miRNA-4497靶向PEA15对视网膜母细胞瘤细胞增殖及药物敏感性研究

目的探讨miRNA-4497通过靶向PEA15对视网膜母细胞瘤(Rb)Y79细胞株增殖及对奥沙利铂药物敏感性的影响。方法收集2017年1月—2019年12月病理确诊的Rb患者27例,取其肿瘤组织及瘤旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miRNA-4497表达。使用慢病毒感染的方法构建过表达组及阴性对照组Y79细胞。RT-qPCR检测感染效果。CCK8法检测2组细胞的增殖能力及对奥沙利铂的药物敏感性。荧光素酶报告基因验证miRNA-4497的潜在靶点。RT-qPCR和Western blot检测2组细胞中靶基因的表达水平。结果(1)miRNA-4497表达:在Rb组织中表达升高,差异有统计学意义(t=14.590,P=0.000)。miRNA-4497在过表达组细胞中的表达水平显著高于阴性对照组(t=16.150,P=0.000)。(2)对Y79细胞增殖的影响:相对于阴性对照组,miRNA-4497过表达组细胞增殖速度从第3 d开始明显增高,2组细胞增殖速度的差异具有统计学意义(t_(3 d)=6.500,t_(4 d)=7.691,均P=0.000)。(3)药物敏感性:奥沙利铂浓度为0.125μM时,2组细胞生长抑制率的差异无统计学意义(P>0.05),在浓度为0.25、0.5、1、2μM时,过表达组细胞的生长抑制率比对照组低,且差异具有统计学意义(t_(0.25μM)=4.277,t_(0.5μM)=7.547,t_(1μM)=8.302,t_(2μM)=8.302;均P=0.000)。(4)荧光素酶活性检测:双荧光素酶报告基因显示miRNA-4497能够与PEA15靶向结合,与阴性对照组比较有统计学意义(t=5.514,P=0.000)。(5)PEA15的蛋白及mRNA表达:与阴性对照组相比,miRNA-4497过表达组细胞中PEA15 mRNA表达水平显著降低(t=77.856,P=0.000),PEA15蛋白水平明显降低。结论miRNA-4497可通过靶向PEA15促进人Rb细胞株Y79的增殖水平,降低对奥沙利铂的药物敏感性。