慢性乙型肝炎患者肝组织乙型肝炎病毒cccDNA和血清病毒学标志物相关性的研究

目的探讨CHB患者血清病毒学标志物及肝组织、血清HBV DNA与肝组织HBVcccDNA的关系。方法应用实时荧光定量法进行20例CHB患者肝组织HBVcccDNA、肝组织及血清HBV DNA定量的测定,时间分辨荧光免疫分析法进行HBsAg、HBeAg、HBcAb等血清学标志物的测定,分析肝组织HBVcccDNA与肝组织HBV DNA、血清HBV DNA、HBsAg及HBeAg定量水平之间的关系。相关性分析采用Spearman相关性检验。结果所有患者肝组织中均能检测到HBVcccDNA,含量在7.63×10~4拷贝数/mg^9.46×10~8拷贝数/mg(对数值:7.55±1.08)之间;肝组织HBVcccDNA与肝组织HBV DNA呈显著正相关关系(r=0.859,P<0.01),与血清HBV DNA呈显著正相关关系(r=0.640,P<0.01);肝组织HBVcccDNA与HBeAg呈显著正相关(r=0.676,P<0.01),与血清HBsAg无相关性(r=0.195,P>0.05),与HBcAb呈显著负相关(r=-0.624,P<0.01)。结论 CHB患者肝组织内HBVcccDNA呈稳定的中等水平复制;血清HBsAg定量尚不能作为反映肝组织中HBVcccDNA水平的指标,结合肝组织HBV DNA、血清HBV DNA等定量检测可以更全面反映HBV复制水平及患者病情评估。

肝组织中β-actin定量检测方法的建立

目的构建检测肝组织中内参基因β-actin的标准品。方法以成人外周血细胞的总RNA为模板、反转录合成cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人β-actin基因相应的cDNA目的片段,以pMD18-T为载体,构建形成重组质粒,电泳、鉴定测序后,用荧光定量PCR制作标准曲线。结果外周血提取的总RNA完整性良好,构建的β-actin质粒经PCR扩增后得到1条285 bp的清晰条带,测序结果与目的片段完全一致,且质粒的原始浓度为5.0×10^(13)拷贝数/mL,倍比稀释至1.0×10~2拷贝数/mL均能得到良好的标准曲线(R^2=0.999)。结论构建β-actin基因荧光定量PCR标准质粒成功。