基于NLRP3炎症小体研究C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6对病毒性心肌炎细胞损伤的保护作用

目的:研究补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(C1q/tumor necrosis factor-related protein 6,CTRP6)对柯萨奇病毒B3(Coxsackie B3 virus,CBV3)诱导的病毒性心肌炎细胞损伤的调控作用,并探讨其可能的作用机制。方法:通过CBV3感染人心肌细胞系AC-16来建立病毒性心肌炎的体外细胞模型。通过表达质粒转染技术来实现CTRP6在心肌细胞中的过表达。细胞分为4组:正常组、CBV3组、CBV3+空载体组和CBV3+CTRP6载体组。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)方法检测mRNA表达水平。采用Western blotting方法检测蛋白表达水平。采用相应的试剂盒测量肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin-I,cTn-I)的活性水平。利用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick end labeling,TUNEL)检测细心肌细胞胞凋亡。利用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测量炎症因子浓度。采用RNA沉默技术来敲除AdipoR1在心肌细胞中的表达。结果:与正常组相比,CBV3感染组心肌细胞中CTRP6的表达水平显著降低(P<0.01)。CBV3感染心肌细胞显著提高CK-MB和cTn-I的活性水平,并增加凋亡细胞数量和炎症因子的释放(P<0.01)。与CBV3+空载体相比,CBV3+CTRP6载体组心肌细胞中的CK-MB和cTn-I的活性水平显著下降,凋亡细胞数量显著减少,炎症因子的释放显著降低(P<0.01)。与CBV3+空载体组相比,过表达CTRP6可显著抑制CBV3感染的诱导的NLRP3炎症小体的激活(P<0.01)。敲除AdiopR1则显著阻断CTRP6对心肌炎细胞损伤的保护作用(P<0.01)。结论:CTRP6通过作用于AdiopR1受体抑制NLRP3炎症小体的激活来减轻CBV3诱导的病毒性心肌炎细胞损伤。