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溶藻弧菌外膜蛋白OmpU的克隆、表达条件优化及多克隆抗体制备 被引量:3
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作者 刘祥 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期699-705,共7页
Omp U蛋白为溶藻弧菌主要外膜蛋白,具有很好的免疫原性,在疫苗上有很好的应用前景。本试验通过分子克隆获得Omp U蛋白的表达菌株,利用切胶纯化获得Omp U蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度为1∶3200倍,WesternBlottin... Omp U蛋白为溶藻弧菌主要外膜蛋白,具有很好的免疫原性,在疫苗上有很好的应用前景。本试验通过分子克隆获得Omp U蛋白的表达菌株,利用切胶纯化获得Omp U蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度为1∶3200倍,WesternBlotting法检测抗血清特异性较好。通过正交试验,获得Omp U菌株的最佳表达条件为:诱导时菌液OD600值1,加IPTG终浓度0.1mmol/L,诱导时间8 h,温度32℃;最佳培养条件为:葡萄糖浓度0.4%,转速230 r/min,装液量50 m L。为Omp U工业发酵、蛋白功能与疫苗开发研究奠定基础。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 OmpU蛋白 多克隆抗体 正交试验
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猪链球菌Lmb、Sao、ZnuA蛋白的抗原表位、二级结构分析及重组表位疫苗分子的设计 被引量:3
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作者 刘祥 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期181-187,204,共8页
[目的]利用生物信息学方法设计猪链球菌候选疫苗蛋白Lmb、Sao、Znu A的重组表位多肽分子。[方法]通过ABCpred和Bepi Pred方案,预测猪链球菌Lmb、Sao、Znu A蛋白的B细胞表位。运用神经网络与量化矩阵法预测蛋白的CTL表位。使用MHC-Ⅱ类... [目的]利用生物信息学方法设计猪链球菌候选疫苗蛋白Lmb、Sao、Znu A的重组表位多肽分子。[方法]通过ABCpred和Bepi Pred方案,预测猪链球菌Lmb、Sao、Znu A蛋白的B细胞表位。运用神经网络与量化矩阵法预测蛋白的CTL表位。使用MHC-Ⅱ类分子结合肽预测蛋白的Th表位。采用DNASTAR软件与SOPMA服务器预测蛋白二级结构,进而验证获得的B/T细胞表位的准确性。通过DNASTAR Protean软件重组拼接获得的B/T细胞抗原表位,设计抗原性较好的猪链球菌重组表位多肽。[结果]猪链球菌Lmb、Sao、Znu A蛋白的优势B细胞表位数分别为4个、4个和3个;CTL表位数各为1个;Th表位数分别为2个、1个和1个。二级结构预测显示这些表位大多处于蛋白易于产生表位的暴露表面、无规则卷曲与转角等位置。并设计获得抗原性较好的重组表位多肽。[结论]设计了抗原性较好的猪链球菌Lmb、Sao、Znu A蛋白的重组表位多肽。 展开更多
关键词 猪链球菌 细胞表位 蛋白结构 重组表位多肽
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