龙胆酒炙前后对四氯化碳诱导小鼠肝损伤保护作用的对比研究

目的探讨龙胆Gentianae Radix et Rhizoma酒炙前后对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的急性肝损伤小鼠模型的保肝作用,并通过代谢组学技术揭示其潜在作用机制。方法采用高效液相色谱及紫外分光光度计测定龙胆酒炙前后龙胆苦苷及多糖含量变化。将KM小鼠随机分为对照组、模型组、水飞蓟素(150 mg/kg)组及生龙胆低、中、高剂量(2.5、5.0、10.0 g/kg)组和酒龙胆低、中、高剂量(2.5、5.0、10.0 g/kg)组,每组6只。小鼠连续10 d ig相应药物,除对照组外其余小鼠ip含0.12%CCl4的花生油制备急性肝损伤模型。测定小鼠肝脏指数;采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肝组织病理变化;采用试剂盒测定血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平和肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;采用免疫组化法检测肝组织中磷酸化核因子-κB(phosphorylated nuclear factor-κB,p-NF-κB)表达;采用超高效液相色谱串联飞行时间质谱分析技术(UPLC-Q-TOF-MS)对各组小鼠血清代谢物进行分析。结果生、酒龙胆中龙胆苦苷质量分数分别为3.84%、3.12%,总多糖质量分数分别为3.27%、5.03%。与模型组比较,生、酒龙胆高剂量组小鼠肝损伤明显改善,血清中ALT、AST、ALP活性和TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低(P<0.01),肝组织MDA水平和p-NF-κB表达显著降低(P<0.05、0.01),肝组织GSH-Px活性显著升高(P<0.01);与生龙胆高剂量组比较,酒龙胆高剂量组ALT、AST、ALP活性和TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低(P<0.01),肝组织MDA水平和p-NF-κB表达显著降低(P<0.01),肝组织GSH-Px活性显著升高(P<0.01)。代谢组学研究表明龙胆酒炙前后对肝损伤的保护作用主要涉及甘油磷脂代谢。结论龙胆酒炙后对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠的保肝效果优于生龙胆,龙胆保肝的作用机制可能与甘油磷脂代谢有关。