大黄素对卷烟烟雾提取物诱导的上皮-间质转化的作用及其机制

目的探讨大黄素对卷烟烟雾提取物(CSE)诱导的支气管上皮细胞上皮-间质转化(EMT)的作用及其机制。方法本研究为实验研究。选取人支气管上皮细胞(16HBE),按照处理不同分为正常对照组、CSE组(10%CSE)、大黄素组(大黄素10μmol/L)、大黄素+CSE组(大黄素10μmol/L+10%CSE)。采用酶联免疫吸附分析方法检测各组炎性因子白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素8(IL-8)的水平。采用蛋白质印迹法检测各组上皮间质标志物纤连蛋白、ZO-1、E-cadherin的蛋白水平。采用反转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、Smad3的mRNA和蛋白表达水平。采用TGF-β_(1)小干扰RNA抑制16HBE细胞TGF-β_(1)的表达,检测正常对照组、CSE组、大黄素+CSE组和大黄素+CSE+siTGF-β_(1)S366组(大黄素10μmol/L+10%CSE+siTGF-β_(1)S366)TGF-β_(1)mRNA和蛋白、Smad3 mRNA和蛋白、E-cadherin蛋白的表达水平。采用免疫荧光法验证转染后各组TGF-β_(1)和Smad3的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,CSE组IL-6、IL-8水平均升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与CSE组相比,大黄素+CSE组IL-6、IL-8水平均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与正常对照组相比,CSE组纤连蛋白、TGF-β_(1)、Smad3的表达水平均升高,ZO-1、E-cadherin的表达水平均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与CSE组相比,大黄素+CSE组纤连蛋白、TGF-β_(1)、Smad3的表达水平均降低,ZO-1、E-cadherin的表达水平均升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CSE组TGF-β_(1)、Smad3 mRNA水平均较正常对照组升高,大黄素+CSE组TGF-β_(1)、Smad3 mRNA水平均较CSE组降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与大黄素+CSE组相比,大黄素+CSE+siTGF-β_(1)S366组TGF-β_(1)mRNA与蛋白水平、Smad3 mRNA与蛋白水平、E-cadherin蛋白水平均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。转染siTGF-β_(1)后,免疫荧光检测TGF-β_(1)、Smad3水平均降低。结论大黄素能抑制CSE诱导的16HBE细胞IL-6、IL-8过表达和EMT的发生。大黄素可能通过TGF-β_(1)/Smad3通路抑制CSE诱导的16HBE细胞EMT的进程。