用多位点序列分析技术鉴定9株产高光学纯度D-乳酸野生菌株

目的对从某发酵食品中分离纯化出的9株产高光学纯度D-乳酸的野生菌株(SZD菌株)进行鉴定。方法先结合表型特征及16SrRNA基因序列分析将SZD菌株鉴定到种的水平,再通过综合分析hsp60、pheS、rpoA及tuf基因的多位点序列分析(MLSA)技术将其鉴定到亚种的水平。结果 SZD菌株的16SrRNA基因序列与棒状乳杆菌扭曲亚种及棒状亚种相应序列的相似率均达99.9%以上。SZD菌株的pheS基因序列与棒状乳杆菌棒状亚种及扭曲亚种的相应序列的相似率分别为100%和97.87%,而rpoA基因序列与棒状乳杆菌棒状亚种及扭曲亚种的相应序列的相似率分别为98.65%和100%;tuf基因序列与棒状乳杆菌两个已知亚种相应序列的相似率均为99.00%以上,而hsp60基因序列与棒状乳杆菌两个已知亚种相应序列的相似率均为99.00%以下。在用应用算术平均数的非加权成组配对法构建的基于16SrRNA、hsp60、tuf和pheS基因的进化树中,SZD菌株独立于棒状乳杆菌的两个已知亚种而自成一支。因此,将SZD菌株鉴定为棒状乳杆菌的一个新亚种。结论结合表型特征及16SrRNA基因序列分析将SZD菌株鉴定为棒状乳杆菌,最后通过基于hsp60、pheS、rpoA及tuf基因的MLSA技术将其鉴定为棒状乳杆菌一个新的亚种。

Chelex-100法快速提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA

目的探索一种快速、高效提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA的方法。方法采用Chelex-100法提取14株革兰氏阳性杆菌的基因组DNA,利用PCR技术扩增16SrRNA基因及4个单拷贝管家基因以评价提取核酸的质量。结果 Chelex-100法能够在20min内从革兰氏阳性杆菌中提取出基因组DNA,所提取的DNA可直接用于PCR扩增。所有菌株的16SrRNA基因及棒状乳杆菌的4个单拷贝管家基因均扩增成功,PCR产物经电泳检测目的条带清晰特异,与预期目的片段长度相符。结论 Chelex-100法具有快速、高效、安全、经济的特点,采用这种方法提取的革兰氏阳性杆菌的基因组DNA可直接作为PCR扩增的模板。

用API50CH系统鉴定9株产高光学纯度D-乳酸野生菌株

目的对从某发酵食品中分离纯化出的9株产高光学纯度D-乳酸的野生菌株(SZD菌株)进行鉴定。方法用API 50CH碳水化合物鉴定试剂条对9株SZD菌株进行碳水化合物发酵试验,根据碳水化合物发酵试验结果对其进行鉴定。结果利用API 50CH系统将9株SZD菌株鉴定为棒状乳杆菌。结论 API 50CH系统简单快捷,可将乳酸杆菌鉴定至种的水平。

应用16 S rRNA基因序列分析快速鉴定临床标本中的革兰氏阳性杆菌

目的探索一种快速鉴定临床标本中革兰氏阳性杆菌的方法。方法利用PCR技术扩增待检菌株的16 S rRNA基因序列,通过分析待检菌株的16 S rRNA基因序列对其进行鉴定。结果 5株待检菌株的16 S rRNA基因序列均成功扩增,其中4株的16 S rRNA基因序列与基因库中已注册的核酸序列相似率达99.9%以上,将其鉴定到种的水平,1株的16 S rRNA基因序列与基因库中雷弗森菌属的核酸序列相似率为97.09%,将其鉴定为雷弗森菌属。结论应用16 S rRNA基因序列分析可快速、准确地鉴定临床标本中的革兰氏阳性杆菌。

棒状乳杆菌4个管家基因PCR引物的设计与验证

目的探索一种为棒状乳杆菌管家基因设计PCR引物的方法,并验证所设计引物的PCR扩增效率和特异性。方法先用在线引物设计工具Primer-BLAST为棒状乳杆4个菌管家基因设计PCR引物。然后用软件oligo 6.44评价引物的各项参数,综合考虑PCR引物设计的各项原则,人工筛选出最佳引物,最后通过PCR扩增验证引物的效率和特异性。结果每个管家基因用Primer-BLAST程序设计得到10对引物,最后各选出1对引物。经PCR扩增验证,这些引物不仅效率高,而且特异性好。结论本研究所用的引物设计方法简单实用,用于设计棒状乳杆菌管家基因PCR引物效果理想。

hs-CRP在老年人社区获得性肺炎中的临床价值

目的探讨超敏C-反应蛋白(hs-CRP)在老年人社区获得性肺炎(CAP)中的临床价值。方法观察82例老年人CAP患者治疗前和治疗后血清hs-CRP浓度、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比(N)、红细胞沉降率(ESR)、体温及痰培养变化情况,进行统计学分析。结果 82例CAP患者入院时hs-CRP水平显著高于正常水平,给予抗感染治疗7d后hs-CRP水平明显降低,与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.01)。入院时hs-CRP阳性率为95.12%,明显高于WBC、N、ESR、体温和痰培养阳性率,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 hs-CRP可作为老年人CAP诊断和疗效评估的敏感指标。

中心静脉导管治疗自发性气胸26例

目的探讨用单腔中心静脉导管微创置入胸腔治疗自发性气胸的临床效果。方法对26例自发性气胸病人,均先用单腔中心静脉导管微创置入胸腔,置管后单纯抽气12例,接水封瓶持续负压引流排气14例。结果26例自发性气胸治愈20例,好转4例,无效2例,治愈好转率92.3%,仅3例出现并发症。结论采用单腔中心静脉导管微创置入胸腔治疗自发性气胸,疗效显著,并发症少,值得在临床推广应用。

胸腔内注射尿激酶治疗包裹性胸腔积液32例

目的探讨胸腔内注射尿激酶治疗结核性包裹性胸腔积液的疗效。方法对32例结核性包裹性胸腔积液患者,B超定位后行微创胸腔闭式引流,通过引流管向胸腔内注射尿激酶10～20万U,夹管4～6h后放开引流,必要时反复注射尿激酶。结果32例中,显效7例,有效23例,无效2例,总有效率93.8%,平均引流量364ml。结论微创胸腔闭式引流并胸腔内注射尿激酶治疗结核性包裹性胸腔积液,疗效确切。