医学院校线上教学质量和效果的影响因素与改进方法研究

近几年在一些特殊情况下,例如在常态化新冠防控过程中,师生们主要通过互联网教学平台实现教学信息的互通互动,线上教学成为主要的教学形式。医学院校的高校学生课时量大、课程门类多、学制长、课程学习中需要记忆的知识点多而杂,随着线上教学的规模逐渐增大,时间逐渐延长,一些网络教学平台的不足和线上教学过程中出现的问题日趋凸显,严重影响了其教学效果的保证,制约了教学质量的提高。本文总结了近两年医学院校线上教学过程中出现的常见问题,结合医学院校实际情况,提出创新线上教学方法和保证线上教学质量和效果的措施,为解决同类线上教学中出现的问题提供借鉴。

非诺贝特和辛伐他汀对非酒精性脂肪肝小鼠线粒体功能的作用研究

目的 探讨非诺贝特和辛伐他汀对高脂饮食导致的非酒精性脂肪肝(non-alcohol fatty liver disease, NAFLD)的肝质蓄积及其线粒体功能相关信号通路的作用。方法 将40只雄性6周龄的C57BL/6J小鼠,分为4组,对照组(正常饮食)、模型组(高脂饮食14周)、非诺贝特组(高脂饲养14周,第11周开始给予非诺贝特灌胃0.04 g/(kg·d)干预治疗4周)、辛伐他汀组(高脂饲养14周,第11周开始给予辛伐他汀灌胃0.004 g/(kg·d)干预治疗4周)。本研究从NAFLD模型小鼠的体重,肝重量和肝指数,血清生化指标,病理变化、氧化应激和线粒体功能指标、相关信号通路等方面验证线粒体功能在NAFLD病理发生中的作用,并探讨非诺贝特和辛伐他汀对NAFLD模型小鼠的线粒体功能作用机制。结果 NAFLD模型组小鼠的体重、肝重量和肝指数、血清生化指标、氧化应激指标、肝病理、线粒体功能指标与对照组差异显著(P<0.05);非诺贝特和辛伐他汀改善了客观指标。结论 非诺贝特和辛伐他汀通过上调线粒体功能相关信号通路PPARα/PGC-1α的表达,促进肝细胞线粒体的β氧化,降低肝的氧化应激损伤和脂质蓄积。

新工艺妇炎舒对大鼠慢性输卵管炎治疗作用的研究

目的观察新工艺妇炎舒对慢性输卵管炎模型大鼠的影响,初探其治疗机制。方法采用苯酚胶浆法造成大鼠慢性输卵管炎模型,给药后观察大鼠输卵管组织形态学及血液流变学的变化。结果妇炎舒对大鼠体重改变无明显影响。与模型相比,大剂量妇炎舒明显改善大鼠输卵管病理学改变,降低血液粘度及红细胞刚性指数;中低剂量妇炎舒可改善大鼠输卵管壁病理学改变,降低血液粘度及红细胞刚性指数。与妇炎舒(原)相比,大剂量妇炎舒明显改善大鼠输卵管壁固有层、浆膜及浆膜下改变,降低中高切血液粘度、红细胞刚性及变形指数。结论妇炎舒对苯酚胶浆剂致大鼠慢性输卵管炎有治疗作用,作用机制与改善血液循环有关,且工艺优化后妇炎舒治疗作用明显提高。

烟酸和烟酸受体激动剂在动脉粥样硬化中的研究进展

心脑血管疾病是人类的死因之首,动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是其发生的病理基础。他汀类药物有明确的降血脂功效,可改善As,但其对某些高脂血症患者无效,长期使用可引发严重不良反应。烟酸(niacin,NA)可通过激动其受体GPR109A,产生独特降脂、抗炎、保护内皮作用,与他汀类联用,可明显改善As。该文从烟酸抗As作用、烟酸受体、新型受体激动剂、与他汀类联合用药四个方面,综述了烟酸与烟酸受体研究进展,以期为基于烟酸受体激动剂的抗As药物研发提供新思路。

骨膜蛋白—一种有潜力的疾病早期诊断分子标志物

骨膜蛋白(periostin,POSTN)是一种在骨组织中发现的分泌型细胞外基质蛋白,在进化中保守,易于通过患者血液、尿液和组织间液等体液样品检测,在体内多种组织中表达,其表达水平与多种疾病发生发展密切相关,有望成为一种有潜力的疾病早期诊断的分子标志物。该文系统综述了POSTN表达水平与心肌梗死、血管钙化、骨代谢相关疾病、慢性肾病与各种癌症发生发展的关系,探讨其作用与机制,为基于POSTN的疾病早期诊断试剂盒与药物研发提供科学依据。

ApoA-Ⅰ模拟肽抗动脉粥样硬化的研究进展

载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,ApoA-Ⅰ)是高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)的主要蛋白成分,在胆固醇逆转运(reverse cholesterol transport,RCT)中发挥关键作用,是抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)药物研发的重要靶标。靶向ApoA-Ⅰα螺旋研发的模拟肽和基于重组ApoA-Ⅰ研发的HDL模拟肽已进入临床试验,展示了良好的促RCT与抗As活性。本文综述了ApoA-Ⅰ的结构和功能,ApoA-Ⅰ与ABCA1(ATP-binding cassette transporter A1)、LCAT(lecithin cholesterol acyl transferase)、SR-B1(scavenger receptor class B type 1)的分子互作机制,总结了靶向ApoA-Ⅰ模拟肽的研究进展,以期为模拟肽类抗As新药研发提供参考。

线粒体功能调控动脉粥样硬化的研究进展

血管内皮细胞损伤、巨噬细胞吞噬脂质泡沫化以及平滑肌细胞的增殖和迁移是动脉粥样硬化的主要病理特征。线粒体是细胞的“ATP工厂”,高脂应激造成线粒体氧化磷酸化效率降低,ATP合成受阻,活性氧生成增加,脂质蓄积形成脂质核心。重要事件包括过氧化物酶体增殖物激活受体α和过氧化物酶体增殖物激活受体γ协同激活因子-1α表达降低,线粒体DNA生物合成减少,线粒体膜电位降低,ATP含量下降,活性氧累积。现探讨动脉粥样硬化病理发生过程中的线粒体功能与临床干预治疗,为动脉粥样硬化的靶向干预治疗提供思路。

氢气在治疗类风湿关节炎中的研究进展

近年来,氢气(hydrogen,H2)作为一种医疗气体,逐渐受到关注。H2能够通过气体吸入、口服、静脉注射或局部给药(如以滴眼液)等方式进入人体发挥生物学效应。H2具有抗氧化、抗炎及抗凋亡等作用,其对多种疾病包括类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗效果已经在大量研究中得到证实。RA是一种系统性、慢性、自身免疫性疾病,主要表现为关节组织的炎症反应,发展至中后期可累及多脏器受损,严重影响患者生存质量,目前尚无根治方法,RA患者往往需要长期甚至终身服药。由于H2的毒副作用极低,能够通过多种机制改善RA的炎症进展,因此,在RA的治疗中具有较好的应用前景。本文主要综述了目前H2在治疗类风湿关节炎中的研究现状及未来展望。

敲低lncRNA H19抑制人THP-1细胞来源的巨噬细胞脂质蓄积的作用机制

目的研究长链非编码RNA H19(lncRNA H19)对高脂应激作用下巨噬细胞脂质蓄积的作用及其机制。方法采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育人THP-1细胞来源的巨噬细胞,用H19小干扰RNA(H19 siRNA)处理观察其对脂质蓄积的影响。THP-1细胞分为对照组(常规培养)、ox-LDL组、siRNA阴性对照(NC siRNA)联合ox-LDL处理组、H19 siRNA联合ox-LDL处理组。油红O染色测定细胞中的脂质积聚,酶法测定胆固醇浓度;ATP试剂盒检测细胞ATP含量;比色法检测细胞氧化应激指标、采用ELISA检测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平。Western blot法检测ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活子1α(PGC-1α)、核因子κB p-p65(NF-κB p-p65)的蛋白表达。结果敲低H19显著抑制细胞内脂质蓄积,降低总胆固醇(TC)和胆固醇酯(CE)含量,CE/TC比值显著降低。敲低H19显著减轻高脂应激导致的细胞损伤,包括ATP含量增加,氧化应激水平降低并减少MCP-1的水平。敲低H19上调THP-1细胞中ABCA1、PPARα和PGC-1α的蛋白表达,下调NF-κB信号通路。结论敲低H19通过上调THP-1细胞PGC-1α表达、下调NF-κB信号通路促进胆固醇逆转运、抑制炎症反应进而减缓脂质蓄积。

香烟提取物对人脐静脉内皮细胞蛋白亚硝基化的影响及机制

目的探讨香烟提取物(CSE)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)蛋白亚硝基化的影响。方法以HUVEC为体外模型,利用免疫荧光染色对细胞蛋白亚硝基化进行检测,并用生物素转化方法对荧光结果进行验证;利用Western blot对蛋白进行了检测;另外,在实验过程中,对超氧阴离子水平也进行了检测。结果不同浓度CSE(0.005%、0.01%、0.02%和0.04%)均能够明显减少蛋白的亚硝基化水平,且随着浓度增加,蛋白亚硝基化水平减少越明显。NO供体药物硝普钠(SNP)、内源性供体亚硝基谷胱甘肽(GSNO)、长效NO供体NO亲和复合体(NONOate)和NADPH氧化酶抑制剂加拿大麻素均能够恢复被CSE所导致的蛋白亚硝基化减少。另外,CSE能够增加超氧阴离子水平,这种作用能够被加拿大麻素所抑制。结论 CSE能够减少HUVEC蛋白亚硝基化水平。这种作用与其激活NDAPH氧化酶所引起的超氧阴离子积聚和NO产生通路的阻断有关。

噬菌体文库与计算机模拟筛选H1N1流感病毒血凝素结合位点的比较

目的:对H1N1流感病毒血凝素HA的抗原表位初步筛选。方法:用噬菌体展示文库对2株抗体的结合位点进行筛选,将筛选的抗原位点结合HA序列进行多肽合成,免疫小鼠制备单克隆抗体,通过分子生物学手段对4株抗体的轻链和重链可变区基因进行调取,通过计算机模拟抗体序列结合的抗原的结构域,推测抗体结合的氨基酸位点。结果:噬菌体文库筛选得出抗体的结合序列富含组氨酸和精氨酸,将针对多肽的单克隆抗体的序列和前期获得的2株抗HA单克隆抗体的序列比对分析,发现A1-8和anti-14p结合的HA抗原序列相一致,H1-13和anti-11p结合的HA抗原序列相一致。结论:通过将噬菌体展示文库技术和计算机模拟预测抗原抗体结合,可以有效筛选抗原表位,为流感病毒HA抗原表位预测方法的完善提供理论基础。

大鼠肠系膜动脉的立式包埋及内皮损伤的评估方法

目的建立一种新的小血管立式包埋方法,并通过对内皮损伤的定量分析来评估血管的功能。方法(1)肠系膜动脉的分离:首先游离大肠小肠部分至体外,暴露出肠系膜动脉,随后用剪刀游离出带有少量组织的肠系膜动脉,最后在镜下剔除黏连组织;(2)肠系膜动脉的立式包埋;(3)HE染色、免疫荧光染色观察肠系膜动脉的结构和内皮损伤程度。结果大鼠肠系膜动脉立式包埋及血管内皮评估方法,能够快速、有效地得到良好形态的大鼠肠系膜动脉切片,并给出小血管病变的病理学研究方法。结论本方法能够降低病理切片的制作难度,为血管病变的研究提供了可借鉴的研究方法,可以进一步推广至其它动物或临床病人的小血管研究。

他汀类药物引起新发糖尿病风险升高的病理机制:LDLR介导胆固醇内流引起胰岛β细胞“脂毒性”

高血脂是心血管病与糖尿病的共同危险因素,然而临床上使用他汀类药物控制血脂却增加了患者新发糖尿病的风险。相反,家族性高胆固醇血症（FH）病人有较高的血脂并长期使用他汀类药物,这类患者罹患糖尿病的风险却降低了。考虑到FH病人主要是由低密度脂蛋白受体（LDLR）突变引起的,这使得LDLR介导的胆固醇代谢是否参与糖尿病的发病成为疑问。他汀类药物能够上调肝脏和某些组织的LDLR表达并促进胆固醇内流,有可能引起某些胰岛细胞＂脂毒性＂的发生。胰岛β细胞对胆固醇较敏感,少量胆固醇蓄积就能造成细胞功能障碍。本文旨在讨论LDLR在他汀类药物诱发的糖尿病中的病理角色,为降低该药的不良反应、促进2型糖尿病的防治提供新的思考。

二甲双胍对人膀胱癌细胞能量代谢的调控作用分析

目的:检测二甲双胍对人膀胱肿瘤细胞能量代谢的作用及分子机制。方法:将膀胱肿瘤细胞分为4组,分别用终浓度为0、20、40、60 mmol/L的二甲双胍处理,比色法检测各组葡萄糖的消耗和乳酸的生成,用ATP检测试剂盒检测各组ATP水平,用JC-1膜电位检测试剂盒检测二甲双胍对膀胱肿瘤细胞膜电位的影响,通过real-time PCR检测己糖激酶2(HK2)和电压依赖性阴离子通道(VDAC)的mRNA表达水平,采用Western印迹检测每组中HK2、VDAC、磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)的蛋白表达水平变化。结果:在20 mmol/L二甲双胍下,膀胱肿瘤细胞葡萄糖消耗增加,乳酸产生受到抑制,ATP产生和细胞线粒体膜电位降低,HK2、VDAC和p-STAT3的表达降低。结论:二甲双胍可能通过抑制HK2、VDAC和p-STAT3的表达来阻断膀胱肿瘤的糖酵解和线粒体功能,这为研究二甲双胍对肿瘤的抑制作用机制奠定了理论和实验基础。

重组与人血白蛋白功能一致性分析

目的通过对本研究构建的两种低蛋白血症模型SD大鼠的治疗作用,探讨重组白蛋白(rHSA)与人血白蛋白(HSA)在功能方面是否存在差异,为rHSA替代HSA用于临床治疗与其他应用提供科学依据和理论支持。方法本研究利用阿霉素与嘌呤霉素分别构建肾功能障碍型与高腹水型低蛋白血症大鼠模型,通过rHSA与HSA的治疗作用验证二者的功能一致性。结果与HSA相比,rHSA具有相似或更好的治疗效果,二者均能明显增加阿霉素或嘌呤霉素模型大鼠的日平均尿量,改善大鼠异常生化指标,改善大鼠肝肾功能,减少大鼠腹水量,降低大鼠死亡率。结论与HSA相比,rHSA有相似或更好的治疗效果,有能力替代HSA用于临床治疗或其他应用,本研究结果为rHSA的应用提供了科学依据和理论支持。

氢气与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(Alzheimers Disease,AD)是导致痴呆的最常见原因,脑内淀粉样β蛋白(Aβ)异常沉积是其主要病理特征。氧化应激和免疫衰老是AD发生过程中的重要环节。近年来,研究发现氢气在临床上多种疾病的治疗中表现出良好的效果,加之成本较低且对人体无明显的毒副作用,具有广阔的应用前景。大量的研究表明气氢气作为医用气体在脑疾病的治疗方面具有潜能,可明显改善AD患者的病情,但由于AD的发病机制十分复杂,相关机制的研究尚不够系统和深入。本文主要对现有关于氢分子在缓解AD发展过程中所发挥的作用及其潜在机制进行综述,同时,也期待有更多学者加入到该研究领域,以提供更多的理论支持和实验证据,相信氢分子医学时代的到来可为AD的治疗带来新的曙光。

HIF1α-shRNA表达载体的构建与鉴定

目的:构建HIF1α-shRNA表达载体并鉴定,为进一步研究其在肿瘤发生发展中的作用奠定基础。方法:设计合成两条互补的编码HIF1α-shRNA的DNA寡核苷酸单链,退火形成互补双链,后将退火产物与酶切线性化的表达载体pG1.1连接后,转化至感受态细胞DH5α中,提取重组质粒并酶切鉴定,挑取克隆正确的重组质粒去测序鉴定插入序列。结果:重组质粒酶切结果显示退火片段连接到pG1.1载体里,经测序分析重组质粒插入序列与合成的寡核苷酸序列一致。结论:HIF1α-shRNA表达载体构建成功,为后续研究提供基础。

H1N1流感病毒血凝素对人肺细胞的损伤作用及机制研究

目的:研究H1N1流感病毒血凝素HA对人胚肺成纤维细胞的损伤作用并初步探讨其机理。方法:合成2009 H1N1的HA基因全长,分别将HA的PCR产物和pEGFP-N1质粒经Hind Ⅲ和EcoRI酶切电泳、纯化、连接并转化大肠杆菌DH5α,构建真核表达质粒pEGFP-N1/HA。质粒转染293细胞,检测其转染效率,并收获细胞总蛋白进行Western blotting检测。将阳性质粒转染MRC-5细胞,CCK-8检测HA的表达对细胞增殖活性,线粒体膜电位检测试剂盒检测其对细胞的早期凋亡的影响,ATP检测试剂盒检测HA的表达对ATP水平的改变。结果:PCR电泳检测获得分子量为1700 bp左右的目的条带,菌落PCR鉴定HA片段成功插入pEGFP-N1载体。荧光显微镜下检测pEGFP-N1/HA转染293细胞有明显荧光,Western blotting结果显示pEGFP-N1/HA转染细胞有单一的目的蛋白表达。HA的表达可明显抑制MRC-5细胞活力,HA的高表达降低MRC-5细胞的线粒体膜电位及ATP水平。结论:H1N1流感病毒HA对人肺细胞的损伤作用可能与影响肺细胞的线粒体功能有关。

三株交叉反应性的流感病毒HA抗体与H1N1流感病毒的致病机制分析

目的:结合临床甲型流感病例分析流感病毒可能的致病机理。方法:收集87份陕西省2009年甲型H1N1流感重症,危重症及死亡病例的血常规参数,对其淋巴细胞、红细胞和血小板三个指标分析。制备针对甲型H1N1的单克隆抗体,采用抗体亚类鉴定试剂盒分析其抗体轻链和重链的亚型,通过血凝活性实验检测三株抗体的血凝抑制活性,通过ELISA检测三株抗体与人和小鼠的血红蛋白、红细胞、白细胞膜和血小板膜的反应,通过免疫组化分析三株流感病毒抗体与正常小鼠肺组织的结合。结果:流感病毒感染后的死亡病例中淋巴细胞、红细胞和血小板均明显降低。三株抗体与人和小鼠的淋巴细胞、红细胞和血小板均有不同程度的交叉反应;免疫组化结果同时也证实三株HA抗体与小鼠的肺组织有不同的结合力。结论:流感病毒致病的原因可能与流感病毒感染机体后产生的抗体可与血液和组织中的成分结合有关。

一个Smith-Lemli-Opitz综合征家系的临床特征和基因变异分析

目的对1个Smith-Lemli-Opitz综合征家系两例患儿进行临床表型和基因变异分析,探讨基因型与临床表型的相关性。方法收集家系成员的临床资料和家族史,采用全外显子组测序分析患儿致病基因,确定可疑变异位点后对家系成员行Sanger测序验证。结果该家系先证者及其妹妹临床均表现为喂养困难,面容异常,癫痫,智力和语言发育障碍等;第3胎生后表现为喂养困难、体重不增,重度营养不良,于6月龄不明原因死亡,未行基因检测。第4胎,男,体健。测序结果显示先证者及其妹妹均携带DHCR7基因(NM_001360.2)c.127G>T(p.Val43Phe)和c.820_825del(p.Asn274_Val275del)复合杂合变异,第4胎未检测到上述变异。这两个变异均未在文献及疾病相关数据库中报道,也未在正常人群数据库(1000G和gnomAD数据库)中收录。其中c.820_825del变异位于DHCR7蛋白的甾醇敏感区域,导致DHCR7蛋白第274位的天冬酰胺和275位的缬氨酸缺失,使蛋白长度变短,可能影响蛋白空间构象的稳定性,从而造成酶活性下降。c.127G>T变异位于蛋白的第一个跨膜区域,推测其会对蛋白的跨膜运输产生影响,且多种软件预测该变异有害。保守性分析结果提示上述3个氨基酸均处于蛋白的高度保守区域。结合本家系患儿的临床表型、家族史及基因检测结果,推测两例患儿均为DHCR7基因变异导致的Smith-Lemli-Opitz综合征。结论本家系丰富了Smith-Lemli-Opitz综合征的表型与基因型的数据,明确了患儿的遗传学病因,为该家系的遗传咨询提供了依据。