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结核分枝杆菌抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6和Rv2031c-Rv2626c重组腺病毒的构建及鉴定
被引量:
4
1
作者
王丽梅
姜泓
+1 位作者
康健
靳芊芊
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第3期191-195,共5页
目的构建表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6(AE)和Rv2031c-Rv2626c(R2)的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗的研究奠定基础。方法体外合成人延长因子1α(EF1α)启动子DNA序列,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,...
目的构建表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6(AE)和Rv2031c-Rv2626c(R2)的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗的研究奠定基础。方法体外合成人延长因子1α(EF1α)启动子DNA序列,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建含有CMV、EF1α双启动子的腺病毒穿梭载体。PCR扩增课题组前期构建的AE、R2融合蛋白基因,并依次亚克隆至上述腺病毒穿梭载体的CMV和EF1启动子下游,阳性重组穿梭质粒命名为pAd-AE-R2。将pAd-AE-R2与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装获得重组腺病毒,命名为Ad-AE-R2。RT-PCR法和间接免疫荧光法(IFA)对重组腺病毒表达的AE、R2融合蛋白的基因和蛋白表达水平进行鉴定。结果Ad-AE-R2瞬时转染的HEK293细胞中可转录表达AE、R2融合蛋白基因。IFA法采用Ag85B、ESAT-6、Rv2626c和Rv2031c 4种抗原的单克隆抗体可分别检测到Ad-AE-R2感染的巨噬细胞中具有特异性的绿色荧光,表明Ad-AE-R2能够在宿主细胞内表达AE、R2融合蛋白。结论成功构建并包装获得表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白AE、R2的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗研究奠定基础。
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关键词
结核分枝杆菌
多阶段抗原
AG85B
ESAT-6
Rv2031c
Rv2626c
重组腺病毒
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职称材料
结核病黏膜疫苗的研究进展
被引量:
1
2
作者
王丽梅
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第2期170-174,181,共6页
呼吸道黏膜免疫是机体抵御结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的第一道防线,是重要的抗MTB感染的保护性免疫,如何通过黏膜免疫,诱导黏膜免疫系统产生抗MTB感染的特异性免疫,是目前结核病疫苗研究的新方向。本文基于近年...
呼吸道黏膜免疫是机体抵御结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的第一道防线,是重要的抗MTB感染的保护性免疫,如何通过黏膜免疫,诱导黏膜免疫系统产生抗MTB感染的特异性免疫,是目前结核病疫苗研究的新方向。本文基于近年来结核病黏膜疫苗的研究,总结了不同类型疫苗的特点、黏膜免疫后的免疫学特性和免疫保护效果,展望了未来结核病黏膜疫苗的研究方向,希望能够对研发更加高效的结核病黏膜疫苗有所启示。
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关键词
结核病
结核分枝杆菌
疫苗
黏膜免疫
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职称材料
题名
结核分枝杆菌抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6和Rv2031c-Rv2626c重组腺病毒的构建及鉴定
被引量:
4
1
作者
王丽梅
姜泓
康健
靳芊芊
机构
陕西省西安市空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室
传染病诊疗中心
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第3期191-195,共5页
基金
陕西省重点研发计划(No.2019SF-090)。
文摘
目的构建表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6(AE)和Rv2031c-Rv2626c(R2)的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗的研究奠定基础。方法体外合成人延长因子1α(EF1α)启动子DNA序列,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建含有CMV、EF1α双启动子的腺病毒穿梭载体。PCR扩增课题组前期构建的AE、R2融合蛋白基因,并依次亚克隆至上述腺病毒穿梭载体的CMV和EF1启动子下游,阳性重组穿梭质粒命名为pAd-AE-R2。将pAd-AE-R2与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装获得重组腺病毒,命名为Ad-AE-R2。RT-PCR法和间接免疫荧光法(IFA)对重组腺病毒表达的AE、R2融合蛋白的基因和蛋白表达水平进行鉴定。结果Ad-AE-R2瞬时转染的HEK293细胞中可转录表达AE、R2融合蛋白基因。IFA法采用Ag85B、ESAT-6、Rv2626c和Rv2031c 4种抗原的单克隆抗体可分别检测到Ad-AE-R2感染的巨噬细胞中具有特异性的绿色荧光,表明Ad-AE-R2能够在宿主细胞内表达AE、R2融合蛋白。结论成功构建并包装获得表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白AE、R2的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗研究奠定基础。
关键词
结核分枝杆菌
多阶段抗原
AG85B
ESAT-6
Rv2031c
Rv2626c
重组腺病毒
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
multi-stage antigens
Ag85B
ESAT-6
Rv2031c
Rv2626c
recombinant adenovirus
分类号
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
结核病黏膜疫苗的研究进展
被引量:
1
2
作者
王丽梅
机构
陕西省西安市空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第2期170-174,181,共6页
基金
陕西省重点研发计划(No.2019SF-090)。
文摘
呼吸道黏膜免疫是机体抵御结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的第一道防线,是重要的抗MTB感染的保护性免疫,如何通过黏膜免疫,诱导黏膜免疫系统产生抗MTB感染的特异性免疫,是目前结核病疫苗研究的新方向。本文基于近年来结核病黏膜疫苗的研究,总结了不同类型疫苗的特点、黏膜免疫后的免疫学特性和免疫保护效果,展望了未来结核病黏膜疫苗的研究方向,希望能够对研发更加高效的结核病黏膜疫苗有所启示。
关键词
结核病
结核分枝杆菌
疫苗
黏膜免疫
Keywords
tuberculosis
Mycobacterium tuberculosis
vaccine
mucosal immunization
分类号
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6和Rv2031c-Rv2626c重组腺病毒的构建及鉴定
王丽梅
姜泓
康健
靳芊芊
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
4
下载PDF
职称材料
2
结核病黏膜疫苗的研究进展
王丽梅
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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