目的探讨腺相关病毒（AAV）介导的融合基因NT4-TAT—His—PR39对缺氧人脐静脉内皮细胞株ECV304内缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达的影响及其对缺氧环境鸡胚血管生成的影响。方法PCR技术和T载体克隆法克隆PR39基因，将编码PR39、穿膜肽TA...目的探讨腺相关病毒（AAV）介导的融合基因NT4-TAT—His—PR39对缺氧人脐静脉内皮细胞株ECV304内缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达的影响及其对缺氧环境鸡胚血管生成的影响。方法PCR技术和T载体克隆法克隆PR39基因，将编码PR39、穿膜肽TAT、6×His及NT4信号肽四个基因片段相连。磷酸钙沉淀法获得重组携带NT4-TAT—His—PR39的AAV载体，然后AAV．PR39感染ECV304，免疫细胞化学检测ECV304胞内6×His表达情况。在1％O2条件培养ECV304，免疫细胞化学测定AAV—PR39组和PBS组胞内HIF-1α蛋白表达。30只鸡胚随机分为AAV—PR39组、EV组和PBS组（各组n=10），分别在鸡胚尿膜囊（CAM）上加AAV—PR39、EV、PBS，然后每组各取5只鸡胚分别在低氧（5％O2）和常氧（21％O2）条件培养。图像软件Image Pro Plus（IPP）分析CAM血管密度。结果AAV—PR39组ECV304中检测到6XHis表达。低氧环境下，AAV—PR39组ECV304中HIF-1α蛋白表达明显高于PBS组，AAV—PR39组CAM血管密度明显大于其他两组。结论重组携带NT4-TAT-His-PR39的AAV载体能在ECV304中分泌表达，并提高缺氧细胞HIF-1α蛋白表达水平。重组AAV载体显著促进缺氧CAM血管生成，而对常氧CAM无此作用。展开更多
文摘目的探讨腺相关病毒（AAV）介导的融合基因NT4-TAT—His—PR39对缺氧人脐静脉内皮细胞株ECV304内缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达的影响及其对缺氧环境鸡胚血管生成的影响。方法PCR技术和T载体克隆法克隆PR39基因，将编码PR39、穿膜肽TAT、6×His及NT4信号肽四个基因片段相连。磷酸钙沉淀法获得重组携带NT4-TAT—His—PR39的AAV载体，然后AAV．PR39感染ECV304，免疫细胞化学检测ECV304胞内6×His表达情况。在1％O2条件培养ECV304，免疫细胞化学测定AAV—PR39组和PBS组胞内HIF-1α蛋白表达。30只鸡胚随机分为AAV—PR39组、EV组和PBS组（各组n=10），分别在鸡胚尿膜囊（CAM）上加AAV—PR39、EV、PBS，然后每组各取5只鸡胚分别在低氧（5％O2）和常氧（21％O2）条件培养。图像软件Image Pro Plus（IPP）分析CAM血管密度。结果AAV—PR39组ECV304中检测到6XHis表达。低氧环境下，AAV—PR39组ECV304中HIF-1α蛋白表达明显高于PBS组，AAV—PR39组CAM血管密度明显大于其他两组。结论重组携带NT4-TAT-His-PR39的AAV载体能在ECV304中分泌表达，并提高缺氧细胞HIF-1α蛋白表达水平。重组AAV载体显著促进缺氧CAM血管生成，而对常氧CAM无此作用。
