白藜芦醇对血虚证小鼠模型的改善作用及诱导红系分化机制研究

目的 以血虚证小鼠模型和K562细胞为对象,研究白藜芦醇促进骨髓造血恢复及诱导红系分化的作用机制。方法 采用环磷酰胺诱导血虚证小鼠模型,BALB/c小鼠随机分为对照组,模型组,白藜芦醇低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg^(-1)),每组8只,连续给药10 d后,采用全自动血细胞分析仪检测小鼠外周血血常规;采用酶联免疫法(ELISA)分析小鼠血浆中白细胞介素-6(IL-6)、促红细胞生成素(EPO)浓度;流式细胞术检测不同浓度白藜芦醇对K562细胞凋亡、周期分布及细胞表面红系标志蛋白(CD71、CD235a)的影响;RT-qPCR检测红系分化相关基因(CD235a,CD71,GATA1,γ-globin,HBA1,HBB 和 ZFPM1)的表达,Western blot法检测JNK1/2/3和ERK1/2表达。结果 与模型组比较,白藜芦醇可不同程度提高模型组小鼠外周血中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、网织红细胞(RET)数量与血红蛋白(HGB)浓度(P<0.05),升高血浆中的IL-6、EPO浓度(P<0.05)。流式细胞术结果表明,白藜芦醇能够通过S期阻滞抑制K562细胞增殖,诱导其凋亡;与对照组相比,白藜芦醇能显著增加红系标志抗原CD71、CD235a阳性表达率,且存在浓度依赖性(P<0.05)。RT-qPCR结果表明,白藜芦醇可呈剂量依赖性上调CD235a、CD71、GATA1、γ-globin、HBA1、HBB等红系分化相关基因的表达(P<0.05)。Western blot结果表明,白藜芦醇可上调ERK1/2和JNK1/2/3蛋白的磷酸化水平。结论 白藜芦醇能够通过调节JNK通路和ERK通路,增加细胞表面抗原CD71、CD235a阳性表达,增加红系分化关键基因的表达,诱导K562细胞红系分化,并能改善小鼠由环磷酰胺所致的血虚证症状,为白藜芦醇促进造血的作用机制研究奠定基础。

鸡蛋中氯霉素标准物质的制备及应用

建立鸡蛋中氯霉素(CAP)标准物质的制备方法。选择健康的产蛋期母鸡,模拟自然环境下的饲养条件,在饲料中添加CAP投喂,收集鸡蛋,去壳,收集蛋液,采用冷冻干燥的方式将蛋液制成冻干粉;再经粉碎、混匀、分装、辐照灭菌制得CAP标准物质。结果表明:在辐照剂量6 kGy、辐照时间10 h的条件下,制得的CAP标准物质的特性值为(880±41)μg/kg,且均匀性与稳定性良好。

基于网络药理学和分子对接探讨复羽叶栾树种仁油治疗脂肪肝的作用机制

为了探究复羽叶栾树种仁油活性成分可能作用于脂肪肝治疗的药效物质基础、潜在靶标及作用机制,基于网络药理学手段和分子对接,获得复羽叶栾树种仁油中6种核心有效成分花生一烯酸、棕榈酸、亚油酸、油酸、芥酸、花生酸,筛选出治疗脂肪肝相关靶点69个,预测可能作用于ALB、IGF1、PPARα、PPARγ、SRC 5个核心靶点蛋白,通过活性成分与靶点相互作用发挥治疗脂肪肝的作用。复羽叶栾树种仁油治疗脂肪肝具有多成分、多靶点、多通路的作用特点。

栾树籽油对非酒精性脂肪肝的保护作用

为了促进栾树资源的开发和利用,通过体外细胞实验和体内动物实验研究了栾树籽油对非酒精性脂肪肝(NAFLD)的保护作用。体外实验采用游离脂肪酸(FFA)诱导人正常肝细胞系Lo-2,建立NAFLD细胞模型,观察栾树籽油的干预对Lo-2细胞脂肪变性以及甘油三酯(TG)含量的影响,观察栾树籽油对NAFLD细胞脂质堆积的影响。体内实验采用高脂饲料饲养诱导建立NAFLD小鼠模型,造模成功后连续灌胃给药7 d,取小鼠血清、肝脏组织,观察肝脏组织病理学,检测血清及肝脏组织总胆固醇(TC)、TG、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平,探讨栾树籽油对NAFLD小鼠肝脏的保护作用。结果显示:通过FFA诱导Lo-2建立NAFLD细胞模型,栾树籽油干预NAFLD细胞24 h后,Lo-2细胞增殖能力增强,显示出一定的细胞保护能力,油红O染色结果表明栾树籽油能显著减少FFA诱导的Lo-2细胞内脂质堆积,降低TG的含量,且呈剂量依赖性;NAFLD小鼠实验表明栾树籽油具有降低血脂、改善脂质沉积和保护肝脏的作用。综上,体内外实验均证明栾树籽油可减少细胞内脂质的积累,从而达到降脂效果。

基于网络药理学和实验验证探讨黄芩调控铁死亡逆转肿瘤耐药的作用机制

目的利用网络药理学技术和实验研究方法探究黄芩活性成分调控铁死亡逆转肿瘤耐药的药效物质基础、潜在靶标及作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP),以生物利用度(OB)≥30%且类药性(DL)≥0.18的条件筛选黄芩活性成分,使用UniProt数据库获得黄芩活性成分的对应靶点基因。在GeneCards、OMIM数据库中搜集肿瘤耐药的相关靶点。利用Cytoscape 3.7.0软件将获得的黄芩活性成分与肿瘤耐药的交集靶点,绘制“活性成分–作用靶点”网络,并借助CytoHubba插件获得活性成分度(degree)值排名,并分析关键核心靶点。通过DAVID数据库在线分析功能进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。利用FerrDb数据库获取铁死亡过程中的调控基因,将其与黄芩活性成分参与逆转肿瘤耐药性的靶点基因取交集,获得黄芩通过调控铁死亡过程逆转肿瘤多药耐药性的靶点基因。利用Discovery Studio软件进行化合物和核心靶点的分子对接。取处于指数生长期的ZR-75-30和HeLa细胞,加入不同终浓度(12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μmol/L)的汉黄芩素培养48 h,分别计算汉黄芩素联合铁死亡抑制剂(Fer-11μmol/L)、诱导剂(Erastin 20μmol/L和RSL38μmol/L)对肿瘤细胞生长的抑制率,检测汉黄芩素对肿瘤细胞ROS活力的影响。采用Western blotting法验证肿瘤蛋白53(TP53)的表达变化情况。结果共筛选出黄芩中包括汉黄芩素、β-谷甾醇、黄芩素、豆甾醇、金合欢素等在内的32个活性成分,以及前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、TP53、花生四烯酸-12-脂加氧酶(ALOX12)等在内15个作用靶标。通过介导白细胞介素-17(IL-17)、低氧诱导因子-1(HIF-1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)、肿瘤坏死因子(TNF)、C型凝集素受体、神经营养因子等信号通路调控铁死亡,从而发挥逆转肿瘤多药耐药的作用。细胞增殖实验的结果表明,汉黄芩素表现出抑制肿瘤细胞ZR-75-30和He La细胞增殖的作用。与汉黄芩素组比较,汉黄芩素与Fer-1联用后细胞抑制率有所下降;与Erastin和RSL-3联用后对细胞抑制作用明显增强(P<0.05、0.01)。与对照组相比,100μmol/L汉黄芩素可以显著促进ZR-75-30和HeLa细胞ROS含量以及HeLa细胞TP53蛋白表达的升高(P<0.05)。汉黄芩素与Fer-1联用时ROS含量、TP53蛋白表达明显下降;与Erastin和RSL-3联用后ROS含量、TP53蛋白表达明显升高(P<0.05、0.01)。结论黄芩调控铁死亡逆转肿瘤耐药具有多成分、多靶点、多通路的作用特点,揭示了其药效物质和作用机制。

Affibody分子在生物技术和医学应用中的研究进展

Affibody分子,也被称为亲和体或者多肽适体探针,属于非抗体蛋白质的骨架结构。因其区别于一般抗体分子的结构特征,具有相对分子质量小、靶向性高、亲和力强,以及结构稳定、耐高温、可化学修饰等优势,因此Affibody的应用研究与发展迅速,已广泛应用于诊断和治疗等领域。对Affibody技术的最新进展,尤其是已经进行转化的研究进行重点综述。

黄芩化学成分与药理作用研究进展

黄芩作为常用传统中药,历史悠久。研究表明,黄芩具有泻火除湿、止咳清肺、止血安胎之效,在中国中医药领域应用广泛。黄芩中药用活性成分以黄酮类为主,具有抗肿瘤、抗炎、抑病毒、抗氧化,保护肝脏和神经功能等多种药理活性。通过整理近年来黄芩相关的文献报道,对黄芩化学成分及药理作用进行了总结,为推进传统中药黄芩的开发应用提供参考。

通过式固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法测定动物源性食品中13种磺胺类药物

建立了通过式固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法测定动物源性食品中13种磺胺类药物的检测方法。动物源性食品经1%甲酸乙腈(V/V)或80%乙腈水溶液(含1%甲酸)(V/V)提取,氯化钠饱和,通过式固相萃取净化。使用Phenomenex Luna Omega C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm)进行分离,0.1%甲酸水溶液(V/V)和乙腈为流动相梯度洗脱。采用电喷雾电离(Electrospray ionization,ESI)和多离子检测模式(Multiple reaction monitoring,MRM)进行检测,基质匹配外标法定量。结果显示13种磺胺类药物在0.0005~0.050 mg/L范围内线性关系良好,r>0.995。在猪肉、鸡肉、鲈鱼、鸡蛋和猪肝5种典型基质中,0.5~100μg/kg添加浓度范围内,平均回收率在78.1%~101.3%,相对标准偏差均<10%。该方法操作简单、灵敏度高,可用于动物源性食品中13种磺胺类药物的测定。

槲皮素对黄药子致肝损伤小鼠的保护作用及其机制

目的探究槲皮素对黄药子致肝损伤的保护作用及其机制。方法将48只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、水飞蓟宾(100 mg/kg)组和槲皮素高、中、低剂量(80、50、20 mg/kg)组。对照组ig 0.5%羧甲基纤维素钠溶液,其余各组小鼠ig相应药物及黄药子醇提物(2 g/kg),1次/d,连续30 d。实验结束后称定小鼠体质量和肝脏质量,计算肝脏指数;测定血浆中天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malonaldehyde,MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、IL-1β水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察肝脏组织病理学变化;TUNEL染色法检测肝脏细胞凋亡情况;采用Western blotting检测肝脏核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、磷酸化核因子-κB p65(phosphorylated nuclear factor-κB p65,p-NF-κB p65)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1(uridine diphosphate-glucuronosyltransferase 1A1,Ugt1a1)、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达;采用qRT-PCR检测肝脏MRP2、P-gp、Ugt1a1的mRNA表达。结果与模型组比较,槲皮素显著降低小鼠肝脏指数及肝功能(P<0.05、0.01),减轻肝脏组织病理变化,降低血浆中MDA水平(P<0.05、0.01),升高SOD活性(P<0.01),降低TNF-α、IL-1β水平(P<0.05、0.01),升高IL-10水平(P<0.01),抑制肝脏p-NF-κB p65、Bax蛋白表达(P<0.05、0.01),促进Nrf2、HO-1及药物转运体蛋白表达(P<0.05、0.01),并上调MRP2、P-gp、Ugt1a1的mRNA表达(P<0.01)。结论槲皮素对黄药子诱导的肝损伤有一定保护作用,其作用机制可能与减轻炎症、抑制细胞凋亡、调控Nrf2及药物转运体的表达相关。

QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法测定大米中30种农药残留

采用QuEChERS前处理技术,结合超高效液相色谱串联质谱联用仪,建立大米中30种农药残留的测定方法。优化样品的提取溶剂、净化方式、液相色谱的分离条件和质谱参数等技术指标,采用优化后的条件,大米样品经体积分数1%乙酸乙腈提取,QuEChERS法净化后,用体积分数0.1%甲酸水(含2 mmol/L甲酸铵)和甲醇为流动相,经Eclipse Plus C18(2.1 mm×50.0 mm,1.8μm)分离,采用电喷雾电离(ESI)和多离子检测模式(MRM)进行检测,基质外标法定量。30种农药的质量浓度在0.001~0.050 mg/L内与峰响应呈线性关系,线性相关系数均大于0.995,定量限(10S/N)在0.02~2.98μg/kg,在3~30μg/kg添加浓度范围内,平均回收率在70.3%~109.8%,相对标准偏差在1.1%~11.4%。

山蜡梅叶挥发油抗急性肺损伤的分子作用机制分析

目的:基于网络药理学和分子对接技术对山蜡梅叶挥发油(CLO)治疗急性肺损伤(ALI)的作用机制进行预测,并通过建立ALI模型对其作用通路进行初步验证。方法:采用气相色谱-质谱法(GC-MS)对CLO进行成分分析;从PharmMapper和SwissTargetPrediction数据库中获取其成分靶点,GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)和DisGeNET获取ALI相关靶点,与高通量基因表达数据库(GEO)获取的ALI差异表达基因(DEGs)在Venny 2.1.0平台上交集分析获得CLO抗ALI的潜在靶点;利用STRING 11.5对潜在靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析;从美国国家生物技术信息中心(NCBI)获取潜在靶点的组织表达情况并构建靶点组织分布图;运用RStudio 4.0.0软件对潜在靶点进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;利用Cytoscape 3.9.1软件构建“成分-靶点-通路”网络图,筛选出关键成分和重点通路并进行分子对接验证;通过脂多糖(LPS)诱导建立ALI模型,测定大鼠血清中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平,免疫组化分析IL-17蛋白在ALI大鼠肺组织中的表达水平。结果:通过GC-MS鉴定出CLO的19个成分,经靶点筛选得到18个潜在靶点,PPI分析后得到15个具有相互作用关系的靶蛋白,进一步分析发现其在肺和胸腺等组织上高度表达,通过分析“成分-靶点-通路”网络图得到关键成分乙酸龙脑酯、芳樟醇、榄香醇、异丁酸香叶酯和核心靶点基质金属蛋白酶13(MMP13)、S100钙结合蛋白A9(S100A9)、脾酪氨酸激酶(SYK)及主要通路IL-17、TNF等;分子对接结果显示,CLO关键成分与IL-17信号通路的MMP13、S100A9结合稳定。药理实验结果证实CLO可以显著降低ALI大鼠血清中的IL-6和TNF-α含量,同时抑制大鼠肺组织中IL-17蛋白的表达水平。结论:CLO可以实现对ALI的治疗作用,保护肺组织,其作用机制可能与降低ALI大鼠血清中的IL-6和TNF-α表达水平、抑制肺组织中IL-17信号通路的活化有关。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定猕猴桃中11种植物生长调节剂残留量

采用超高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS),建立了同时测定猕猴桃中11种植物生长调节剂残留量的方法。样品经酸化乙腈提取后,采用QuEChERS法净化,Cortecs T_(3)柱(2.1 mm×100 mm,2.7μm),以含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸铵溶液和甲醇作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾电离和多反应监测模式进行检测,基质匹配外标法定量。结果表明,11种植物生长调节剂线性关系良好,相关系数均大于0.998,平均回收率在80.5%~107.3%之间,相对标准偏差在2.3%~8.2%之间。

市售外用抗鼻炎类凝胶产品中激素类添加物的检测及调查分析

目的:建立了市售抗鼻炎凝胶类产品中激素非法添加检测方法,对采集的来源于网络销售的22批次产品进行检测,并对暴露风险进行评估,提出监管建议。方法:试样中40个激素类非法添加物采用乙腈提取,高效液相色谱分离,串联质谱检测,基质外标法定量,考察测定方法学,对市售样品进行检测。结果:方法学考察试验表明,40个激素类非法添加物线性关系良好,方法精密度、重复性、回收率符合方法学要求。对市售的22批样品进行检测,总体检出阳性率为45.5%(10/22),其中械字号产品检测7批次,非法添加物检出阳性2批次,涉及非法添加倍氯米松双丙酸酯(1批次)和氯倍他索丙酸酯(1批次);消字号产品检测15批次,检出阳性8批次,涉及非法添加氯倍他索丙酸酯(7批次)和布地奈德(1批次)。结论:监测结果显示,网络销售的械字号和消字号鼻炎治疗及相关产品存在系统性的激素非法添加问题,可能产生系统性的特定人群暴露风险,亟需对网络销售的械字号和消字号鼻炎治疗及相关产品加强监管、整顿。在监测过程中检出3种激素类药物,建议加强对激素类原料药的监管。

双重造影产气剂质量标准的研究与探讨

目的:对双重造影产气剂处方工艺及质量标准相关内容进行研究,结合临床使用需求及样品测定结果,确定合理的方法及限度,为双重造影产气剂质量标准的制定提供参考。方法:采用特征化学反应分别鉴别碳酸氢钠、枸橼酸及钠盐;采用二氧化碳气体发生装置测定产气量,根据临床使用需求,结合样品测定结果,确定产气时间和产气量的方法和限度。对比选择更适用的干燥失重测定法并确定合理的限度;分析确定了微生物限度测定法;确定了溶化性、粒度及装量差异等指标的限度;采用高效液相色谱法测定枸橼酸含量,色谱柱为Phenomenex-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(5∶95),检测波长215 nm,流速0.8 mL·min^(-1),柱温25℃,进样量10μL。结果:鉴别反应专属性强,阴性无干扰;产气量限度为应不少于360 mL,产气时间应在2 min以内;采用常温减压干燥法测定干燥失重,限度为0.2%;确定微生物限度检查方法并完成方法学验证;溶化性、粒度及装量差异检查均符合药典要求;枸橼酸质量浓度在1.6258~3.7936 mg·mL^(-1)范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999),定量限为10.84μg·mL^(-1),精密度、重复性试验的RSD(n=9)均低于1.5%;平均加样回收率为100.2%,RSD为1.8%;3批样品枸橼酸含量测定结果分别为42.7%、42.8%、41.5%。结论:所建立的质量标准项目全面,方法可行,限度合理,可用于双重造影产气剂的质量控制。

口罩中环氧乙烷残留量快速检测试剂盒的研制及应用

样品中的环氧乙烷经盐酸溶液提取并水解成乙二醇,乙二醇经高碘酸氧化成甲醛,用硫代硫酸钠滴定除去过量的高碘酸,甲醛在碱性条件下与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂(AHMT)发生缩合,再被高碘酸钾氧化成6-巯基-S-三氮杂茂[4,3-b]-S-四氮杂苯的紫红色络合物,其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成线性关系,通过色阶溶液进行目视比色,对试样中环氧乙烷进行半定量测定。结果表明所研发的快检试剂盒检验结果与国标方法一致,灵敏度和特异性为100%,假阴性率和假阳性率为0。研制的快检试剂盒可实现口罩中环氧乙烷残留量的快速检测。