基于HPLC指纹图谱及多成分含量的化学模式识别法评价小血藤质量

目的用高效液相色谱二极管阵列器法(high performance liquid chromatography photodiode array,PLC-PDA)建立小血藤指纹图谱和同时测定小血藤中3种成分含量的分析方法,评价24批不同产地小血藤的质量。方法用Shim-pack Scepter C_(18)液相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈(A)-1 mL·L^(-1)磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱;检测波长为300 nm。指纹图谱数据导入SPSS 26.0与SIMCA 14.1统计软件进行聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析,以变量投影重要性值大于1为标准,筛选影响小血藤质量的差异标志物,并以高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定其中芦丁、紫云英苷、槲皮素的含量。结果24批小血藤指纹图谱发现共有峰22个,通过与对照品比对指认3个峰;陕南样品的相似度均高于0.92,其余样品的相似度均低于0.92;24批小血藤可聚为2类,S1~S16、S21、S22聚为Ⅰ类,S17~S19、S23、S24聚为Ⅱ类;前5种主成分的方差贡献率分别为36.16%、19.03%、17.47%、10.93%、8.30%,累积方差贡献率为91.89%;芦丁、紫云英苷、17号峰、6号峰、13号峰5种成分为影响小血藤质量的差异标志物;芦丁、紫云英苷、槲皮素的含量分别为0.2728~0.4764、0.0583~0.1558、0.0421~0.0574 mg·g^(-1)。结论建立的HPLC指纹图谱和含量测定方法简便、稳定、可靠,可用于小血藤的质量控制。

HPLC法同时测定复方金银花颗粒中10种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定复方金银花颗粒中10种成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷B、连翘酯苷A、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素)含量的方法。方法采用HPLC法,色谱柱:Kromasil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速:0.8 ml/min;检测波长:320 nm;柱温:35℃;进样量:10μl。结果在上述色谱条件下,10个成分的峰具有良好的分离度;新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷B、连翘酯苷A、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的线性范围分别为10.20～340.06、7.19～239.81、6.12～203.84、15.00～500.00、20.16～671.85、25.19～839.67、14.61～487.14、10.52～350.66、7.32～244.01、7.61～253.82μg/ml;10个对照品的平均加样回收率均在97.67%～99.00%之间,RSD均在0.94%～1.37%之间;10批制剂中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷B、连翘酯苷A、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的平均含量分别为0.579 0、1.523 5、1.080 9、0.083 1、0.468 0、0.739 6、1.977 9、0.351 5、0.246 8、0.256 6 mg/g。结论该含量测定方法简便、稳定可靠、准确,可作为复方金银花颗粒质量评价的方法。

HPLC法同时测定四季抗病毒合剂中17种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定四季抗病毒合剂中17种功效成分的含量,为临床用药提供参考。方法用Kromasil C_(18)液相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-1 mL·L^(-1)磷酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱;流速为0.8 mL·min^(-1);柱温为30℃;检测波长为277、254 nm。结果17种成分分离度良好,专属性强;各成分在相应质量浓度范围内与其峰面积具有良好的线性关系(r≥0.999);回收率在96%~100%之间;精密度、重复性、稳定性的RSD值均小于2.00%;10批次四季抗病毒合剂17种成分含量RSD均小于2%。结论该方法制样方法简便,重复性与稳定性好,可用于评价四季抗病毒合剂的质量。

四季抗病毒合剂及其主成分抗肠道病毒71型的作用及机制研究

目的探讨四季抗病毒合剂(Siji Kangbingdu Mixture,SJM)及其主成分(principal component,PC:连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘苷、甘草苷、甘草酸、木犀草苷、绿原酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸)抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)增殖和感染的作用及其作用机制。方法MTS法检测SJM、PC对非洲绿猴肾细胞(Vero)的毒性;基于EV71感染细胞模型检测SJM、PC抗损伤的效果;基于EV71感染乳鼠模型观察SJM、PC对其存活率、存活时间、临床症状评分的改善情况;检测乳鼠模型肌肉与血清中白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平。结果(1)EV71对Vero细胞的半数组织培养感染剂量(TCID 50)为10-5.68·mL^(-1);(2)SJM、PC对Vero细胞的半数抑制质量浓度分别为11.83 mg·mL^(-1)(按生药量计)、20.67μg·mL-1(按连翘酯苷A计);(3)单次和连续给予SJM与PC对ICR乳鼠无明显致毒作用;(4)SJM与PC可显著抑制EV71的增殖,以提高被感染细胞的存活率;(5)SJM与PC可显著改善被感染乳鼠的存活率、临床症状等指标;(6)SJM与PC均可显著调节肌肉与血清中IL-6、TNF-α、MCP-1的水平。结论SJM与PC可显著抑制EV71的增殖,调节免疫炎症因子,PC可在一定程度上替代SJM,发挥治疗手足口病的重要作用。

地龙胶囊及其主成分对小鼠移植瘤S180辐射增敏的研究

目的观察地龙胶囊(DLC)及其主成分(MC,由尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、肌苷、鸟苷、色氨酸、尿嘧啶核苷、2′-脱氧肌苷和2′-脱氧鸟苷等组成)的体内抗肿瘤活性,探讨其体内抑瘤作用机制。方法①取DLC低、中和高剂量组以及MC1、MC2和MC3,对小鼠S 180肉瘤细胞实体瘤模型进行体内抑瘤及合用60 Co-γ射线放射增效实验,测定肿瘤质量、脾脏与胸腺质量等的变化,计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数,检测肿瘤中Bax和Bcl-2蛋白表达及小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量变化;②通过对荷瘤小鼠单核细胞吞噬系统(RES)进行实验,计算吞噬指数K及吞噬系数α对荷瘤小鼠迟发性免疫反应的实验,计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数。结果①DLC低、中和高剂量组以及MC1、MC2和MC3组对小鼠S 180肉瘤的抑瘤率分别为36.32%,45.06%,52.03%,36.11%,36.26%和45.08%;合用放疗(RT)抑瘤率分别为64.6%,69.4%,73.3%,62.7%,62.4%和68.6%;②DLC高、中、低剂量组以及MC1、MC2和MC3组小鼠的吞噬指数K及吞噬系数α均显著增加,能有效提高荷瘤小鼠细胞免疫的水平;③DLC中、高剂量组和MC3组肿瘤组织中Bcl-2阳性表达低于模型组,而Bax阳性表达高于模型组;RT+DLC 3个剂量组以及RT+MC3组肿瘤组织中Bcl-2阳性表达显著低于模型组,而Bax阳性表达显著高于模型组;④DLC中、高剂量组以及RT+MC3组小鼠血清中TNF-α的含量大于模型组,5-Fu可增加荷瘤小鼠血清TNF-α含量,小于DLC高剂量组;RT+DLC中、高剂量组以及RT+MC3组小鼠血清中TNF-α的含量大于模型对照组,5-Fu组可增加荷瘤小鼠血清TNF-α的含量,小于DLC高剂量组。结论DLC、MC1、MC2与MC3对小鼠S 180肉瘤的生长有明显的抑制作用,具有放射增敏效应,同时说明MC1、MC2和MC3可能是DLC的主要功效成分,其作用机制可能与免疫调节、促进TNF-α产生及调节Bcl-2/Bax凋亡通路有关。

艽龙胶囊对伴刀豆蛋白致小鼠急性肝损伤的保护与机制研究

目的研究艽龙胶囊(JLC)对伴刀豆蛋白(ConA)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法将BALB/c小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组(灌服生理盐水0.02 mL·g^-1)、阳性对照组(灌服双环醇0.039 g·kg^-1)及JLC低、中和高剂量组(分别灌服JLC 0.25,0.50和1.00 g·kg^-1,连续3 d)。末次给药1 h后,除正常对照组外,其余组均静脉注射ConA 0.02 g·kg^-1,诱导小鼠急性肝损伤模型。8 h后取材,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)水平,检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,同时计算小鼠肝指数、脾指数和病死率。结果6组小鼠病死率比较差异无统计学意义;6组小鼠肝指数、脾指数、血清ALT、AST、IL-4、TNF-α和IFN-γ水平及肝组织MDA和SOD含量比较差异均有统计学意义(P<0.05);与正常对照组比较,模型组与阳性对照组的肝指数、脾指数、血清ALT、AST、IL-4、TNF-α和IFN-γ水平以及肝组织MDA和SOD含量差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组及JLC低、中和高剂量组正向作用指标值(肝指数、脾指数、血清ALT、AST、IL-4、TNF-α和IFN-γ水平及肝组织MDA和SOD含量)差异均有统计学意义(P<0.05)。结论JLC对ConA诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用,该作用可能通过抗炎和免疫调节来实现。

HPLC法测定艽龙胶囊中马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、异荭草苷和异牡荆黄素

目的建立HPLC法同时测定艽龙胶囊中马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素的方法。方法采用Intersil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长:254 nm;体积流量:0.8 mL/min;柱温:25℃;进样量:10μL。结果马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素分别在21.20~2120.00、3.20~320.00、15.00~1500.00、5.10~51.00、39.00~3900.00、4.20~420.00、2.20~220.00、1.10~110.00μg/mL与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.37%、97.28%、96.49%、99.37%、97.28%、96.49%、99.37%、97.28%,RSD值分别为1.64%、1.16%、1.85%、1.64%、1.16%、1.85%、1.64%、1.16%。结论方法简便、重复性好,结果准确可靠,可为进一步完善艽龙胶囊的质量评价方法提供参考依据。