掌叶大黄转录因子RpMYB4基因克隆及分子表达特性

MYB转录因子在植物生长发育、次生代谢及逆境胁迫等过程中发挥重要的转录调控作用。本实验在掌叶大黄转录组数据库中筛选一个包含完整开放阅读框(ORF)的MYB家族成员序列,首次克隆获得RpMYB4基因ORF,编码一条245个氨基酸的多肽,分子质量为26.99 kDa,N端含有R^(2)R3-MYB亚家族典型的2个DNA保守结合域(HTH-MYB),无信号肽或跨膜域,与其他植物物种MYB转录因子多序列比对均高达61%以上,系统进化分析显示与FtMYB8关系最近,共同聚在S4亚家族。亚细胞定位结果显示RpMYB4-GFP定位在烟草细胞核内。实时荧光定量分析表明RpMYB4的组织表达有差异,叶中表达量最高,依次为叶柄、根茎、根及种子;受200μmol·L^(-1)茉莉酸甲酯(MeJA)处理,RpMYB4表达在24 h内持续下调,200μmol·L^(-1)水杨酸(SA)处理在12和24 h显著上调,该基因对200μmol·L^(-1)脱落酸(ABA)处理未见明显变化;RpMYB4基因受干旱、高温及损伤胁迫诱导,分别在24、24、3 h处达峰值,低温胁迫抑制其表达,6 h呈谷值,其对盐胁迫响应不显著。首次获得掌叶大黄RpMYB4基因,在叶片和叶柄中表达量高,受激素SA与干旱、高温及损伤胁迫等诱导表达,为后续研究其在大黄次生代谢及逆境胁迫中的分子作用奠定基础。