不同纯度枸杞多糖对光诱导人RPE细胞氧化应激损伤保护作用研究

目的:观察不同纯度枸杞多糖(LBP)对光诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的抗氧化作用。方法:体外培养人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19),建立光诱导下hRPE细胞损伤模型,加入不同纯度的枸杞多糖(50%、65%)对hRPE细胞进行干预并于24h后进行相应指标检测。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术(FCM)检测细胞内活性氧自由基(ROS)、细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。实验组分为正常组、模型组、不同纯度枸杞多糖(50%、65%)干预组。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率明显降低,SOD活力明显下降,ROS、MDA明显升高(P<0.01);与模型组比较,不同纯度枸杞多糖(50%、65%)干预组细胞存活率明显升高,SOD活力明显上升,ROS、MDA呈下降趋势(P<0.01);65%枸杞多糖组较50%枸杞多糖组细胞存活率明显升高,SOD活力呈上升趋势,ROS、MDA明显下降(P<0.01)。结论:枸杞多糖可保护光诱导的hRPE细胞氧化损伤,随着枸杞多糖纯度提高,其保护作用更显著。

枸杞多糖通过miRNA-21-5p靶向PTEN调控PI3K/Akt/mTOR通路抗人视网膜色素上皮细胞光损伤机制

目的:研究枸杞多糖(LBP)对光诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡作用的影响及其保护机制。方法:将体外培养的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)随机分为空白对照组,模型组,枸杞多糖低、中、高剂量组,建立人RPE细胞光损伤模型,于光照24h后进行相应指标检测。采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测miRNA-21-5p、PTENmRNA表达水平;WesternBlot法检测PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、P-mTOR蛋白表达量。结果:与空白对照组比较,模型组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,miRNA-21-5p表达显著下降,PTENmRNA表达显著升高,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平显著降低,PTEN蛋白表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,枸杞多糖低、中、高剂量组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著下降,miRNA-21-5p表达显著升高,PTENmRNA表达均显著降低,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平均显著升高,PTEN蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01);与LBP低剂量组比较,中、高剂量组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,miRNA-21-5p表达显著升高,PTENmRNA表达显著降低,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平均显著增高,PTEN蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01);LBP高剂量组与LBP中剂量组相比细胞存活率显著上升,细胞凋亡率显著降低,miRNA-21-5p表达显著上升,PTENmRNA表达显著下降,mTOR、PI3K、Akt磷酸化水平均显著升高,PTEN蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:枸杞多糖可抑制光诱导下ARPE-19细胞凋亡,其机制可能是通过上调miRNA-21-5p、下调PTENmRNA表达,从而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路来增强保护RPE细胞对抗光损伤作用,且呈浓度依赖性。