG中尼氏小体减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-149可改善CCI大鼠机械痛阈和热痛阈,降低DRG中CaMKⅡγ的mRNA和蛋白水平、CaMKⅡγ阳性表达神经元数量以及TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平,尼氏小体明显增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CCI+miR-149 agomir+pc-NC组比较,CCI+miR-149 agomir+pc-CaMKⅡγ组机械痛阈值和热痛阈下降,DRG中CaMKⅡγ的m RNA和蛋白水平、CaMKⅡγ阳性表达神经元数量、TNF-α、IL-1β和IFN-γ水平升高,尼氏小体减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,过表达miR-149可降低CaMKⅡγ-WT的荧光素酶活性。结论 过表达miR-149可能通过靶向抑制CaMKⅡγ表达,缓解CCI大鼠的神经病理性疼痛。

蒲公英提取物通过miR-31抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤和炎症反应的作用研究

目的:探讨蒲公英提取物对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤和炎症反应的保护作用。方法:肾小管上皮细胞HRPTEpiC分为正常对照(NC)组、高渗对照(OSM)组、高糖(HG)组、不同浓度蒲公英提取物组、高剂量组+anti-miR-NC组、高剂量组+anti-miR-31组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α、IL-6水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-31表达水平。结果:高糖诱导的肾小管上皮细胞活性降低,细胞凋亡率升高,TNF-α、IL-6水平升高,miR-31表达水平降低(P<0.05)。不同浓度蒲公英提取物处理后,肾小管上皮细胞活性升高,细胞凋亡率降低,TNF-α、IL-6水平降低,miR-31表达水平升高(P<0.05)。抑制miR-31表达逆转了蒲公英提取物对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用。结论:蒲公英提取物可通过调控miR-31抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤和炎症反应。